中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖(CAP)对体外抗新城疫病毒(NDV)能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625μg/mL,选择安全浓度范围内的(39.06～625μg/mL)5种浓度的各级多糖,用3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药)检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示,先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP_(50)、CAP_(30)、CAP_t、CAP_(80)和CAP_(70)均能显著抑制NDV感染CEF的能力,两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%;先加多糖后接病毒组CAP_(50)、CAP_(30)能显著抑制NDV感染CEF的作用(P0.05),阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%,其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP_(50)及CAP_(30)的抗NDV活性较强,可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

维药阿魏根多糖体外抗新城疫病毒的作用

用水提醇沉法得到阿魏根总多糖FSPt和4种分级多糖FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70),FSP_(80)用苯酚-硫酸法及红外光谱对阿魏根多糖进行检测。用MTT法测定各多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,选择安全浓度范围内5种浓度的各多糖与新城疫病毒(NDV)用3种不同的加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用MTT法测定各多糖对NDV感染CEF能力的影响。先加多糖后接病毒组和先接病毒后加多糖组FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70)和FSPt均能显著抑制NDV感染CEF;多糖与病毒感作后加组FSP_(70)和FSP_(80)有显著抑制NDV感染CEF的作用(P0.05)。结论:新疆阿魏根多糖具有较好的抗NDV作用,其中FSP_(30)和FSP_(50)对病毒的抑制率较高,FSP_(70)在3种加药方式中均表现出显著且稳定的抗NDV作用,综合考虑,FSP_(50)具有很好的研发前景。     

玉屏风多糖体外抗新城疫病毒效果的研究

以新城疫病毒(NDV)感染鸡胚和鸡胚成纤维细胞,探索玉屏风多糖(Yupingfeng polysaccharides YPF-P)及其含药血清的抗病毒效果。SPF兔采用500 mg/kg体重YPF-P灌服给药,于第1、3、5、7天采集全血,制备不同浓度含药血清;培养SPF鸡成纤维细胞(CEF),分别加入不同浓度的YPF-P及其含药血清,进行细胞毒性试验;采用先加多糖后加病毒、先加病毒后加多糖、多糖和病毒感作后同时加入的3种给药方式,观察YPF-P及其含药血清对病毒的阻断、抑制和直接杀灭作用。结果与正常对照组相比,不同浓度YPF-P(0.625、1.25、2.5、5、10 mg/m L)和7 d的YPF-P含药血清的CEF细胞活性均显著增强(P<0.05或P<0.01)。CEF培养24 h后,YPF-P抑制病毒作用明显,与NDV对照组相比差异极显著(P<0.01);3种给药方式与NDV对照组相比,含药血清组细胞活性均极显著升高(P<0.01)。表明YPF-P及其含药血清均对CEF无毒副作用,且可显著增强细胞活性;YPF-P及其含药血清有较好的抑制病毒毒性的作用。     

中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖（CAP）对体外抗新城疫病毒（NDV）能力的影响，本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖，通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测，采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度，多糖的安全浓度统一为625 μg/mL，选择安全浓度范围内的（39.06~625 μg/mL）5种浓度的各级多糖，用3种加药方式（先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药）检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示，先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP₅₀、CAP₃₀、CAP_t、CAP₈₀和CAP₇₀均能显著抑制NDV感染CEF的能力，两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%；先加多糖后接病毒组CAP₅₀、CAP₃₀能显著抑制NDV感染CEF的作用（P<0.05），阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%，其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性，其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP₅₀及CAP₃₀的抗NDV活性较强，可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

葫芦多糖体外抗鸡新城疫病毒作用的研究

为研究葫芦多糖抗新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV） 活性,本试验采用水提醇沉法提取葫芦总多糖及4种分级多糖,通过苯酚-硫酸法及红外光谱对葫芦多糖进行检测,MTT法测定各级多糖对鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度,多糖的安全浓度统一定为78.125 μg/mL,以3种加药方式（先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药）,检测葫芦多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果表明,葫芦总多糖及4种分级多糖均具有抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用及直接杀灭作用强于对NDV的阻断作用。70%、80%梯度醇沉的葫芦多糖（LSP₇₀、LSP₈₀）及总多糖（LSP_t）,抑制作用下的病毒抑制率分别为40.41%、44.54%、61.85%,杀灭作用下的病毒抑制率分别为44.74%、58.76%和59.38%,阻断作用下对NDV的抑制率,其中LSP₈₀组最高达37.14%,其余各组均低于25%。综上可知,70%、80%梯度醇沉的葫芦多糖及葫芦总多糖的抗NDV活性较好,可作为进一步研究的材料。     

纳米银体外抗新城疫病毒作用及机制研究

为研究纳米银体外抗新城疫病毒(NDV)的作用,并初步探讨其作用机制,运用细胞培养技术和MTT方法,分析纳米银对NDV感染HeLa细胞的预防、治疗作用以及对NDV的直接灭活作用;通过血凝抑制试验和神经氨酸酶活性抑制试验,观察纳米银对血凝素—神经氨酸酶活性物质的影响;采用透射电镜负染技术观察纳米银对新城疫病毒形态结构的直接影响.结果显示:NDV可通过不同途径感染HeLa细胞,纳米银组的细胞存活率与NDV对照组比较有明显的统计学差异(P＜0.01);在体外将NDV和纳米银作用不同时间后,NDV血凝效价明显降低;纳米银对NDV神经氨酸酶活性的抑制率均高于80％,而病毒对照组和溶剂组的抑制率均低于20％;透射电镜观察表明,纳米银对NDV形态结构的破坏作用随着时间的延长而增加.结果表明,纳米银在体外对NDV具有明显的抑制作用,其抑制机制可能与纳米银破坏病毒粒子结构及抑制神经氨酸酶活性有关.     

一枝蒿不同粗提物抗鸡新城疫病毒体外试验

为研究一枝蒿的多糖、黄酮、多酚、生物碱、挥发油的抗鸡新城疫病毒的活性,多糖采用水煎醇沉法、黄酮采用浸提法、多酚采用超声法、生物碱采用超生辅助提取方法、挥发油采用水蒸气蒸馏法提取并测定含量。通过MTT法测定一枝蒿各成分对鸡成纤维细胞的安全浓度。在安全浓度以下5个浓度梯度范围内新城疫病毒(NDV)与药物以3种方式加到单层鸡成纤维细胞(CEF)上,即先加药后攻毒(阻断作用)、先攻毒后加药(抑制作用)、病毒和药物同时作用一段时间之后同时加入(直接杀灭作用),观察细胞的病变程度。细胞培养72h后用MTT法测定细胞D值的变化,用于评价药物对NDV感染细胞能力的影响。结果显示:多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油均有一定程度的抗病毒活性,其中多糖对新城疫病毒的阻断作用及直接杀灭作用强于抑制作用。它们在抑制作用下的病毒抑制率分别为44.30%,11.00%,31.00%,12.94%和42.35%;直接杀灭作用下的病毒抑制率分别为27.27%,10.64%,22.85%,24.93%和10.38%;阻断作用下的病毒抑制率为33.33%,18.90%,35.19%,25.56%和40.74%。综上可知,多糖的抗鸡新城疫活性较好,其次是挥发油,可以作为进一步的研究材料。     

“芪蓝饮”及不同提取成分对NDV在鸡胚成纤维细胞中增殖的影响

为评价新兽药"芪蓝饮"及其不同提取成分的体外抗病毒活性,本试验通过细胞病变抑制法和MTT比色法检测了各提取成分对新城疫病毒(NDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程的影响。结果显示,在3种加药方式中"芪蓝饮"原药(QLY)直接杀灭NDV的作用最强,其抑制率最高为128.85%;原药总多糖(TPS)干扰NDV的增殖作用最强,其抑制率最高为130.23%;原药总萜类(TT)直接杀灭NDV的作用最强,其抑制率最高为146.15%;板蓝根总生物碱(RIA)及其水溶性部位(RIAw)和酸性部位(RIAa)对抗NDV的方式是多环节的。综上所述,"芪蓝饮"及其提取成分表现出较强的干扰NDV增殖和直接杀灭NDV的作用,而阻断作用稍弱。     

维药阿里红5种活性成分体外抗鸡新城疫病毒作用

为了研究维药阿里红各活性成分抗鸡新城疫病毒(NDV)的活性,本试验分别提取了阿里红多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油并测定其含量。通过MTT法测定阿里红各活性成分对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度。以3种加药方式将药物与NDV加入已制备好的鸡胚成纤维细胞上,即先加药后接种病毒,先接种病毒后加药,病毒和药物混合作用后加入,以检测各组分对NDV的阻断作用、抑制作用以及直接杀灭作用。结果表明,多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油均有抗病毒活性,其中多糖对NDV的直接杀灭作用及抑制作用强于对NDV的阻断作用。多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油在抑制作用下的病毒抑制率分别为49.12%,39.64%,42.45%,40.00%,18.59%;杀灭作用下的病毒抑制率分别为45.35%,35.71%,38.57%,35.71%,41.07%;阻断作用下的病毒抑制率分别为15.58%,8.57%,32.98%,43.11%,31.42%。综上可知,维药阿里红的活性成分多糖和生物碱的抗NDV活性较好,可以作为进一步研究的材料。     

7种中药多糖对F81细胞抵抗犬细小病毒感染能力的影响

本研究旨在观察7种中药多糖:川明参多糖(CPS),川牛膝多糖(RCPS),杜仲多糖(EOPS),川白芷多糖(ADPS),川麦冬多糖(OJPS),川黄柏多糖(PCPS),川佛手多糖(CMPS)体外对犬细小病毒(CPV)感染细胞能力的影响。分别将7种中药多糖通过先加多糖再接种病毒、病毒和多糖感作后加入和先接种病毒再加多糖3种加药方式加入到培养24h的F81细胞中,在病毒接种后72h通过MTT法测定F81细胞的活性以评价各中药多糖对F81细胞抵抗犬细小病毒感染的影响。结果表明,在第1种加药方式下,CPS、RCPS、EOPS、ADPS抗CPV作用较强;在第2种加药方式下0JPS、PCPS、CMPS的抗病毒作用最为显著;在第3种加药方式下RCPS、ADPS、PCPS抗病毒作用最为显著。结果提示,7种多糖均能不同程度地抑制病毒感染F81细胞,部分中药多糖的抗病毒作用与加药方式有关且呈一定的量效关系。     

7种中药成分对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

将氧化苦参碱、甘草酸、黄芪多糖、栀子苷、绿原酸、虎杖苷和木犀草素等7种中药成分稀释成安全浓度范围内的高、中、低3种浓度,分别与NDV以3种方式加入到培养成单层的CEF的培养体系中,用MTT法测定NDV感染细胞能力的变化.结果表明,先加中药后加病毒时,氧化苦参碱、甘草酸、黄芪多糖的高、中浓度、栀子苷高浓度显著抑制病毒感染细胞;先加病毒后加中药时,氧化苦参碱的高、中浓度、黄芪多糖的中、低浓度显著抑制病毒感染细胞;中药与病毒同时加入时,氧化苦参碱的高、中浓度,黄芪多糖的高、中、低浓度和甘草酸高浓度显著抑制病毒感染细胞.绿原酸、虎杖苷和木犀草素3种中药成分无论是哪种加药方式均无抑制NDV感染细胞的作用.     

藏药材抗新城疫病毒的体外试验研究

为筛选抗新城疫病毒藏药复方的组分药,将安全浓度范围内的藏菖蒲、红景天、灵芝菌柄、灵芝菌盖、决明子、天冬、龙胆、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味松石丸和二十五味珍珠丸的煎液和鸡新城疫病毒（NDV）分别以3种方式（先加藏药后接种病毒、先接种病毒后加藏药、藏药和病毒感作后同时加）加入到鸡胚成纤维细胞（CEF）的培养体系中,72h后用MTT法测定各藏药对NDV感染CEF能力的影响。结果表明,多数藏药均能显著抑制NDV感染细胞,且与加药方式和药物浓度有一定关系。藏菖蒲、灵芝菌盖和降香在3种加药方式中均呈现显著效果,可作为抗NDV藏药复方的组分药。     

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID₅₀,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×2¹⁰ U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。     

The interaction between Newcastle disease virus and Escherichia coli endotoxin in chickens.

The interaction between Newcastle disease virus (NDV) and Escherichia coli endotoxin was studied in cell cultures, embryonated chicken eggs, and 8-wk-old chickens. These interactions were evaluated according to the induction of specific or nonspecific resistance in the host system and the virus titer produced in both chicken embryos and chickens. The endotoxin of E. coli induced a decrease in the size of the bursa of Fabricius in live chickens. Escherichia coli endotoxin given intravenously induced plasma antiviral activity in chickens that was interpreted to be interferon, as detected in a vesicular stomatitis virus plaque reduction assay. Endotoxin failed to produced toxic effects in the chicken embryo fibroblasts (CEFs) or to result in any antiviral effect because no change was noted in the number of NDV plaques formed in CEF cultures. When endotoxin was given 3 days before NDV exposure in chickens, the virus titers were significantly (P < 0.05) decreased from a peak of 10(2) to 10(0.18), 10(2.5) to 10(0.18), and 10(2.5) to 0 in the spleens, lungs, and kidneys, respectively, at 72 hr post-NDV inoculation. When endotoxin was given 24 hr after NDV inoculation, the NDV titer significantly (P < 0.05) increased from 10(2.0) to 10(3.5), 10(2.5) to 10(6.5), 10(2.5) to 10(4.5), 0 to 10(2.5) in the spleen, lungs, kidneys, and liver, respectively, at 72 hr after NDV inoculation. In chicken sera, hemagglutination inhibition (HI) titer to NDV was significantly (P < 0.05) enhanced from 1164 to 3127 when endotoxin was given prior to virus inoculation. However, there was a decrease in HI to NDV from 1164 to 727 without a significant difference in chicken sera when NDV was given prior to endotoxin inoculation.     

列当多糖对鸡新城疫病毒在鸡成纤维细胞中增殖的抑制作用

为研究列当多糖抗新城疫病毒(NDV)活性,用水提醇沉法提取列当总多糖及4种分级多糖,并通过苯酚硫酸法及红外光谱对列当多糖进行检测。通过MTT法测定各级多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度。以3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加药,检测列当多糖对新城疫病毒的阻断作用、抑制作用及直接杀灭作用。结果表明,列当总多糖及4种分级多糖均具有抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用及阻断作用强于对NDV的直接杀灭作用。50%、80%梯度醇沉的列当多糖(OSP50、OSP80)及总多糖(OSPt),阻断作用下的病毒抑制率分别为19.50%、33.10%和22.30%,抑制作用下的病毒抑制率分别为19.00%、21.90%和22.60%,杀灭作用下对NDV的抑制率分别为,14.70%、17.50%和13.30%,其余各组多糖阻断作用、抑制作用及杀灭作用下的病毒抑制率均低于上述3组多糖。说明OSP50、OSP80及OSPt的抗NDV活性较好,可以作为进一步研究的材料。     

蜂胶黄酮对宿主细胞抗病毒能力的影响

本试验旨在研究蜂胶黄酮对宿主细胞抗病毒能力的影响。首先采用MTT法测定蜂胶黄酮对宿主鸡胚成纤维细胞（CEF）和PK-15细胞的安全浓度;然后将蜂胶黄酮从最大安全浓度250 μg/mL开始倍比稀释至15.6 μg/mL共5个浓度,将蜂胶黄酮分别与新城疫病毒（NDV）、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）及猪细小病毒（PPV）一起加到相应长成单层的宿主细胞CEF或PK-15中,在感染后24、48和72 h分别用MTT法测定宿主细胞的存活率,代表蜂胶黄酮提高宿主细胞抗病毒能力的指标。结果显示,蜂胶黄酮可显著提高宿主细胞抗病毒能力,这种活性与其剂量正相关,即剂量越大作用越好。蜂胶黄酮提高宿主细胞抗有囊膜病毒NDV和TGEV作用主要体现在病毒感染的前期,而提高宿主细胞抗无囊膜病毒IBDV和PPV作用主要体现在病毒感染的后期。提示蜂胶黄酮可用于NDV和TGEV的预防及IBDV和PPV的治疗。     

Study on Antiviral Effect of Polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.on NDV in vitro

To research on polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.against Newcastle disease virus (NDV).Total polysaccharide and four different solvent extractions of Lagenaria siceraria (Molina) Standl.were extracted by the methods of hot water extraction and ethanol precipition in this study.The content of polysaccharide was measured by phenol-sulfuric acid method and infrared spectroscopy method.The safe concentration and growth of chick embryo fibroblast (CEF) were assayed by MTT method,in order to facilitated the comparison under the same level,the safe concentration was united as 78.125 μg/mL.Under the safety range of concentration,detected the block-virus activity,anti-virus activity and virus-killing activity of polysaccharides through the ways of pre-adding polysaccharides,post-adding polysaccharides and adding polysaccharides with NDV.The results showed that the direct inactivation and propagation inhibition activity of total polysaccharide and four different solvent extractions were stronger than anti-absorption function.Anti-virus inhibition rate of 70%,80% gradient alcohol precipitation of polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.(LSP₇₀,LSP₈₀) and total polysaccharide (LSP_t)were 40.41%,44.54% and 61.85%,virus-killing inhibition rate were 44.74%,58.76% and 59.38%.LSP₈₀ had the highest virus inhibition rate as 37.14% in the block-virus activity of those five polysaccharides.In summary,70%,80% gradient alcohol precipitation and total polysaccharide in polysaccharides possessed better activity and would be as the materials for further research.     

姜黄素抑制轮状病毒感染猪肠上皮细胞的作用研究

本研究旨在探讨姜黄素对猪轮状病毒(PRV)感染猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)的抗病毒作用。以IPEC-J2细胞为试验对象,分别设置阴性对照组、感染PRV(感染复数=0.1)组和感染PRV后姜黄素(20μmol/L)处理组。在感染PRV后观察细胞病变,利用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和病毒滴度测定法检测PRV在IPEC-J2细胞内的复制与增殖。结果表明:与阴性对照组相比,1)PRV感染导致IPEC-J2细胞病变,显著降低细胞活力(P<0.05),极显著上调细胞内ROS含量(P<0.01);2)姜黄素可显著抑制PRV在细胞内的复制与增殖(P<0.05);3)在PRV吸附细胞阶段添加姜黄素显著抑制了病毒的复制与增殖(P<0.05);4)姜黄素在感染前与PRV直接孵育能显著降低感染后病毒的滴度(P<0.05);5)PRV感染显著提高了细胞内黑色素瘤分化相关基因5、干扰素诱导蛋白44样蛋白抗体和干扰素β的mRNA相对表达量(P<0.05),显著降低了细胞内Toll样受体适配器分子1、线粒体抗病毒信号蛋白和髓样分化因子88的mRNA相对表达量(P<0.05),而添加姜黄素能显著降低或提高这些受病毒影响的免疫相关因子的表达(P<0.05)。综上所述,本研究证实姜黄素可抑制PRV对IPEC-J2细胞的感染与复制,可为预防和治疗仔猪病毒性腹泻提供重要的参考。