一株猪源粪肠球菌的益生性能评价

为评价一株来源于动物肠道的粪肠球菌SX106的益生性能,本试验对其生长曲线、产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力、药敏性以及抗氧化能力等指标进行了分析。试验得出：该菌株37℃厌氧培养2 h开始进入对数生长期,12 h进入稳定期;培养液pH值在第2 h迅速下降,第12 h降至4.15,乳酸产量达到45.56 mmol/L;该菌株在pH 3.0环境下存活率达到50%以上,在0.3%胆盐浓度下存活率达到95%以上;该菌株对氟苯尼考和多西环素敏感,对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟、氧氟沙星、阿莫西林和恩诺沙星中度敏感,对青霉素、链霉素、甲氧氨苄嘧啶、氨苄西林、阿奇霉素、卡那霉素和庆大霉素不敏感;对DPPH自由基的清除率达到88.24%。综上,粪肠球菌SX106能耐受胃酸环境,且有良好的耐胆盐能力和抗氧化能力。     

微胶囊化粪肠球菌稳定性影响因素研究

研究针对粪肠球菌制剂稳定性差的问题,采用微胶囊法对粪肠球菌进行包埋,通过真空低温冷冻干燥法干燥,制备微胶囊原菌粉,研究储藏温度、载体和残余水分等因素对微胶囊化粪肠球菌稳定性的影响。试验结果表明:采用微胶囊技术能显著提高粪肠球菌的稳定性,延长保质期;随着储藏温度的升高,微胶囊化粪肠球菌存活率降低,4~25℃粪肠球菌存活率相对较高,当储藏温度达37℃后,存活率急剧下降;使用混合载体,水分为4%,载体比例为玉米淀粉∶沸石粉=2∶1时,粪肠球菌存活率最高,且较为经济;微胶囊化粪肠球菌组与对照组相比,具有更强的耐酸、耐高温和耐胆盐特性,抗逆性强。     

猪源粪肠球菌的分离与鉴定

从新鲜仔猪粪便中分离益生菌,筛选出适合养猪生产的益生菌株,为进一步开发猪用微生态制剂奠定基础。采集长春市双阳地区某猪场健康仔猪新鲜粪便,分离纯化粪肠球菌,通过形态学观察、体外耐酸耐胆盐性能和抑菌能力试验,筛选出益生特性的候选菌株,16S rDNA序列分析方法鉴定其种属,并对候选菌株生长情况及其对抗菌药物敏感性进行评价。成功筛选出2株(S-50、和S-4)耐酸、耐胆盐和抑菌能力较强的粪肠球菌,且具有较好的生长性能,为研发微生态制剂提了供理论依据。     

犬源粪肠球菌生物学特性的研究

试验分析犬源粪肠球菌EF-19的耐酸性能、耐胆盐性能、犬小肠上层细胞黏附性及抑菌物质耐温性等生物学特性。结果表明:该菌株耐受高达0.5%的胆盐时,仍有50%以上的存活率;p H 2.0和9.0处理3 h仍有80%以上的存活率;对犬小肠黏膜上皮细胞有较强的黏附性;且其代谢产物中含有抑菌物质,并有一定的热稳定性。     

包被粪肠球菌热稳定性能评价

研究采用烘箱干热法,对比包被粪肠球菌与普通粪肠球菌,在不同温度(70、85及100℃)下,分别处理不同时间(0、5、10、15、30及60 min)后的存活率,发现包被后的粪肠球菌存活率分别上升13.6%、13.7%和17.0%,可见微囊包被技术的确可提升粪肠球菌的耐高温性能。对比饲料制粒过程中不同制粒温度(65及75℃)与饲料中的包被粪肠球菌烘箱干热处理后的存活率发现:制粒温度为65℃时粪肠球菌存活率相当于饲料在烘箱75℃下热处理28 min,85℃热处理21 min或100℃热处理13 min;制粒温度为75℃时粪肠球菌存活率相当于饲料在烘箱75℃下热处理53 min,85℃热处理41 min或100℃热处理28 min;因此,将饲料中包被粪肠球菌添加至烘箱干热处理试验可快速对制粒过程中粪肠球菌的耐受性进行评估。     

毛皮动物源粪肠球菌的分离鉴定

为获得毛皮动物源粪肠球菌,并评价其益生特性,本研究从健康成年毛皮动物（水貂、狐狸、貉）粪便中分离粪肠球菌,通过形态学观察、生化试验和16S rRNA序列分析等方法进行种属鉴定。测定分离菌株生长曲线、产酸能力、抗菌药敏感性,并挑取部分菌株测定其对于温度、人工胃液、人工胆盐的耐受能力。结果表明,分离菌株中共5株为革兰氏阳性菌,生化特性与粪肠球菌标准株基本相符,且经16S rRNA序列分析鉴定为粪肠球菌。5株菌均于培养后2 h进入对数期,8~10 h进入稳定期,且具有弱产酸能力。分离菌株对四环素、左氟沙星耐药性强,耐药率为100%,其次为青霉素（80%）、红霉素（80%）、庆大霉素（80%）、氯霉素（40%）,对氨苄西林和万古霉素敏感。水貂、狐狸和貉源的粪肠球菌对于60 ℃以下温度处理、pH>3.0的人工胃液、0.3%~0.5%浓度的胆盐耐受能力较强,对70 ℃以上高温和pH<3.0的人工胃液耐受性差。综上所述,本研究共获得5株毛皮动物源（水貂、狐狸、貉）粪肠球菌,分离菌株繁殖较快,适合在毛皮动物肠道中定植并发挥益生作用,且具有较好的益生特性和抗逆性,可作为动物用微生态制剂的候选菌种进一步研究。     

几株乳酸杆菌耐逆性的比较研究

试验主要比较研究了6株乳酸杆菌对热(55℃和65℃)、酸(pH值1.0、2.0和3.0)、胆盐(0.1%和0.3%)、微量元素铜(0、10、50和250mg/L)和锌(0、120、600和3 000mg/L)的耐受性。结果表明:各菌株对这些因子的耐受性有不同程度的差异,如菌株LGG增殖速度、产酸性、耐酸性和耐温度55℃的能力都较其他菌株好,但该菌株在65℃下存活率极低;菌株ZJ614耐高温能力较强,在65℃处理20min后存活率能达到19.2%,但Cu2+(50 mg/L)对其增殖的不良影响较大;菌株ZJ621虽对酸的耐受性较强,但对胆盐的耐受性较差。经全面考察各菌株对各逆性因子的耐受性,初步推断,菌株ZJ610和ZJ617的综合耐逆性相对较强。     

猪源粪肠球菌的分离、鉴定及应用

通过培养特征、形态观察、生理生化鉴定、16SrDNA序列分析和种特异性片段扩增等方法,从健康猪直肠内容物中分离到3株粪肠球菌,其中菌株NA14对常见病原微生物具有较强的拮抗能力;进一步研究表明该菌株具有较强的耐受人工胃液和耐胆汁的能力,能够耐受60℃、30min;动物试验表明饲料中添加该粪肠球菌能够降低仔猪腹泻,改善仔猪生产性能,增强猪瘟疫苗的免疫效果;因此该菌株作为动物益生菌具有好的应用前景。     

1株高产乳酸粪肠球菌的筛选、鉴定及益生性能的研究北大核心

研究旨在获得能够高产乳酸的畜源益生菌。试验从新鲜仔猪粪便中筛选得到一批乳酸菌,根据碳酸钙透明圈结果和乳酸含量测定结果得到1株高产乳酸菌株SWS50,对其进行形态特征、生理生化特征、分子生物学结果及系统发育树等鉴定,并进行抑菌试验、抗逆性试验和胃肠道模拟试验。结果显示,菌株SWS50为粪肠球菌,培养48 h后乳酸产量最高可达117.9 mmol/L;菌株SWS50对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌表现出较强的抑制作用;菌株SWS50具有较高的抗胆盐能力和耐酸能力,在人工肠液中基本可正常生长,存活率较高。研究表明,菌株SWS50具有较强的抗逆特性和一定的胃肠道存活能力,可发展为畜禽领域应用的潜力益生菌。     

猪源肠道嗜酸乳杆菌的分离、鉴定与驯化

本文旨在分离筛选适于在猪肠道生长的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株。选用仔猪新鲜粪便,利用MRS培养基,以平板划线法分离纯化菌株;采用形态、生理生化和16 SrRNA基因序列分析对分离菌株进行鉴定;通过逐步提高培养基酸度、胆盐浓度和培养温度,对分离菌株进行驯化。结果表明:1)经分离纯化获得的菌株La-5,被鉴定为嗜酸乳杆菌。2)驯化后的菌株La-5c在pH=1.5~3时存活率比原始菌株La-5高出36%~44%,极低pH(1.5)条件下仍有37%的存活率。3)在0.03%~0.3%胆盐中的存活率为85%~90%,而原始菌株La-5为28%~53%。4)在50℃时的存活率为66.1%,而原始菌株La-50.01%。由此可见,与仔猪粪便分离纯化的嗜酸乳杆菌原始菌株La-5比较,驯化获得的菌株La-5c具有耐低pH、高浓度胆盐及高温的特性。     

枯草芽孢杆菌生物学特性的研究

从饲料应用的角度研究了1株枯草芽孢杆菌的生长曲线及耐酸性、耐高温和耐胆盐能力。结果表明:枯草芽孢杆菌的菌体质量浓度在34 h时达到最高值。在pH 2处理6 h后存活率超过76%,90℃处理10 min后存活率约为80%。研究表明:枯草芽孢杆菌具备良好的饲料学特性,是优良的益生菌菌株。     

富硒乳酸粪肠球菌微胶囊包埋工艺及产品抗性试验研究

对富硒乳酸粪肠球菌采用0.03%к-卡拉胶、0.25%刺槐豆胶和2.5%明胶喷雾干燥的方法,进行三层微胶囊生物包埋,获得产品率为82.68%,包埋后菌体存活率为72.15%,菌体硒含量为0.571 mg/g.产品抗性试验表明:在人工胃酸 (pH2.1) 环境下,经2h包埋的乳酸肠粪球菌的存活率达96%以上,不受胃酸的影响;耐贮存性试验证明,包埋的富硒乳酸肠粪球菌在常温下贮存1年,由初始的5.7×108cfu/ml活菌数降为5.4×107cfu/ml,菌体存活率保持在19.5%以上,包埋菌体的耐贮存性能好;在一定加热条件下,50℃、30min菌体存活率为89.71%,100℃、5min为86.91%,120℃、2min为89.18%,证明经3层微胶囊包埋的富硒乳酸粪肠球菌,其微胶囊产品的耐热稳定性好.     

2株鸭源肠球菌的鉴定和药敏试验

对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式;能在10℃、45℃和6.5%NaCl肉汤等条件下生长,能耐热60℃30min,其特性均符合肠球菌属的特征,各菌株生化反应特性均与粪肠球菌特性基本一致,3个菌株均可鉴定为粪肠球菌。药敏试验结果表明,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素和左氟沙星高度敏感,而对四环素耐药。     

产细菌素粪肠球菌的分离、鉴定及体外益生特性研究

本试验通过筛选产细菌素的粪肠球菌,研究其体外益生特性,为其在动物生产中的应用奠定基础。利用肠球菌选择性培养基进行分离,孔穴琼脂扩散法进行抑菌活性筛选,并通过形态学和生理生化试验对菌种进行鉴定,然后测定其体外益生性能。研究发现,从猪粪中筛选出9株菌,经鉴定3株为粪肠球菌,通过抑菌试验,菌株DY-F03对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径分别为20.63mm、22.08mm、18.58mm和18.82mm,抑菌性能在各菌株中最强,选取菌株DY-F03进行益生性能评价。通过致病菌共培养、耐酸、耐胆盐及温度耐受试验,发现菌株DY-F03具有较强的益生及抗逆性能,作为潜在的抗生素替代品具有较大开发利用价值。     

嗜酸乳杆菌耐性菌株的选育及培养条件研究

试验旨在通过逐步提高培养基酸度及胆盐质量分数的方法,选育出耐酸及耐胆盐效果较强的菌株。以菌珠L102为原始菌株逐步选育出耐性菌株L102b。该耐性菌株在p H 2.0及p H 2.5酸度条件下,存活率较原始菌株提高45.0%以上,在p H 1.5的极低酸度条件下,亦有20.3%的存活率;胆盐质量分数为0.1%~0.3%存活率均在85.0%以上,胆盐质量分数为0.5%时仍有46.2%的存活率。对比原始菌株L102耐酸性能及耐胆盐性能均有明显提高。通过研究单因素及正交试验对选育的耐性菌株L102b的发酵条件,得出菌株L102b的最佳培养条件:转速100 r/min,培养温度35℃,初始p H 6.4,装液量300 m L。     

羊瘤胃乳酸菌的分离鉴定及抗逆性筛选

为开发羊源乳酸菌菌种资源,从健康成年散养山羊瘤胃内容物中分离乳酸菌,经生化试验、基因测序以及同源性分析、构建遗传进化树等方法对分离出的乳酸菌进行鉴定,并通过耐酸和耐胆盐试验筛选抗逆性良好的乳酸菌。结果表明:从散养山羊瘤胃内容物中分离出11株乳酸菌,将其编号为R1~R9、R11和R12;其中R1、R2为杜氏肠球菌,R3、R7为乳酸肠球菌,R4、R5、R6、R8、R9为屎肠球菌,R11为鼠李糖乳杆菌,R12为莱菲氏肠球菌;R4(屎肠球菌JQ067694.1)在pH值为2时存活率超过80%,在0.9%浓度胆盐下,存活率超过30%,抗逆性优于其他菌株,生产应用潜力较好。     

家兔肠道内部分菌种生长特性的研究

选择6种家兔肠道内分离的正常菌株,对其生长曲线、耐酸、耐胆盐能力,以及对抗生素的敏感性进行研究。结果表明:①菌株中1株粪球菌开始生长较慢,其他菌株生长在4～6h都达到生长高峰,增殖速度快。②菌株的生长速度随pH降低而下降,但所有菌株在pH2时仍然能存活。③随着胆盐浓度增加和处理时间延长,各菌株存活率下降,当胆盐浓度为2%时,2h后所有菌株均不能生长。④菌株中,除乳球菌属对青霉素钠敏感性较低外,其余的5个菌株对硫酸卡那霉素、硫酸新霉素、青霉素钠、氯霉素、红霉素、硫酸链霉素均敏感。     

饲用屎肠球菌M74的生物学特性研究

[目的]对菌株M74进行鉴定和生物学特性研究,为菌株M74的临床应用提供参考。[方法]利用16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定,通过单因素试验研究菌株M74对酸、胆盐、高温及抗生素的耐受性,然后测定其产酸量及考察益生菌之间的相互作用,最后研究其对致病菌的抑菌性能。[结果]经16S r DNA序列分析,该菌株为屎肠球菌;菌株M74的耐受性结果表明,在p H值为3的条件下保持3 h后,存活率为11.57%,在牛胆盐浓度为0.3%的条件下保持3 h后,菌株存活率为0.64%,在60℃处理10 min后,菌株存活率仍能达到25.42%,同时该菌株对不同抗生素呈现不同程度的抗性;产乙酸含量最高,达到4 620.15μg/m L;菌株M74作为早期定植菌时,对其他益生菌有抑制作用;菌株M74对致病性大肠杆菌和沙门菌有很好的抑制作用。[结论]屎肠球菌M74有较好的生长耐受性,能抑制致病性菌株的生长,具有较好的应用价值。     

鸽源乳酸菌的分离鉴定及生物特性研究

试验从鸽子小肠分离到3株优势乳酸菌,经16S rRNA和理化鉴定,Z1和Z2同为唾液乳杆菌,F6为粪肠球菌。其中Z1和Z2在培养24 h时活菌数最高,抑菌效果最好,对部分抗生素不敏感,在pH值3左右生长较好,耐酸性强,安全无毒性,但耐胆盐能力一般。作为可食用菌种,唾液乳杆菌在肉鸽养殖中应用较少。     

银川地区不同动物源肠球菌耐药性比较

为了解银川地区规模化养殖场肠球菌的耐药情况,试验采用药敏纸片法测定了216株肠球菌对12种抗菌药物的耐药率。结果表明:72株牛源肠球菌对青霉素的耐药率最高,为44.44%;其次对氨苄西林、红霉素、庆大霉素和利福平耐药率较高,均在22%以上;对万古霉素和利奈唑胺的敏感率最高,均为100%。72株鸡源肠球菌对红霉素、链霉素、多西环素的耐药率较高,均在50%以上;对氨苄西林、氯霉素、利奈唑胺的敏感率较高,均在80%以上。72株猪源肠球菌对链霉素耐药率最高,为90.28%;其次对红霉素和多西环素耐药率较高,均在75%左右;对万古霉素和利奈唑胺的敏感率较高,均在80%以上。牛源肠球菌不耐药、一耐、二耐菌株数量明显高于猪源和鸡源的菌株数;鸡源肠球菌三耐、四耐的菌株数量明显高于猪源和鸡源的菌株数;猪源肠球菌五耐和六耐的菌株数量明显高于牛源和鸡源的菌株数。其中猪源肠球菌多重耐药情况比较严重,有一株菌株已经耐12种药物。