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综述了禽类转基因方面的制作方法、转基因禽类应用研究概况。分别介绍了成熟卵泡微注射法、精子载体转基因法、反转录病毒载体转基因法、受精卵移植法、单细胞受精卵微注射法、胚盘嵌合体法、原始生殖细胞嵌合体法的进展及发展动态。阐明了转基因在宿主基因组中的表达特征及转基因禽类研究中出现的问题,并展望了转基因禽类产品的应用前景。 相似文献
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为研究异种间嵌合体的制作方法及供体和受体的嵌合情况,同时探讨绿色荧光蛋白(pEGFP-N3)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值。本研究利用脂质体介导法将外源pEGFP-N3质粒转入到北京鸭原始生殖细胞(PGCs)中,将转染后的PGCs以微注射法转移至受体北京油鸡的胚下腔,探索转基因鸡鸭嵌合体的制作方法。结果显示:PGCs在转染后6 h开始有外源基因的表达,体外培养24 h后获得了33.6%的转染效率。120枚蛋在整个孵化期中共有33枚鸡胚发育,但最终无孵化成活鸡。在13个鸡胚中检测到有外源基因的存在,阳性率为10.8%。PCR扩增禽类W染色体特异性的重复序列发现,8只嵌合体公鸡的性腺都嵌合了供体异性的细胞。研究结果表明所采用的嵌合体制作方法制备转基因禽类是可行的。鸭PGCs能够迁移并定居到鸡胚性腺中,并有可能在鸡性腺中增殖分化成有功能的配子。 相似文献
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禽类嵌合体技术及其在转基因中应用的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
本文综述了禽类以囊胚层细胞(BC)和原生殖细胞(PGC)为供体细胞的嵌合体制作技术及其在禽类转基因中应用的研究进展。嵌合体技术作为禽类转基因的手段之一具有诸多优点。迄今,禽类BC和PGC为供体细胞的嵌合体制作,体细胞和种系嵌合程度分析的方法已建立,且具有较高的操作成功率和准确性。嵌合体性别分化规律和繁殖机能已作了初步研究。嵌合体技术应用于禽类转基因的方法路线已建立,导入外源基因的供体细胞在形成嵌合 相似文献
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本文介绍了禽类胚胎操作技术方面的概况,对受精卵收集及体外受精、早期胚胎体外培养、人造材料蛋壳培养胚胎、代用蛋壳培养胚胎、嵌合体鸡的生产、转基因鸡生产等的进展及发展进行了综述。 相似文献
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5嵌合体鸡的生产 嵌合体制作最早主要用于发育生物学、细胞遗传学等学科的理论研究。目前,禽类嵌合体的制作中作供体细胞用的囊胚层细胞(BC)和原生殖细胞(PGCs)可以代替受精卵和早期胚胎用于体外遗传操作,已成为禽类转基因研究的一个热点。同时,BC和PGCs还可以在体外进行培养和冷冻保存。基本原理是经过遗传操作的BC细胞或PGCs细胞作供体,嵌合到受体胚胎中。如果是嵌合在生殖细胞,则该嵌合体性成熟后可产生一定比例经过遗传操作的配子。 有关鸡嵌合体方面的报道及鸡嵌合体制作方法、嵌合体的嵌合程度的判断以及怎样提高嵌… 相似文献
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哺乳动物精子载体转基因技术新研究 总被引:1,自引:0,他引:1
精子载体法是以精子作为外源基因的载体,在受精过程中将外源基因导入动物胚胎,从而使外源基因进入子代的基因组中。相对于显微注射法、反转录病毒感染法、胚胎干细胞法等方法而言,它的主要优点是利用精子的自然属性克服了人为机械操作给胚胎造成的损伤,提高了转基因效率,而且操作简便、成本低廉。因而成为转基因动物研究的热点技术。现就精子结合外源基因的机制进行简要介绍,并对发展起来的精子细胞输精管内注射法、曲细精管徽注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。 相似文献
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转基因动物与动物营养 总被引:1,自引:0,他引:1
1 转基因技术 1.1 显微注射法 在众多转基因技术中,显微注射法因其出现早,研究深入,被推荐为一种最经典有效的方法。显微注射法的基本原理是将外源基因直接用显微注射器注入受精卵(雄原核)内,利用受精卵分裂繁殖中DNA的复制过程,将外源基因整合到DNA中进行表达。显微注射法的优点是导人外源基因的效率较高,常能获得良好的表达,操作简单,易于掌握,注射的基因不受片段大小限制,无需载体。此法不足之处为外源基因绝大部分是头尾相连,拷贝数不等地随机整合到受体染色体上,因而其表达水平在转基因个体间常不稳定。另外,显微注射法不能将外源基因导入发育较晚阶段的胚胎细胞;显微注射法所针对的是受精卵,对一些单胎动物或少胎动物,加之低整合率,阳性后代出现的机率很少。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2015,(12)
根据禽类独特的生殖生理特点及特殊的胚胎发育模式,把原始生殖细胞法、显微注射法和慢病毒载体法3种转基因技术结合起来,以期探索出简便、高效的生产转基因禽类新方法。在鹌鹑胚胎发育至第13~15期,血液循环中的原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)数目达到最高值,血管显微注射携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein,eGFP)的人类免疫缺陷病毒I型(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)慢病毒载体,每枚胚胎注入1μL,滴度为1×109 TU·mL-1。80枚鹌鹑种蛋,孵化出雏48只,孵化率为60%;对新生鹌鹑解剖后,在荧光显微镜下检测,其喙部、羽毛、眼部、大脑、血管、心、肝、脾、肺、肾、腺胃、肠系膜、小肠、大肠、输卵管、肌肉及爪上检测到绿色荧光蛋白表达,特别是在性腺中观察到绿色荧光蛋白广泛性表达。G0代28只雄性鹌鹑中,成功采集到21只精液,其中5只个体精子基因组经聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测阳性,阳性率为23.8%(5/21);在5只阳性个体的G1代46只后代中,有6只经PCR及印迹杂交(Southern blot)检测均为阳性,阳性率为13.0%(6/46)。利用胚胎发育至第13~15期血管显微注射慢病毒载体能够有效感染此时期迁移的PGCs,获得性系嵌合体个体,最终成功获得转基因后代。该方法简便、高效的生产出转基因禽类,必将为禽类转基因研究提供一种新的思路和方法。 相似文献
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自 Palmiter等 (1982)把大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵获得“超级巨鼠”以来,世界各国科学家对家畜的转基因研究产生了极大的兴趣,并相继在兔、羊、猪、牛、鸡、鱼等动物上获得转基因成功。家兔既是常用的实验动物,又是重要的经济动物。从其自然特性来看,转基因家兔的研究与培育,不仅可以促进其自身基因表达和调控的研究,而且能为大家畜的转基因研究提供重要的技术依据。 1家兔的转基因技术 1.1显微注射法 显微注射法是采用显微注射仪对受精卵进行注射的一种技术,其基本原理是用精细的显微注射针将外源基因直接注入动物受精卵… 相似文献
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胚胎干细胞是未分化的具有增殖和自我更新能力的细胞,并且能分化成所有类型的体细胞以及生殖细胞。它们提供了早期胚胎分化的体外模型,也是基因操作的重要靶细胞。禽类多能性干细胞培养最重要的应用领域是以干细胞体外遗传修饰、鉴定为技术平台的家禽转基因技术。通过此技术对禽类基因进行遗传修饰与操作,在胚胎发育基础研究、转基因禽类生产及家禽育种等方面有巨大的应用前景。但是禽类多能性干细胞培养的许多基本问题仍亟待解决,如探索其建系的培养条件、揭示其维持多能性和增殖能力的分子机制等。文章综述了禽类多能性干细胞的分离方法、体外分化能力、嵌合体形成以及基因修饰方面的研究进展及目前的研究局限。 相似文献
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转基因鸡制备方法的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
在获得转基因哺乳动物的基础上,由于禽类(鸡)作为生物反应器本身所具有的优势.许多研究者投向制备转基因鸡的研究上。本文简要叙述了常用的制备转基因鸡的方法。其中,结合本实验室的情况,重点介绍了胚盘直接注射法。 相似文献
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1显微注射法转基因猪的研究中最常用的技术方法是核显微注射法。其原理是在显微镜下将外源基因注入到原核期或经重构发育至原核期的受精卵细胞的胚胎原核中,注射的外源基因与胚胎基因组融合,然后进行体外培养,最后移植到受体母畜子宫内发育,这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段,此即转基因后代。显微注射法的缺点是效率低、位置效应(外源基因插入位点随机性)造成表达结果的不稳定性、动物利用率低等。其优点是外源基因的转移率和整合效率都较高。迄今为止,核显微注射法还是最有效、最实用的动物转基因方法。2核移植转基因法… 相似文献