免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比

当前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法、猪瘟正向间接血凝法以及免疫金标试纸检测法。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点,但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员,且检测时间较长。而金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法,检测一个样品只需8～15min,操作简便、快速、直观、结果容易判定,但其应用检测结果的准确性尚待求证。鉴于这种情况,开展了免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验两种检测方法的比较研究[1]。结果表明,免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合,试验结果可靠。     

三种猪瘟抗体检测方法比较试验研究

为了选择一种方便、准确、经济的猪瘟检测方法,本文通过对猪瘟正向间接血凝法、Dot-ELISA法和免疫金标试纸检测法进行比较试验,其结果依次是:阳性率为90%、86.7%和80%,三者试验结果基本相同,经方差分析,差异不显著(P0.05),检测实验结果可靠。猪瘟抗体金标试纸检测法具有结果直观、操作方便、反映时间短等优势,非常适合我市小型养猪场和散养户,可以及时检测猪瘟免疫状况,制定适合本场(户)的个性化免疫程序,预防猪瘟的发生。     

应用猪瘟抗体免疫金标试纸检测猪瘟抗体的比较试验和改进试验

目前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法,DOT—ELISA检测法、单抗ELISA检测法和猪瘟正向间接血凝法。这些方法虽然都具有微量、特异、准确的优点，但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员，一次检测至少需要4h，对于基层兽医站、兽医诊所和养猪场不适用。猪瘟抗体免疫金标试纸的研制成功开创了猪瘟抗体水平检测的新方法，该方法操作简便，不需要任何仪器设备及复杂的样品处理，检测一个样品只需5～10min，操作简便、快速、准确、灵敏度高、直观、结果容易判定，非常适应于基层兽医站和各养猪场使用。基层兽医站和各养猪场（户）可应用猪瘟抗体免疫金标试纸进行猪瘟抗体监测。但金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法，其应用有待于继续研究，针对这种情况，试验对三种检测方法进行了比较研究，并对金标试纸条法进行了改进研究，使金标试纸条法的检测结果与其他方法的符合率达到了无显著差异的水平。     

猪瘟抗体免疫金标检测试纸的妙用

目前国内对猪瘟抗体水平检测方法有：ELISA检测法，DOT－ELISA检测法和液体猪瘟正向间接血凝法。这些方法虽然都具有微量、特异的优点，但需要条件较好、设备齐全的实验室和经过专门训练、技术水平较高的人员操作，一次检测至少需要４个小时。这对于缺少仪器设备和专门技术人员的基层兽医站、养猪场，就难以开展此项工作。近年来，随着胶体金免疫层析技术及生化制备技术的发展，在人医上用胶体金免疫层析法检测血清中各种抗体已成为现实。２００１年，经过兽医工作者的努力研究，“猪瘟抗体免疫金标试纸”已研究成功，由厦门市格林沃…     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

猪瘟病毒胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

为建立一种猪瘟病毒的快速检测方法，采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金，选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体，对胶体金标记抗体采用低温超速离心法进行纯化，组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测，同时用直接荧光抗体试验和RT—PCR做平行试验。结果显示，用试纸条检测猪瘟病毒，10min左右即可显示结果，试纸条、直接猪瘟荧光抗体试验和RT—PCR的阳性检出率依次为36．36％（4／11）、45．45％（5／11）和72．72％（8／11）。表明，用胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟病毒操作简便，需时短，可以用于猪瘟的流行病学调查。     

用猪瘟免疫金标试纸条诊断非典型猪瘟

目前以非典型、低龄化和散发性为特点的非典型猪瘟在我省各地常发生,对猪瘟抗体检测的方法中,如Dot-ELISA法及间接血凝法等,其特异性和敏感度上具有许多优点,但检测的时间至少需要4h,有的还受到实验室条件的限制.本文应用猪瘟免疫金标试纸条(由福建省畜牧兽医总站动物疫病诊断中心提供),能在(10～15)min出现检测结果.通过对猪瘟免疫抗体的状态的了解,结合流行病学和临床特点,有助于对非典型猪瘟的快速诊断.     

应用免疫金标检测试纸与其它方法检测猪瘟抗体的比较

作者应用免疫金标检测试纸与其它检测猪瘟抗体的方法进行比较，试验结果表明免疫金标检测试纸法检出率与西班牙海博莱公司生产的ELISA试剂盒十分接近，与dot-ELISA也较为接近，与正向间接血凝试验有差异，且与猪圆环病毒等无交叉反应，4℃下保存期大于15个月。     

猪瘟快速诊断金标试纸条的研制及应用

运用胶体金免疫层析技术,建立一种操作简单、特异性好、灵敏度高、适合临床诊断的检测猪瘟病毒的方法。通过采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体,组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测,结果显示,用试纸条检测猪瘟病毒,15min左右即可显示结果,并与荧光抗体检测方法加以比较,结果表明用此种方法可以检测猪瘟病。     

三种猪瘟抗体检测方法的比对试验

为找到猪瘟抗体检测的最佳方法,笔者分别选用正向间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和猪瘟抗体免疫金标试纸条快速检测试验这3种不同方法对猪瘟抗体进行检测,从检测方法、检测成本和准确度3个方面进行结果比较和分析。结果表明,猪瘟正向间接血凝反应(IHA)试剂盒操作简便、准确实用、能最大程度地节约监测成本,是较为理想的猪瘟抗体检测方法。     

猪繁殖--呼吸综合症(PRRS)抗体免疫金标快速检测试纸的研制与应用

应用酶联免疫吸附原理和胶体金层析技术，在玻璃纤维和硝酸纤维素膜的检测线和对照线上分别喷上胶体金PRRSV，PRRSV和兔抗PRRS抗体，从而制作成猪PRRS抗体免疫金标试纸，用该试纸与PRRS—ELISA试剂盒分别对30份猪血清及血液样品进行抗体水平检测，结果完全一致。说明金标试纸法是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法，非常适用于基层兽医站和猪场，特别是进行现场检测和开展大规模疫情普查时使用。     

口蹄疫抗体免疫金标快速检测试纸法的建立

应用免疫学原理与胶体金层析技术，采用双抗原夹心ELISA建立了检测口蹄疫(O型)抗体水平的“口蹄疫抗体(O型)免疫胶体金快速检测试纸法”。应用该法与“口蹄疫正向间接血凝抗原法”对300份猪、鸡、鸭、牛、羊等血液或血清进行口蹄疫抗体水平检测试验，符合率达100％。试验结果显示，该法与间接血凝法一样，具有微量、特异、准确等优点，且操作简易，不需要任何仪器，检测时间短，结果直观，容易判定，适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积口蹄疫抗体普查。     

猪圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在玻璃纤维膜上包被胶体金标记PCV-2抗原(cap蛋白),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原(cap蛋白)和PCV-2单抗,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸条。该试纸条与猪圆环2型抗体酶联免疫检测试剂盒对比,符合率为94.7%,整个实验过程只需15 min,与ELISA试剂盒比较,具有操作方便、快速、直观的优点。     

犬细小病毒胶体金检测试纸条的制备与初步评价

为快速检测及诊断犬细小病毒及其引起的传染性疾病,应用胶体金免疫层析技术．采用柠檬酸三钠还原法制备25nm的胶体金颗粒,标记抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—F1株后包被于玻璃纤维膜作为金标垫,在硝酸纤维素膜上分别包被羊抗小鼠IgG二抗和抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—B6株作为质控线和检测线,将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫分别粘贴于背衬板上制成犬细小病毒抗原胶体金检测试纸条。特异性试验及与血凝试验的对比结果表明,该试纸条具有良好的特异性和敏感性,与进口产品的总符合率为98％。本研究为进一步研发犬细小病毒检测试纸奠定了基础。     

半定量检测新城疫抗体胶体金试纸条的研制

为建立半定量快速检测新城疫抗体方法，本研究利用柠檬酸钠还原氯金酸，形成胶体金颗粒，应用直径20nm的胶体金颗粒标记新城疫抗原，制作了半定量快速测定新城疫抗体的免疫胶体金试纸条。用试纸条检测60份样品，检测结果与血凝抑制试验（HI）法测得结果的符合率为93．8％，最小检测HI滴度为410g2，与其他病毒的阳性血清没有交叉反应，且室温下有效保存期为3个月。试纸条应用方便、快速，适合临床推广以及流行病学调查。     

猪δ冠状病毒胶体金试纸条检测方法的建立

为建立一种方便、快捷、实用的检测猪δ 冠状病毒(PDCoV)方法,本研究利用原核表达猪δ 冠状病毒N 蛋白,以纯化的N 蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞技术研制2株分泌PDCoV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E8、A10。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性及特异性良好,E8亚类为IgG2a,A10亚类为IgG1。以E8作为金标抗体,A10作为检测抗体,兔抗鼠作为质控线抗体,制备猪δ 冠状病毒胶体金检测试纸条,检测猪δ 冠状病毒敏感性为100TCID50,检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪δ 冠状病毒阴性对照均为阴性。本研究建立的胶体金试纸条检测方法敏感性及特异性良好。该检测方法的建立,为猪δ 冠状病毒(PDCoV)流行病学调查提供一种方法,同时为规模化养殖集团及基层兽医组织提供一种检测猪δ 冠状病毒产品。     

牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用

为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条.结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5 μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条.在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较.本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%.快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景.     

猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸的研制

应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记PCV-2抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原和兔抗PCV-2抗体,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸.当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色.整个试验过程只需15 min.试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点.     

柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

为建立一种通过胶体金免疫层析技术快速检测柱状黄杆菌的方法,试验采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20 nm的胶体金颗粒,将其标记纯化的抗柱状黄杆菌单克隆抗体(McAb)制备出金标抗体结合垫。纯化的兔抗柱状黄杆菌多克隆抗体(PcAb)和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)上,制备出胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性及稳定性进行测定。结果显示,该试纸条检测灵敏度为1×10³ CFU,检测时间为3.5 min,制备的试纸条与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌均无交叉反应,且稳定性好。本研究首次成功建立了柱状黄杆菌胶体金快速检测方法,所制备的试纸条具有灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于柱状黄杆菌的检测。