响应面法优化前包被屎肠球菌超声计数条件的研究

发酵前包被微胶囊化培养的屎肠球菌具有耐受性强、效价稳定的优点,但其活菌数检测难度阻碍了其推广使用。本研究以前包被屎肠球菌为原料,综合考虑操作方便、时间及计数结果,优化前包被肠球菌活菌超声振荡计数方法,选择不同试管的超声时间、超声功率为自变量,总菌落数(cfu/g)为响应值,采用Box-Behnken设计方法,研究各自变量及其交互作用对计数结果的影响。结果显示,响应面法优化所得最佳计数条件为:原菌液梯度稀释后,超声功率240 W、10~(-1)超声7 min、10~(-2)超声45 s。此条件下,前包被屎肠球菌计数结果最佳,为5.53×10~(11) cfu/g。本结果与预测值相近,故选用此方法作为后期前包被屎肠球菌活菌计数方法。     

包被粪肠球菌热稳定性能评价

研究采用烘箱干热法,对比包被粪肠球菌与普通粪肠球菌,在不同温度(70、85及100℃)下,分别处理不同时间(0、5、10、15、30及60 min)后的存活率,发现包被后的粪肠球菌存活率分别上升13.6%、13.7%和17.0%,可见微囊包被技术的确可提升粪肠球菌的耐高温性能。对比饲料制粒过程中不同制粒温度(65及75℃)与饲料中的包被粪肠球菌烘箱干热处理后的存活率发现:制粒温度为65℃时粪肠球菌存活率相当于饲料在烘箱75℃下热处理28 min,85℃热处理21 min或100℃热处理13 min;制粒温度为75℃时粪肠球菌存活率相当于饲料在烘箱75℃下热处理53 min,85℃热处理41 min或100℃热处理28 min;因此,将饲料中包被粪肠球菌添加至烘箱干热处理试验可快速对制粒过程中粪肠球菌的耐受性进行评估。     

猪肠源粪肠球菌的体外耐受性研究

对仔猪直肠内容物分离的粪肠球菌进行体外耐受性研究。以粪肠球菌体外存活率为考察指标,通过耐酸性、耐胆盐、耐高温试验来研究菌株的体外培养特性。耐酸性试验采用pH为2.0、3.0和7.0培养基培养菌株3h,其存活率分别为2.18%、121.01%和134.02%;胆盐浓度在0.1%~0.3%培养菌株,生长良好且存活率均在70%以上;耐高温实验是在50℃和60℃处理30min后存活率菌小于50%,菌株对高温敏感。结果表明,仔猪肠源粪肠球菌有较好的耐酸性及耐胆盐能力,但对高温敏感。     

微胶囊化粪肠球菌稳定性影响因素研究

研究针对粪肠球菌制剂稳定性差的问题,采用微胶囊法对粪肠球菌进行包埋,通过真空低温冷冻干燥法干燥,制备微胶囊原菌粉,研究储藏温度、载体和残余水分等因素对微胶囊化粪肠球菌稳定性的影响。试验结果表明:采用微胶囊技术能显著提高粪肠球菌的稳定性,延长保质期;随着储藏温度的升高,微胶囊化粪肠球菌存活率降低,4~25℃粪肠球菌存活率相对较高,当储藏温度达37℃后,存活率急剧下降;使用混合载体,水分为4%,载体比例为玉米淀粉∶沸石粉=2∶1时,粪肠球菌存活率最高,且较为经济;微胶囊化粪肠球菌组与对照组相比,具有更强的耐酸、耐高温和耐胆盐特性,抗逆性强。     

乳化凝胶化法微囊化益生菌抗胁迫作用研究

本试验旨在研究基于乳化凝胶化基础上制备的微囊化布拉迪酵母菌(Saccharomyces boulardii)和粪肠球菌(Enterococcus faecium)对储藏、高温、胃液和肠液等胁迫作用的抵抗力。以未包被的菌粉为对照,高温热处理的方法为烘箱干热法,温度为110和130℃,各处理30、45和60 s;在配制好的模拟胃液和肠液中,各处理30、90和180 min。结果表明:1)常温条件下储存5个月,微囊化布拉迪酵母菌和微囊化粪肠球菌的存活率比菌粉组分别高出34.63%和19.46%。2)微囊化过程提高了益生菌,尤其是粪肠球菌在110和130℃高温下的耐受性[与菌粉组差异显著(P0.05)]。3)模拟胃液处理30 min后,与菌粉组相比,微囊化的布拉迪酵母菌和微囊化粪肠球菌存活率分别提高了59.18%和51.80%,处理180 min后,分别提高了57.76%和46.73%。4)模拟肠液处理180 min,与菌粉组相比,微囊化布拉迪酵母菌和微囊化粪肠球菌的耐受力分别提高了26.89%和21.16%。5)50 min时微囊化布拉迪酵母菌和微囊化粪肠球菌的释放率分别可达71.74%和87.47%。综合得出,基于乳化凝胶化原理上的微胶囊技术可显著增强布拉迪酵母菌和粪肠球菌对储藏、高温、胃液和肠液等体内、外不良环境的抗性。同时,表现出了体内缓慢释放的特点。     

饲粮中添加屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响。试验选用150只1日龄健康罗斯308肉鸡，随机分为3个组，每组5个重复，每个重复10只鸡（公母各占1/2）。对照组饲喂基础饲粮，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组分别在基础饲粮中添加500和1 000 mg/kg屎肠球菌菌粉（活菌数为3.46×108CFU/g）。试验期28 d。结果表明：1）与对照组相比，饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡各阶段生长性能均无显著影响（P>0.05）。2）与对照组相比，高剂量屎肠球菌组肉鸡血清总蛋白含量显著提高（P<0.05），血清磷含量有提高的趋势（P=0.054）；低剂量屎肠球菌组肉鸡血清钙含量显著降低（P<0.05）。3）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度与隐窝深度比值显著提高（P<0.05），十二指肠隐窝深度显著降低（P<0.05）。4）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡血清和十二指肠过氧化氢含量显著降低（P<0.05），空肠过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶...     

热灭活屎肠球菌及其活菌对仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数的影响

为了研究屎肠球菌对哺乳期仔猪的益生作用,试验选用健康的杜×长×大新生仔猪9窝,将其随机分为对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组,每组3窝。从出生开始至6日龄,对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪分别经口灌服无菌脱脂乳、含屎肠球菌热灭活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳和含屎肠球菌活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳,10 m L/(头·d)。仔猪于7日龄开始饲喂教槽料,21日龄断奶。分别于7日龄和21日龄时从每窝中选出1头接近平均体重的仔猪屠宰,取肝脏和脾脏,采集空肠黏膜,计算并分析仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数。结果表明:与对照组相比,灭活菌和活菌都不影响哺乳期仔猪的体重和日增重(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪第3周的腹泻率都下降至0,整个哺乳期腹泻率分别下降77.44%(P=0.078)和92.03%(P0.05),两个益生菌组间差异不显著(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组的21日龄仔猪空肠麦芽糖酶活性分别增加9.67倍(P0.05)和11.29倍(P=0.01),活菌还显著提高脂肪酶含量1.09倍(P0.05),但两个益生菌组间差异不显著(P0.05);灭活菌不影响仔猪肝脏指数和脾脏指数,活菌也不影响肝脏指数及7日龄仔猪脾脏指数,但显著降低21日龄仔猪脾脏指数(P0.05)。说明热灭活益生屎肠球菌对哺乳期仔猪的生长、腹泻率、小肠消化酶活性以及肝脏和脾脏指数都没有负面影响,而且在很大程度上与活菌的作用相似,具有替代活菌的潜力。     

屎肠球菌CCTCCM2017191发酵培养基的优化

为了实现屎肠球菌CCTCCM2017191的高密度工业化生产,必须提高该屎肠球菌的发酵活菌量,因此对其发酵培养基进行了优化筛选。首先在MRS培养基的基础上进行单因素试验以确定适合该屎肠球菌生长的最优pH值和培养温度以及该菌的最适发酵碳源和氮源;再利用Plackett-Bur-man试验设计分析筛选培养基成分中影响屎肠球菌发酵活菌数的显著影响因子,设计最陡爬坡试验逼近显著因子的最大活菌数响应区域,最后采用中心复合序贯试验设计(central composite circum-scribed design,CCC)和响应面分析法得到显著影响因子的最优配比浓度。获得发酵优化培养基配方为:麦芽糊精20 g/l、酵母浸粉77.22 g/l、结晶乙酸钠6.42 g/l、柠檬酸二铵2.0 g/l、磷酸氢二钾2.0 g/l、无水硫酸镁0.2 g/l、硫酸锰0.04 g/l、吐温-80 0.99 g/l。培养基pH值为8.0,培养温度为37℃。经验证,优化后培养基的发酵菌液活菌数可达6.136×109CFU/ml是相同条件下MRS培养基发酵菌液活菌数的4.63倍,优化方案及所得回归模型切实可靠,成功实现了该屎肠球菌CCTCCM2017191的高密度发酵培养。     

饲用屎肠球菌M74的生物学特性研究

[目的]对菌株M74进行鉴定和生物学特性研究,为菌株M74的临床应用提供参考。[方法]利用16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定,通过单因素试验研究菌株M74对酸、胆盐、高温及抗生素的耐受性,然后测定其产酸量及考察益生菌之间的相互作用,最后研究其对致病菌的抑菌性能。[结果]经16S r DNA序列分析,该菌株为屎肠球菌;菌株M74的耐受性结果表明,在p H值为3的条件下保持3 h后,存活率为11.57%,在牛胆盐浓度为0.3%的条件下保持3 h后,菌株存活率为0.64%,在60℃处理10 min后,菌株存活率仍能达到25.42%,同时该菌株对不同抗生素呈现不同程度的抗性;产乙酸含量最高,达到4 620.15μg/m L;菌株M74作为早期定植菌时,对其他益生菌有抑制作用;菌株M74对致病性大肠杆菌和沙门菌有很好的抑制作用。[结论]屎肠球菌M74有较好的生长耐受性,能抑制致病性菌株的生长,具有较好的应用价值。     

2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究

研究了分离自仔猪肠道的乳酸菌L5和L7对低pH值、胆盐的耐受性。结果表明，pH值在2．5、3．5和4．5时，L5菌株处理150min对其无显著影响，在pH1．5时经30min处理，L5仍可维持较高的存活率；L7菌株在pH3．5和4．5条件下经150min处理后可保持较高的存活率，而在pH1．5和2．5条件下经处理30min后菌株数量显著下降。胆盐对L5和L7菌株的生长有一定影响，但低浓度短时间内影响较小。在同一胆盐浓度下，随培养时间的增长，活菌数下降。当胆盐浓度高于0．2％时，L5和L7菌株的生长极差。热稳定性试验结果表明，L5菌株在50℃下可成活，且呈正常生长趋势，但其对80℃及以上的耐热能力显著降低。     

日粮中添加益生菌对崇仁麻鸡生产性能的影响研究

试验研究了日粮中添加乳酸粪肠球菌和乳酸粪肠球菌复合菌对崇仁麻鸡B系的生长性能的影响。选用刚出壳、体重相近、健康的崇仁麻鸡B系雏母鸡270只,按要求分成3组,每组90只,分别饲喂乳酸粪肠球菌及复合菌,饲养试验时间为58 d。结果表明:乳酸粪肠球菌组的料肉比分别降低了2.31%,而复合菌组的料肉比降低了1.15%。     

一株乳酸菌培养条件优化及对胆盐和酸性环境耐受性的研究

对一株猪源乳酸菌HEW-A208的培养条件进行优化,并研究其对胆盐及酸性环境的耐受性。通过对菌落数、菌落大小和溶钙圈大小3项指标进行检测,确定乳酸菌分离培养基为最优培养基;在p H2.5、3.5和4.5环境下处理150 min对该菌无显著影响,在p H 1.5环境下处理30 min该菌仍保持较高的存活率;胆盐对该菌生长有一定影响,但短时间内低质量分数处理影响较小。相同胆盐质量分数下,培养时间越长,活菌数越低,胆盐质量分数高于0.2%时该菌生长基本停滞。     

葡萄糖氧化酶及粪肠球菌对肉仔鸡生长性能、血液抗氧化指标及养分表观消化率的影响

试验旨在研究葡萄糖氧化酶(GOD)及结合粪肠球菌对肉鸡生长性能、血液抗氧化指标及养分表观消化率的影响。选用960只1日龄健康的AA肉仔鸡,随机分为6组,即抗生素组(基础日粮+20 mg/kg抗敌素+15 mg/kg速大肥)、处理1组(基础日粮+100 mg/kg GOD)、处理2组(基础日粮+200 mg/kg GOD)、处理3组(基础日粮+400 mg/kg GOD)、处理4组(基础日粮+100 mg/kg GOD+25 mg/kg粪肠球菌)、处理5组(基础日粮+200 mg/kg GOD+25 mg/kg粪肠球菌),每组8个重复,试验期42 d。结果表明:GOD对肉仔鸡生长性能的影响与其添加水平有关,且与粪肠球菌存在协同作用,处理5组的生长性能基本上能达到抗生素组的水平;GOD与粪肠球菌对血清SOD、CAT和GR活性及MDA含量无显著影响,但可提高GSH-Px活性,其中处理5组达显著水平(P0.05);随着GOD添加水平的增加,干物质、能量和粗蛋白质的表观消化率逐步得到改善,在GOD的基础上添加粪肠球菌,养分表观消化率得到进一步改善。以上结果提示,饲粮添加GOD及粪肠球菌可在不同程度上改善肉仔鸡生长性能、抗氧化能力和养分表观消化率,且GOD与粪肠球菌存在协同作用,以200 mg/kg GOD+粪肠球菌的处理效果最接近于抗生素组。     

不同益生菌对断奶犊牛生长性能及瘤胃发酵参数的影响

为了研究不同益生菌对断奶犊牛生长性能及瘤胃发酵参数的影响,试验采用单因素完全随机试验设计,选取24头自然分娩、体重相近、3～4月龄左右的断奶西门塔尔犊牛随机分为4组(工程菌组、屎肠球菌组、复合菌组以及对照组),每组6个重复,每个重复1头牛,对照组正常饲喂基础日粮,工程菌组饲喂基础日粮+WB800N-CC31工程菌,屎肠球菌组饲喂基础日粮+屎肠球菌,复合菌组饲喂基础日粮+WB800N-CC31工程菌和屎肠球菌的复合菌(复合菌中工程菌与屎肠球菌比例为1∶1),各试验组中每头牛益生菌的添加量为2×10~(10) cfu/d,试验期为60 d,测定生长性能和瘤胃发酵参数(第30,60天)。结果表明:在整个试验期(0～60 d),各益生菌组对断奶犊牛日增重、采食量、料重比均无显著影响(P0.05),但各益生菌组犊牛日增重均高于对照组,料重比均低于对照组。在试验期第30天时,各益生菌组瘤胃pH值、菌体蛋白和氨态氮浓度、挥发性脂肪酸含量与对照组没有显著性差异(P0.05);在试验期第60天时,屎肠球菌组氨态氮浓度显著大于对照组(P0.05),而其他指标没有显著性差异(P0.05);在试验全期,各益生菌组犊牛瘤胃pH值有降低的趋势,乙酸以及总挥发性脂肪酸有提高的趋势。说明饲喂益生菌可以提高犊牛的生长性能,改善瘤胃发酵环境,对犊牛的健康生长有益。     

益生菌对断奶仔猪生长表现、微生物区系和小肠黏膜结构的影响

为研究不同益生菌对断奶仔猪生长表现、微生物区系和小肠黏膜绒毛结构的影响,试验选用7kg杜×(长·大)三元杂种断奶仔猪112头,按体重、性别、窝别分至如下7个处理组:(1)对照组(不添加益生菌);(2)200×10-6肠球菌制剂组;(3)1000×10-6肠球菌制剂组;(4)200×10-6乳杆菌制剂组;(5)1000×10-6乳杆菌制剂组;(6)200×10-6肠球菌与乳杆菌的混合菌制剂组;(7)1000×10-6肠球菌与乳杆菌的混合菌制剂组。每处理2个重复(栏),每重复8头猪。测定断奶后两周和试验全期仔猪的生长表现,以及断奶两周末仔猪胃内容物pH、回肠内容物微生物区系、小肠黏膜绒毛高度与隐窝深度。结果表明,1)在断奶后两周内,益生菌极显著增加仔猪日采食量与料重比,各试验组均值分别较对照组高14%和10%(P<0.01),益生菌有提高仔猪日增重的趋势(P=0.0901),其中,1000×10-6乳杆菌制剂组仔猪日增重较对照组增加20.6%(P<0.05);在试验全期(7～19kg),益生菌降低仔猪采食量(P<0.05),而对日增重与料重比没有影响(P>0.05)。2)益生菌对断奶后两周末仔猪胃内容物pH(P=0.8418)、回肠大肠杆菌(P=0.5039)及乳酸杆菌数量(P=0.1397)均无显著影响。3)益生菌对仔猪绒毛高度/隐窝深度比值影响显著,各试验组均值较对照组增加17.7%(P=0.0238),并有增加小肠黏膜绒毛高度的     

屎肠球菌T013复合制剂饲喂生长猪的效果研究

试验旨在研究日粮中添加屎肠球菌T013复合制剂对生长猪的生产性能、粪便微生物、环境指标及血清指标的影响。选用体重在(31.75±3.78)kg的杜×长×大三元杂交仔猪120头,随机分成对照组(基础日粮)、试验Ⅰ组(基础日粮中添加3%屎肠球菌T013复合制剂)和试验Ⅱ组(基础日粮中添加6%屎肠球菌T013复合制剂),每组4个重复,每个重复10头猪,试验期为28 d。结果表明,屎肠球菌T013复合制剂能增加生长猪日采食量和日增重,降低料重比,但差异不显著(P＞0.05),并且能显著减少腹泻率(P＜0.05);试验Ⅱ组能够极显著降低粪便pH和减少大肠杆菌数量,增加乳酸菌数量(P＜0.01);试验组均能够极显著的减少NH₃的排放(P＜0.01);试验Ⅱ组能够显著增加血清IgG含量和减少尿素氮含量(P＜0.05),对总蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白和葡萄糖的含量无显著影响(P＞0.05)。因此,屎肠球菌T013复合制剂能够降低生长猪的腹泻率,改善肠道微生态环境,减少NH₃ 的排放,增强猪的免疫能力。     

富硒乳酸粪肠球菌微胶囊包埋工艺及产品抗性试验研究

对富硒乳酸粪肠球菌采用0.03%к-卡拉胶、0.25%刺槐豆胶和2.5%明胶喷雾干燥的方法,进行三层微胶囊生物包埋,获得产品率为82.68%,包埋后菌体存活率为72.15%,菌体硒含量为0.571 mg/g.产品抗性试验表明:在人工胃酸 (pH2.1) 环境下,经2h包埋的乳酸肠粪球菌的存活率达96%以上,不受胃酸的影响;耐贮存性试验证明,包埋的富硒乳酸肠粪球菌在常温下贮存1年,由初始的5.7×108cfu/ml活菌数降为5.4×107cfu/ml,菌体存活率保持在19.5%以上,包埋菌体的耐贮存性能好;在一定加热条件下,50℃、30min菌体存活率为89.71%,100℃、5min为86.91%,120℃、2min为89.18%,证明经3层微胶囊包埋的富硒乳酸粪肠球菌,其微胶囊产品的耐热稳定性好.     

粪菌液来源及添加量对断奶仔猪生长性能与下痢率的影响

为研究粪菌液来源及添加量对断奶仔猪生长性能与下痢率的影响,试验选用360头杜×长×大断奶健康仔猪,随机分为12组,每组3个重复,每个重复10头仔猪,其中1~3组为对照组,饲喂基础饲粮;4~12组为试验组,在饲喂基础饲粮的基础上,分别灌喂由健康怀孕母猪、哺乳母猪、断奶仔猪粪便制成的粪菌液。每种粪菌液添加量设10、30、50 mL 3个梯度。从断奶第1天起,每天上、下午各灌喂1次,连续灌喂4 d,4 d后仅喂基础饲料。结果表明:不同来源的粪菌液对仔猪的生长性能与下痢率均无显著影响(P0.05),粪菌来源与添加量对仔猪的生长性能与下痢率的影响均无显著交互作用(P0.05);随着粪菌添加量的增加,对各组仔猪的生长性能和下痢率作用效果显著增加(P0.05)。在本试验条件下,健康怀孕母猪、哺乳母猪和断奶仔猪均可作为粪菌供体,最适粪菌液添加量为50 mL。     

一株牦牛源屎肠球菌对小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响

为研究牦牛肠黏膜源屎肠球菌G2对健康小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响,试验设置对照组(CON)、热灭活菌组(EHK)、活菌组(ENT)3个处理组,每组8只C57BL/6小鼠,共计24只。CON组、EHK组、ENT组于正式试验期第1、2、4、6天按0.1 mL/只分别灌胃M17培养基、热灭活菌液和活菌菌液,灌胃前无菌收集小鼠粪便进行乳酸菌总菌计数,第8天处死小鼠取样。结果表明:ENT组乳酸菌总菌数量在第3、5天显著大于CON组与EHK组(P <0.05);各组小鼠结肠病理学评分无显著差异,但ENT组隐窝深度显著高于CON组与EHK组(P <0.05);各组间肠黏膜免疫因子Reg3β、Reg3γ和MUC2基因mRNA表达量差异不显著,TNF-α表达量ENT组显著低于CON组(P <0.05)。综上可知,牦牛源屎肠球菌G2可能为一种肠道过路菌,能在短时间内提高肠道乳酸菌的总数,一定程度上具有改善肠道形态和促进肠道健康的作用。     

日粮中添加益生菌对樱桃谷鸭生产性能的影响研究

试验研究了日粮中添加乳酸粪肠球菌和复合益生菌对樱桃谷肉鸭的生长性能和排泄粪便中大肠杆菌数的影响。选用同一日龄、健康的樱桃谷雏鸭480只,按试验要求分成3组,每组160只,分别饲喂乳酸粪肠球菌及复合益生菌,饲养试验时间为45 d。结果表明:乳酸粪肠球菌组和复合菌组的料肉比分别降低了3.69%和5.74%,且养殖过程中两组肉鸭排泄粪便中的大肠杆菌数量均显著低于对照组(P0.05)。