猪PRLR和FSHβ基因多态性检测及其与繁殖性状的关联分析

试验旨在研究催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)和卵泡刺激素β(follicle-stimulating hormoneβ,FSHβ)基因的多态性及其与母猪繁殖性状的关联分析。采用PCR-RFLP方法对大白猪、杜洛克猪和长白猪3个猪种共487头母猪进行了PRLR和FSHβ基因多态性检验,并采用单因子方差分析、LSD法分析不同基因型与母猪总产仔数、产活仔数、断奶窝重和断奶窝仔数等繁殖性状的相关性。结果表明,PRLR基因在大白猪和长白猪中B等位基因均为优势基因,基因频率分别为0.717和0.548,大白猪BB基因型总产仔数显著高于AA基因型(P<0.05),长白猪BB基因型断奶窝重显著高于AB基因型(P<0.05);FSHβ基因在大白猪、杜洛克猪和长白猪3个猪种中B等位基因均为优势基因,基因频率分别为0.804、0.760和0.789,长白猪BB基因型总产仔数和产活仔数均显著高于AB基因型(P<0.05),呈现BB>AA>AB趋势。因此,PRLR和FSHβ基因对荣昌猪场母猪繁殖性能有一定影响,可作为母猪繁殖性能分子选育的候选参考基因。     

大白猪、长白猪和杜洛克猪催乳素受体基因多态性及其与繁殖性能的关系

本试验通过PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪和杜洛克猪的催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因第10外显子AluⅠ酶切位点进行多态性分析,并对各基因型母猪的第1至第3胎次产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄窝重及断奶成活率进行测定,进而分析PRLR基因多态性与繁殖性能的关系。结果表明,PRLR基因在3个品种中均存在多态位点,且AA基因型都是其优势基因型。关联分析结果表明,大白猪AA基因型个体第1、2和3胎各繁殖性状均呈现出高于AB和BB基因型的趋势。在繁殖性能已经稳定的第3胎次AA基因型个体产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重及断奶成活率比BB基因型个体平均分别高出0.31头、0.63头、0.02头、0.65 kg和0.43%,但差异均不显著(P>0.05)。     

4个主效基因与英系长白猪繁殖性能的相关性分析

为寻找有效的分子标记用于英系长白猪辅助育种进而提高其繁殖性能,在英系长白猪群（169头）中采用PCR-RFLP技术,进行雌激素受体（estrogen receptor,ESR）、视黄醛结合蛋白（retinol binding protein 4,RBP4）、瘦素（leptin,LEP）和促卵泡素亚基β（follicle-stimulating hormone β,FSHβ） 4种与繁殖性状相关基因的基因型频率检测,利用SPSS 19.0统计软件,采用最小二乘法将各基因不同基因型与总产仔数、产活仔数、断奶窝重、断奶头数进行了相关分析。结果显示,ESR、RBP4、LEP基因均以A为优势等位基因,FSHβ基因以B为优势等位基因,其中LEP、FSHβ基因多态位点符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05）,而ESR、RBP4基因多态位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态（P<0.01）;LEP基因在长白猪母猪中表现为BB基因型为有利基因型,其总产仔数、产活仔数、断奶头数分别比AB基因型高1.3219、1.6855、1.1710头（P<0.05）;FSHβ基因中AA基因型为不利基因型,BB基因型断奶窝重比AA基因型高5.1129 kg（P<0.05）;ESR、RBP4基因对长白母猪繁殖性能均无显著影响（P>0.05）,而LEP、FSHβ基因可能作为有价值的候选基因应用于英系长白猪的分子标记辅助选择。     

大白猪、长白猪和杜洛克猪RBP4基因多态性及其与繁殖性能的相关分析

本试验通过PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪和杜洛克猪的视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因第4外显子Msp Ⅰ酶切位点进行多态性分析,并对各基因型母猪的第2、3胎次产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄的窝重及断奶成活率进行测定,进而分析RBP4基因多态性与繁殖性能的关系。结果表明,RBP4基因在3个品种中均存在多态位点;χ²适合性检验表明大白猪在该位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),而长白猪和杜洛克猪在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。其中,大白猪中优势基因型为BB基因型,而长白猪和杜洛克猪中优势基因型为AA基因型。在繁殖性能上,长白猪BB基因型群体第2胎总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄断奶窝重分别高于AA基因型0.97头、1.28头、0.92头、1.74 kg和4.42 kg,高于AB基因型0.92头、1.02头、0.98头、1.43 kg和4.98 kg;第3胎次中总体上BB基因型也为有利基因型。     

猪催乳素受体基因第8内含子多态性及其对产仔性能的影响

采用PCR-SSCP技术检测了大白猪、长白猪、杜洛克猪、马身猪、山西黑猪和山西白猪等6个品种364头个体催乳素受体基因(prolactin,PRLR)第8内含子的多态性,并分析了多态位点对猪头胎产仔性能的影响。结果表明,猪PRLR基因第8内含子存在多态性,共检测到A、B、C 3个等位基因和AA、AB、AC、BB、BC和CC 6种基因型。在杜洛克猪、长白猪、山西黑猪和山西白猪群体中,A等位基因的频率最高,分别为0.8276、0.5439、0.5345和0.7669;而在大白猪和马身猪群体中,B等位基因的频率最高,分别为0.6894和0.7000;仅在大白猪、山西黑猪和山西白猪中检测到C等位基因,且频率较低,在0.0379~0.1385之间。PRLR基因型对母猪头胎产仔数有显著影响(P<0.05),对产活仔数的影响未达显著水平。AC基因型母猪的头胎产仔数和产活仔数显著高于BC基因型个体,而与AA、AB和BB基因型个体差异不显著。含有A等位基因的母猪的产仔性能优于不带有A等位基因的个体,表明A等位基因是有利于母猪产仔性能提高的等位基因,可应用于标记辅助选择来提高母猪的繁殖性能。     

ESR、FSHβ及OPN基因多态性与母猪繁殖性状的关联分析

采用PCR-RFLP法对大白猪和长白猪猪群进行了雌激素受体基因（ESR）、卵泡促激素β亚基基因（FSHβ）和骨桥蛋白基因（OPN）等3个与繁殖性能相关的基因多态性检测,并对不同基因型的总产仔数、产活仔数及出生窝重进行了相关分析。结果表明：①在长白猪中,ESR和OPN基因的优势基因是A等位基因,FSHβ基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因BB型个体比AA型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重高,FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重上高,OPN基因BB基因型个体比AA基因型个体总产仔数少1.20头,差异显著（P＜0.05）;在经产母猪中,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高,ESR基因总产仔数、产活仔数规律与初产母猪相反。②在大白猪群体中,ESR基因的优势基因是A等位基因,FSHβ和OPN基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因AA型比BB型个体产活仔数和出生窝重高,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高;在经产母猪中,ESR、FSHβ及OPN基因全都表现出BB型比AA型个体总产仔数和产活仔数高的趋势。     

ESR、OPN和RBP4基因多态性对大白猪繁殖性状的影响

为了探讨雌激素受体（estrogen receptor,ESR）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）和视黄醇结合蛋白4（retinol binding proteins 4,RBP4）的多态性对大白猪繁殖性状的影响,本研究采用PCR-RFLP技术检测试验猪群ESR、OPN和RBP4基因的多态性,并分析其对大白猪总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重、初生重、死胎、木乃伊、弱仔数和畸形数等性状的影响。结果显示,在大白经产母猪中,ESR和OPN基因的优势基因为A等位基因,RBP4基因的优势基因为B等位基因;ESR基因AB与BB基因型在总产仔数、产活仔数性状上均高于AA基因型;OPN基因在总产仔数性状上AA基因型最高,在产活仔数、健仔数、窝重性状上均为BB > AA > AB;RBP4基因在总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重性状上均为AA > BB > AB;合并基因型分析发现ESR-RBP4最优的分子标记组合为ABAA;OPN-RBP4最优的分子标记组合为BBAA。因此,ESR、OPN和RBP4基因多态性与大白猪繁殖性状相关。     

催乳素受体基因对大白、长白猪产仔数的影响

采用PCR—RFLP法对大白、长白猪进行催乳素受体（PRLR）基因多态性检测，结果表明，两个品种的PRLR等位基因B频率略高于等位基因A频率，大白母猪PRLR基因型为AA的各胎平均产仔数比AB型高1．62头（P〈0．05），比BB型高2．41头（P〈0．05）；长白母猪AA型比AB型和BB型相应高1.32和3．33头（P〈0．05）。     

视黄醇结合蛋白4基因多态性对长白猪繁殖性能的影响

通过PCR-RFLP 技术对长白猪视黄醇结合蛋白４（Retinol binding protein 4,RBP4）基因进行多态性检测,并分析其对产仔数的影响。结果表明,在长白初产和经产母猪中,RBP4 基因有利基因型为AA 基因型,AA 型在总产仔数和产活仔数方面均高于AB 型、BB 型,其中总产仔数显著高于AB 型（P<0.05）,产活仔数显著高于BB 型（P<0.05 ）;各基因型之间断奶窝重与初生窝重差异不显著。     

ESR、FSHβ及OPN基因多态性与母猪繁殖性状的关联分析

采用PCR-RFLP法对大白猪和长白猪猪群进行了雌激素受体基因(ESR)、卵泡促激素β亚基基因(FSHβ)和骨桥蛋白基因(OPN)等3个与繁殖性能相关的基因多态性检测,并对不同基因型的总产仔数、产活仔数及出生窝重进行了相关分析.结果表明:①在长白猪中,ESR和OPN基因的优势基因是A等位基因,FSHβ基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因BB型个体比AA型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重高,FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重上高,OPN基因BB基因型个体比AA基因型个体总产仔数少1.20头,差异显著(P<0.05);在经产母猪中,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高,ESR基因总产仔数、产活仔数规律与初产母猪相反.②在大白猪群体中,ESR基因的优势基因是A等位基因,FSHβ和OPN基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因AA型比BB型个体产活仔数和出生窝重高,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高;在经产母猪中,ESR、OPN及FSHβ基因全都表现出BB型比AA型个体总产仔数和产活仔数高的趋势.     

不同猪种ADIPOQ基因外显子2多态性及其与山西白猪体重和体尺性状的关联分析

本研究旨在检测猪脂联素（adiponectin,ADIPOQ）基因外显子2的多态性,并分析其对山西白猪体重和体尺性状的影响。采用PCR-SSCP技术检测了长白猪、大白猪、杜洛克猪、山西白猪、山西黑猪和马身猪6个猪种392个个体ADIPOQ基因外显子2的多态性,并采用GLM程序分析了ADIPOQ基因外显子2多态性与山西白猪体重和体尺性状的关联性。结果显示,在ADIPOQ基因外显子2的89 bp处检测到G→A错义突变,引起缬氨酸（Val）向异亮氨酸（Ile）的转变。ADIPOQ基因外显子2存在3种基因型：AA、AB、BB,2个等位基因：A和B。杜洛克猪中只有BB基因型,长白猪、大白猪、山西白猪和山西黑猪中BB基因型为优势基因型,马身猪中AA基因型频率最高。在引入品种长白猪、大白猪和杜洛克猪中B等位基因为优势等位基因,基因频率分别为0.96、0.96和1.00;在地方品种马身猪中A等位基因频率（0.52）略高于B等位基因（0.48）;在培育品种山西白猪和山西黑猪中B等位基因频率分别为0.76和0.78,介于引入猪种和地方品种之间。基因型频率分布在马身猪、山西白猪和山西黑猪之间无显著差异（P>0.05）,杜洛克猪与长白猪、大白猪间差异均不显著（P>0.05）,而长白猪和大白猪间差异显著（P<0.05）,任意一个引入品种与马身猪、山西白猪和山西黑猪之间的差异均达到极显著水平（P<0.01）。ADIPOQ基因外显子2多态性对断奶重有显著影响,其中BB基因型个体28日龄断奶重显著高于AA和AB基因型（P<0.05）,AA和AB基因型间无显著差异（P>0.05）,但对其他性状无显著影响,说明该位点只在个体发育早期阶段起作用。     

The Association Analysis Between 4 Major Genes and Reproductive Traits in British Landrace Pigs

The purpose of this study was to identify candidate genes associated with reproduction traits and explore the available molecular marker in British Landrace pig breed. The PCR-RFLP technique was applied to analyze the distribution of estrogen receptor (ESR), retinol binding protein 4 (RBP4), leptin (LEP) and follicle-stimulating hormone β (FSHβ) genes in British Landrace pigs. The genetic effects of ESR, RBP4, LEP and FSHβ on the reproductive traits included total number born, number born alive, weaning weight of litter, weaning piglet, which were analyzed by using least square method of SPSS 19.0 software. This results demonstrated that A was dominant allele in ESR, RBP4, LEP genes, and B was dominant allele in FSHβ gene. The result of χ² test showed that the polymorphic sites of LEP, FSHβ genes were fit with Hardy-Weinberg equilibrium (P>0.05), while this site of ESR and RBP4 were not fit with Hardy-Weinberg equilibrium (P<0.01). In addition, the statistical analysis indicated that the total number born, number born alive and number of alive weaning litter with BB genotype of LEP were higher than AA genotype, which were significantly increased by 1.3219, 1.6855 and 1.1710 (P<0.05), respectively;The FSHβ loci had a remarkable effect on reproductive performance, the average weaning weight with BB genotype was significantly higher than AA genotype, which was significantly increased by 5.1129 kg (P<0.05). The ESR and RBP4 loci had no significant effect on reproductive traits (P>0.05), while the LEP and FSHβ genes were valuable candidates for possible marker-assisted selection in British Landrace pigs population.     

A new HpaII PCR-RFLP within the porcine prolactin receptor (PRLR) gene and study of its effect on litter size and number of teats

DNA polymorphism of the porcine prolactin receptor gene ( PRLR ) was investigated and used to study its effect on litter size and number of teats in pigs. By means of PRLR gene sequence homology in pig, human and other species, primers were designed for PCR amplification within 5' unknown (to date) part of the prolactin receptor gene in pigs. In this part of the gene, a new polymorphism with Hpa II restriction endonuclease was detected. Alu I polymorphism described before and our new Hpa II polymorphism were used to study the associations with reproduction traits. The PCR restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method was used to genotype Alu I and Hpa II loci of the PRLR gene in line A with 83 sows of Landrace breed and in two lines (B and C) with 75 and 86 Large White sows, respectively. Statistical analysis of 1020 litters showed that Alu I locus was associated with litter size mainly in Landrace and affected the first parities, while Hpa II locus of the gene was associated with the same traits in Landrace and Large White pigs and mainly affected numbers of weaned of pigs. The magnitude of the effect varied by population with the effects exceeding two pigs per litter in Landrace line and 1 pig per litter in Large White populations.     

大白猪和长白猪EPOR基因第4内含子多态性与繁殖性状的关联分析

本研究以大白猪和长白猪为研究对象,以促红细胞生成素受体（erythropoietin receptor,EPOR）基因作为产仔性状的候选基因,采用PCR-SSCP方法来检测EPOR基因第4内含子C＼T突变多态性,研究此位点多态性与猪繁殖性状之间的关联性。结果发现,在长白猪和大白猪中存在AA、AB和BB共3种基因型,在2个群体中处于中度多态。利用SAS 8.0软件采用最小二乘法拟合线性模型,将不同基因型与总产仔数（TNB）、产活仔数（NBA）和初生重（WB）进行了关联分析,结果表明,长白猪初产母猪BB基因型个体的WB显著高于AB、AA基因型个体（P＜0.05）;经产母猪BB基因型个体的TNB显著高于AB基因型个体（P＜0.05）;B等位基因对初产母猪TNB、NBA和WB均表现为正效应。大白猪初产母猪BB基因型个体的TNB、NBA和WB都高于AA型和AB型个体,但差异均不显著（P＞0.05）;经产母猪AB基因型个体的WB显著高于AA基因型个体（P＜0.05）;B等位基因对初产母猪TNB、NBA和WB都表现为正效应。     

4猪种Nramp1基因第6内含子多态性研究

天然抗性巨噬蛋白(Nramp)基因是与人、鼠的一些病原微生物的易感性和抗性有关的重要候选基因。为了研究猪Nramp1基因的多态性,利用PCR-RFLP技术检测了杜洛克、大白猪、长白猪和合作猪共270头个体Nramp1基因第6内含子NdeⅠ酶切位点多态性。结果表明,4个猪种群共检测到3种基因型(AA、AB和BB),其中AB基因型为杜洛克、大白猪和长白猪的优势基因型;AA基因型为合作猪的优势基因型。经卡方适合性检测,杜洛克、合作猪和长白猪处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),大白猪处于Hardy-Weinberg不平衡状态。多态信息含量分析显示,Nramp1基因的第6内含子NdeⅠ酶切位点在各猪种表现出中度多态性。     

猪催乳素受体基因第8内含子多态性检测及效应分析

采用PCR-SSCP技术分析了杜洛克猪、长白猪、大白猪、马身猪、山西瘦肉型猪SD-〖KG-*4〗Ⅰ系、SD-〖KG-*4〗Ⅱ系、SD-〖KG-*4〗Ⅲ系和山西白猪等8个猪种372头个体催乳素受体基因（PRLR）第8内含子多态性,检测到A、B、C 3个等位基因和AA、AB、AC和CC 4种基因型。等位基因A在所有品种中频率都较高（0.50~0.62）,等位基因B在杜洛克猪中频率较低（0.12）,在其它品种中频率为中等（0.24~0.44）,等位基因C在杜洛克猪和SD-Ⅲ系中频率较高（0.26）,在其他品种中频率很低（0~0.04）。对AA和CC 2种纯合子进行克隆测序和同源序列比较,发现在扩增片段内有4处突变,即G→A、T→C、A→G的转换突变和TTT插入突变,都发生在PRLR基因的第8内含子。利用140头母猪头胎产仔记录和118头山西白猪后备猪生长发育记录,采用最小二乘分析方法研究了PRLR基因型对猪繁殖性状和生长发育性状的影响,结果表明不同基因型母猪的头胎总产仔数和产活仔数差异不显著。但PRLR基因型对后备猪乳头数、6月龄体重和背膘厚等性状有显著影响,AA型个体的乳头数显著高于AC型（P<0.05）;AC型个体的6月龄体重和背膘厚显著高于AB型（P<0.05）。