pH值对植酸酶酶活的影响及其在猪、鸡消化道中的分析

通过测定在不同ｐＨ值条件下两种植酸酶的活性,发现ｐＨ值对植酸酶活力有较大影响。在鸡嗉囊的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活都是１００％,而在动物真胃的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活分别是７７．８２％和４９．６１％。     

含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化

将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达７５％,在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化,获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４,纯度达９５．８％,得率为２４．５％。     

绿脓杆菌外毒素A的纯化

用绿脓杆菌ＰＡ１０３株接种于ＴＳＡ甘油培养基３２℃培养，产生绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ），经流水透析除盐、ＤＥ－５２纤维素阶段洗脱、硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５除盐、ＤＥ－５２纤维素梯度洗脱、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析，纯化了绿脓杆菌外毒素Ａ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，纯化后的毒素为单一蛋白带，分子量约６６０００；对普通小鼠ＬＤ５０为０．２４μｇ蛋白。用ＰＥＡ抗血清作免疫印迹分析，进一步证实纯化的蛋白为ＰＥＡ，毒素约纯化了５００倍，总蛋白回收率约０．０２４％，毒素回收率约１１％。     

迟缓爱德华氏菌的溶血特性

分析了不同来源的２８株Ｅｔ的溶血特性。分别以平板法（ＰｌａｔｅＡｓｓａｙ,ＰＡ）、接触法（ＣｏｎｔａｃｔＨｅｍｏｌｙｓｉｓ,ＣＨ）及上清法（ＳｕｐｅｒｎａｔａｎｔＡｓａｙ,ＳＡ）检测Ｅｔ的溶血性,阳性率依次为７５％、７５％、５７１４％。ＰＡ和ＣＨ的符合率为１００％。凡ＳＡ检测为阳性的,ＰＡ、ＣＨ检测皆为阳性。培养基中加入螯合剂ＥＤＤＡ造成环境缺铁,结果,约３２１４％Ｅｔ的胞外溶血素显著增加。经胰酶、热处理后,ＡＴＣＣ１５９４７株溶血活性丧失,提示Ｅｔ溶血素是一种不耐热蛋白样物质。     

感染网状内皮组织增殖病病毒SPF雏鸡中枢和外周免疫器官的免疫学变化

实验研究了１日龄ＳＰＦ雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒（Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,ＲＥＶ）后免疫器官匀浆涂片的免疫学变化。结果发现,雏鸡感染ＲＥＶ后其免疫器官法氏囊、胸腺、脾脏中淋巴细胞数、酯酶阳性（ＡＮＡＥ＋）Ｔ细胞数以及颗粒型和弥散型ＡＮＡＥ＋Ｔ淋巴细胞数显著降低（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）。表明１日龄ＳＰＦ雏鸡感染ＲＥＶ后,其中枢免疫器官和外周免疫器官的细胞免疫呈现抑制。     

白绒山羊血清α—Es同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离白绒山羊血清α－Ｅｓ同工酶，并进行理化特性分析。电泳结果表明，白绒山羊α－Ｅｓ同工酶有９条电泳区带，各区带的电泳迁移率和出现频率及相对百分含量等存在个体差。在雄性个体中，Ｅｓ９有一条亚带出现。理化测定结果显示，α－Ｅｓ同工酶有较宽的ｐＨ作用区限，在中性至碱性环境条件下各同工酶均能显现出明晰的谱带。另外，各同工酶对温度的稳定性表现不同，其中Ｅｓ１，Ｅｓ２，Ｅｓ３和Ｅｓ９     

高效液相色谱法测定山羊肝细胞线粒体膜磷脂

采用现代分析技术高效液相色谱（ＨＰＬＣ）对正常山羊肝细胞线粒体膜（ＭｉＭ）磷脂组分进行了定性和定量研究。结果表明：肝细胞ＭｉＭ四种主要磷脂组分磷脂肌醇（ＰｉｄＩｎｓ）、磷脂酰丝氨酸（ｔｄＳｅｒ）、磷脂酰乙醇氨（ＰｔｄＥｔｎ）和磷脂酰胆碱（ＰｔｄＣｈｏ）在１５ｍｉｎ内可达到完全基线分离且无杂质干扰和定性分析,在该实验条件下,其平均回收率为８０．６８％－８８．３２％。在正常肝细胸中每毫克ＭｉＭ蛋白Ｐｔ     

EDS—BH91毒株血凝特性的研究

本试验主要从红细胞凝集谱、凝集解脱情况以及血凝性的影响因素几方面对本室分离的ＥＤＳ－ＢＨ９１毒株和ＥＤＳ－７６ＡＶ１２７毒株进行了比较系统的测定。试验结果表明：两毒株均能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，而且２４小时内无解脱现象；对兔红细胞呈可疑；对人、奶牛、绵辜、猪、小鼠、驴的红细胞不能凝集。血凝反应的最适温度产３７℃；最适红细胞浓度为１％；分别以ｐＨ７．４，浓度为０．０１、０．０４、．０．１、０．２Ｍ以     

应用一步亲和层析法纯化转基因山羊乳腺定位表达的组织型纤维蛋 …

对转基因山羊乳腺定位表达的羊奶中组织型纤维蛋白溶酶原激活剂（ｔＰＡ）的分离纯化方法作了研究，摸索出一种简单可行的纯化方法。羊奶中ｔＰＡ先经冰乙酸和丙酮沉淀后，再通过Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ柱一步亲和层析，纯化倍数达６７１４．３倍，比活性１８８０００Ｕ／ｍｇ，活性回收率２６％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ还原电泳分析，ｔＰＡ纯度大于９５％，其中低分子双链蛋白占９０％以上；Ｗｅｓｔｅｒｎ－     

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。     

重组牛白细胞介素-2增强小鼠对伊氏锥虫可溶性抗原免疫应答的研究

使用伊氏锥虫可溶性抗原免疫小鼠，研究了同时注射重组牛白细胞介素－２（ｒＢＩＬ－２）对ＮＫ细胞杀伤活性及特异性抗体水平的影响。试验鼠随机分为４组：Ａｇ组，ｒＢＩＬ－２组，Ａｇ＋ｒＢＩＬ－２组和ＰＢＳ对照组。以ＬＤＨ释放法和间接ＥＬＩＳＡ法分别检测脾ＮＫ细胞杀伤活性及抗体水平。结果表明，首次免疫后２４ｄ，Ａｇ组ＮＫ细胞杀伤活性为３１．６％，ｒＢＩＬ－２组为９９．６６％，Ａｇ＋ｒＢＩＬ－２组为９８．９８％，对照组为１９．７３％；抗体效价Ａｇ组为２４，Ａｇ＋ｒＢＩＬ－２组为２６。说明ｒＢＩＬ－２可显著提高ＮＫ细胞杀伤活性及促进抗体生成，提高宿主免疫力。     

锥虫长期超低温保藏方法的研究

作者观测不同保护剂、稀释液、ＰＨ值、降温方法、复苏温度、冻融次数、液相气相交替以及解冻后在普通冰瓶中存放时间对伊氏锥虫浙江虫浙江虫株的感染性及致病力的影响。在此试验基础上，又对伊氏锥虫的６个不同虫株、媾疫锥虫、铡果锥虫、布氏锥虫等４个种的９个早株，进行了超低温保藏试验和长期保藏效果观察。已测定的有效保藏期伊氏锥虫达５７４－３２００天，媾疫锥虫达２８６６天，则果锥虫达７６３天，布氏锥虫７８３天。通过     

California mastitis test scores as indicators of subclinical intra-mammary infections at the end of lactation in dairy cows

Insect-borne diseases exact a high public health burden and have a devastating impact on livestock and agriculture. To date, control has proved to be exceedingly difficult. One such disease that has plagued sub-Saharan Africa is caused by the protozoan African trypanosomes (Trypanosoma species) and transmitted by tsetse flies (Diptera: Glossinidae). This presentation describes Trypanosoma evansi (T. evansi) which causes the disease known as trypanosomosis (Surra) or trypanosomiasis in which several attempts have being made to unravel the clinical pathogenic mechanisms in T. evansi infections, yielding various reports which have implicated hemolysis associated to decrease in life span of erythrocytes and extensive erythrophagocytosis being among those that enjoy prominence. T. evansi generates Adenosine Triphosphate (ATP) from glucose catabolism which is required for the parasite motility and survival. Oxidation of the erythrocytes induces oxidative stress due to free radical generation. Lipid peroxidation of the erythrocytes causes membrane injury, osmotic fragility and destruction of the red blood cell (RBC) making anemia a hallmark of the pathology of T. evansi infections.     

伊氏锥虫同工酶、蛋白质和抗原组分的比较研究

本文采用生化技术对八个中国伊氏锥虫株及一个布氏锥虫株的同工酶、蛋白质和抗原组分进行比较研究。根据同工酶电泳结果,可将伊氏锥虫和与其形态上不能区分的布氏锥虫区别开来,亦可将伊氏锥虫分为两个酶株群(Z1、Z2)。根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和免疫印迹试验的结果,可将酶株群Z1分成五个不同多肽群(株)。本研究结果表明,中国伊氏锥虫遗传变异程度较低,是一个相对稳定的种群。     

伊氏锥虫新疆株在动物体内抗原变异程序的观察

为了探明伊氏锥虫在动物体内抗原变异,以伊氏锥虫新疆株克隆感染兔,每３天采兔血１次,共采血５次,并用环磷酰胺处理的小白鼠对各分离期锥虫予以克隆,获得５个锥虫克隆群体,经ＡＢＣ－酶标试验和间接免疫荧光试验,对各克隆锥虫抗原进行鉴定,结果：获得５个表面抗原性互不相同的克隆群体,说明伊氏锥虫新疆株第１次抗原变异发生在４－６日内,以后每３天变异１次,本研究为进一步探明伊氏锥虫抗原变异规律打下了基础。     

4型菌毛、毒素及蛋白酶在动物源气单胞菌的检测

将来源于鱼、猪、犬等９种动物的１８株气单胞菌分离株通过ＡＤ（氨苄青霉素－糊精）培养基纯化。另以大肠杆菌束状菌毛相关（ｂｆｐ－ｒｅｌａｔｅｄ）基因的ＰＣＲ引物对ＥＢ１（ＧＡＴＴＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＧＴＧＣ）—ＥＢ２（ＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＡＴＡＴ）扩增,用ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ标记,构建核酸探针,作斑点杂交试验,用以检测上述气单胞菌菌株的４型菌毛,同时以溶血试验检测其毒素,用脱脂奶溶蛋白圈试验检测其蛋白酶。结果显示,在１８个菌株中,４型菌毛、毒素和蛋白酶均为阳性者为１０株（５５．６％）;３项指标均无肯定的阳性结果者４株,两者合计共１４株,占检测总数约８０％（１４／１８）,提示这３种毒力因子存在较高的相关性。所有鱼源株（５株）三项指标皆为阳性;４株猪分离株三项指标均为阳性者占一半;其它动物分离株检测结果无明显规律性     

γ-氨基丁酸等药物对日本血吸虫运动性的影响

采用肉眼观察法测定有关药物对日本血吸虫运动性的影响。结果表明：（１）１０－３,１０－４,１０－５ｍｏｌ／Ｌγ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）均有兴奋虫体的作用,其兴奋性随浓度递增而增强;（２）用１０－３、１０－４ｍｏｌ／Ｌ巴氯酚（ｂａｃｌｏｆｅｎ）、毕扣扣林（ｂｉｃｕｃｕｌｉｎｅ）和印防己毒素（ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）作用虫体后,巴氯酚、毕扣扣林在浓度为１０－３ｍｏｌ／Ｌ时对虫体有明显抑制作用,浓度为１０－４ｍｏｌ／Ｌ时抑制作用不明显;而１０－３、１０－４ｍｏｌ／Ｌ印防己毒素均表现一定的兴奋作用;（３）先用１０－３ｍｏｌ／ＬＧＡＢＡ兴奋虫体后,再加入上述药物,结果仍是相同。表明一定浓度的巴氯酚,毕扣扣林不仅对内源性的ＧＡＢＡ有拮抗作用,而且对外源性的ＧＡＢＡ有拮抗性;而印防己毒素不仅无拮抗性,还有协同ＧＡＢＡ的兴奋作用。初步判定,ＧＡＢＡ为日本血吸虫的一种兴奋性神经递质,有别于其它寄生虫（如曼氏血吸虫和鸡蛔虫）。     

Evaluation of the card agglutination test (CATT/T. evansi) for detection of Trypanosoma evansi infection in water buffaloes (Bubalus bubalis) in Egypt

A card agglutination test (CATT/T. evansi) was evaluated for detection of antibodies against Trypanosoma evansi (T. evansi) in experimentally and naturally infected buffaloes. Four calves were inoculated with a strain of T. evansi isolated from a dromedary camel. Parasitological examination of the calves revealed trypanosomes in the blood from days 4 to 9 post-inoculation (PI). General emaciation appeared from day 26 PI and aggravated until the end of the experiment (day 88 PI). Antibodies against T. evansi were detectable from day 8 PI till the end of the experiment. Parasitological examination of 200 water buffalo blood samples obtained from slaughterhouses revealed negative results. Serological examination of these animals showed that 48 (24%) water buffaloes had anti-T. evansi antibodies.     

Comparison of serological tests for Trypanosoma evansi natural infections in water buffaloes from north Vietnam

In the present study, a collection of 415 water buffalo serum samples originating from the north of Vietnam was used for evaluation of different diagnostic antibody detection methods available to detect infections with Trypanosoma evansi. The diagnostic sensitivity and specificity of a direct card agglutination test (CATT/T. evansi), an indirect card agglutination test (LATEX/T. evansi) and a newly developed antibody detection ELISA (ELISA/T. evansi) was calculated on the basis of parasitological results, obtained by mouse inoculation, and compared for all assays. The immume trypanolysis assay with the predominant T. evansi RoTat 1.2 variable antigen type was used as reference test for antibody presence. All parasitologically confirmed animals (n=8) were positive in all tests. Diagnostic specificity was highest in CATT/T. evansi (98%) followed by the ELISA/T. evansi (95%) and the LATEX/T. evansi (82%). Concordance of the variant specific immune trypanolysis test with the other tests was calculated and revealed that few (1-8%) false positive results were actually due to a specific reactions, and that LATEX/T. evansi and ELISA/T. evansi detected more immune trypanolysis positives than the CATT/T. evansi. It was concluded that, apart from the immune trypanolysis test, which is not generally applicable, ELISA/T. evansi with a 30% positivity cut-off and LATEX/T. evansi, thanks to their superior capacity of detecting T. evansi specific antibodies, would be suitable as epidemiological tools detecting both active infections and persisting T. evansi specific antibodies. The ELISA/T. evansi with a 50% positivity cut-off and the CATT/T. evansi on the other hand, seem more appropriate to detect true infected water buffaloes.     

伊氏锥虫TR酶的初步研究

国外研究者已报道在布氏锥虫、枯氏锥早、刚果锥虫中发现了存在ＴＲ酶，此酶是锥虫代谢的重要酶之一。伊氏锥虫ＴＲ酶研究的尚属空白。本研究目的是为了确定伊氏锥虫中是存在ＴＲ酶。我们利用分光光度法测出了伊氏锥虫中有ＴＲ酶活性，但无ＧＲ酶活性，测出了ＴＲ酶的Ｋｍ和Ｖｍ值；发现了治疗锥虫药物安锥赛和盐酸锥双对ＴＲ酶有抑制作用，抑制率分别达２８％和３１％；比较了七株中国伊氏锥虫和布氏锥虫敏毫克蛋白中ＴＲ酶活力，其