复方阿普拉霉素对禽巴氏杆菌的抑菌试验

采用药敏纸法和试管法对禽巴氏杆菌进行体外抑菌试验。结果表明 :阿普拉霉素和恩诺沙星组成的复方制剂对禽巴氏杆菌的 MIC为 1u 1μg/ ml,MBC为 2 u 2 μg/ ml,明显优于阿普拉霉素 (2 .2 5 u/ ml)和恩诺沙星 (MIC为 3.2 μg/ ml)。说明二者组成复方后 ,抗菌活性增强     

9种抗菌药物对禽多杀性巴氏杆菌体外抗菌活性研究

采用试管二倍稀释法，测定了9种抗菌药物对禽多杀性巴氏杆菌的体外抗菌活性（MIC和MBC）。结果表明氨苄西林、阿莫西林和诺氟沙星对禽多杀性巴氏杆菌的MIC均为0．125μg／mL，诺氟沙星MBC为0．5μg／mL，氨苄西林和阿莫西林的MBC都为1．0μg／mL。氟苯尼考、替米考星和卡那霉素对禽多杀性巴氏杆菌的MIC分别为：0．5、2和2μg／mL。     

中西药联合对小鼠巴氏杆菌病的防治效果试验

为了解中西药联合对巴氏杆菌的体内外抑菌效果,采用二倍稀释法和微量肉汤稀释棋盘法测定香附、黄连、山药、山银花、益母草、决明子6种中药和阿莫西林、硫酸新霉素、盐酸多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星、替米考星、头孢噻呋钠7种抗菌药对巴氏杆菌的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC),筛选抑菌效果最好的中药和抗菌药,观察其对小鼠人工感染巴氏杆菌病的防治效果。结果表明,单味中药香附抑菌效果(MIC为25 mg/mL)和杀菌效果(MBC为50 mg/mL)最好,抗菌药中恩诺沙星体外抑菌效果(MIC为0.5μg/mL)和杀菌效果(MBC为1μg/mL)较好,香附与恩诺沙星联合用药抑菌效果增强(FIC=0.56)。预防组和治疗组相对于阳性对照组的死亡率有所降低;香附对小鼠的巴氏杆菌病预防和治疗的保护率分别为10%、25%,恩诺沙星对小鼠的巴氏杆菌病预防和治疗的保护率分别为60%、75%,香附与恩诺沙星联合使用时的预防与治疗效果增强,保护率分别为70%和80%。表明香附与恩诺沙星两种药物联合比单药的防治效果好。     

乙酰甲喹对畜禽常见致病菌的体外抗菌活性研究

利用纸片扩散法和试管二倍稀释法验证了乙酰甲喹注射液对畜禽常见致病菌的体外抗菌效果。纸片扩散法结果表明,乙酰甲喹注射液对禽大肠杆菌、猪大肠杆菌、沙门氏菌、鸡巴氏杆菌、链球菌、绿脓杆菌高度敏感,对金黄色葡萄球菌中度敏感。试管二倍稀释法结果表明,乙酰甲喹注射液对畜禽主要致病菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.004～0.036μL/mL,最小杀菌浓度为(MBC)为0.009～0.036μL/mL。该研究结果表明,乙酰甲喹注射液对常见的病原菌有较好的抗菌效果,适合临床使用。     

头孢曲松钠可溶性粉对鸡绿脓杆菌的体外抑菌试验及其临床疗效

为探讨和了解头孢曲松钠对鸡绿脓杆菌病的治疗效果及合理的用药剂量,设计了本试验。结果表明,头孢曲松钠可溶性粉对链球菌608、鸡巴氏杆菌458、大肠杆菌1555、大肠杆菌216、大肠杆菌1515、猪巴氏杆菌437、沙门菌 cvcc533、鸡绿脓杆菌 R 敏感,最小抑菌浓度(MIC)为0.004～1.250 μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为0.009～2.500 μg/mL。头孢曲松钠可溶性粉50 mg/L 饮水给药,可有效防治由绿脓杆菌引起的家禽传染病,对临床用药有很好的指导作用。     

苦豆子及其复方药对奶牛子宫内膜炎5种致病菌的体外抑菌活性研究

采用酸法提取苦豆子(Sophoraalopecuroides L.)的有效成分,并用96孔板微量肉汤稀释法测定苦豆子生物总碱的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。采用(K-B)纸片扩散法,以盐酸小檗碱为对照,考察苦豆子提取物及其复方灌注剂对致病菌的抑菌效果。结果表明,苦豆子总生物碱对表皮葡萄球菌抑制效果最佳,MIC为16g/L,MBC为32g/L。苦豆子总生物碱、复方灌注剂及硫酸小檗碱的抑菌环平均直径分别为14.28,18.61和18.02mm。由此得出苦豆子总生物碱及其复方灌注剂有明显的抗菌作用。     

乳酸恩诺沙星对温和气单胞菌的体外抗菌后效应

为研究乳酸恩诺沙星对温和气单胞菌(A.sobria)的体外药效学,采用二倍稀释法测定了乳酸恩诺沙星对温和气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),在此基础上探究在温和气单胞菌的不同生长时期加入乳酸恩诺沙星后对其生长的影响,研究乳酸恩诺沙星不同药物浓度(2×MIC、4×MIC、8×MIC)作用对温和气单胞菌的杀菌动力学和抗菌后效应(PAE)。结果显示,乳酸恩诺沙星对温和气单胞菌的MIC和MBC分别为0.39μg/mL和1.56μg/mL,乳酸恩诺沙星对温和气单胞菌有较强的杀菌作用,其PAE与药物浓度呈正相关。     

硫酸头孢喹肟对鸭疫里默氏杆菌的体外抑菌活性测定

试验应用试管二倍稀释法测定硫酸头孢喹肟可溶性粉对鸭疫里默氏杆菌(RA)的最小抑菌浓度(MIC),并设盐酸环丙沙星可溶性粉、盐酸多西环素可溶性粉和氟苯尼考可溶性粉为对照药物。结果显示,硫酸头孢喹肟可溶性粉对鸭疫里氏杆菌有较强的抗菌活性,MIC为0.082μg/mL,抗RA效果优于盐酸环丙沙星可溶性粉、盐酸多西环素可溶性粉和氟苯尼考可溶性粉。头孢喹肟作为第四代头孢菌素类药物,抗革兰氏阴性菌作用强,可用于临床治疗鸭疫里氏默杆菌感染。     

正己酸对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制效果研究

对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行正己酸的抗性试验,以研究正己酸对病原菌的抑制作用。试验采用等浓度梯度稀释、光密度值测定、平板涂布方法、牛津杯法,分别测定大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)以及最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),绘制1/2MIC以及MIC处理过的大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的生长曲线,抑菌圈直径,结合扫描电镜图片分析最小杀菌浓度处理后的细胞形态结构的变化。结果表明:正己酸对大肠杆菌的最小抑菌浓度为700μg/mL、对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1 000μg/mL;对大肠杆菌的最小杀菌浓度为1 000μg/mL、对金黄色葡萄球菌的最小杀菌浓度为1 300μg/mL;当正己酸浓度为1 600μg/mL时,电镜下,大肠杆菌数量较少,金黄色葡萄球菌数量少且呈现出细胞破裂萎缩现象。综上,正己酸对大肠杆菌和金黄葡萄球菌有抑制作用,破坏了金黄葡萄球菌的细胞膜结构。     

中药单味药及复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用

本试验用煎煮法提取中药有效成分,采用琼脂平板扩散法探讨了黄连、五倍子、大黄、诃子等中药单味药及中药复方对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的体外抑菌作用,测定了抑菌圈大小.采用双倍试管稀释法测得了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).试验结果表明,16种中药提取物对嗜水气单胞菌有不同程度的抑制作用,其中五倍子、黄连、诃子、大黄的水提物的抑菌效果最好,MIC值分别为7.81 mg/mL、15,63 mg/mL、31.25 mg/mL、62.50 mg/mL.五倍子作为主药,分别与诃子、黄连、大黄接一定比例组成的复方的MIC分别为3.906 mg/mL、7.813 mg/mL、15.625 mg/mL.通过对筛选的复方与市场上销售的3种成品复方的体外抑菌活性的比较,发现本实验室筛选的复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌活性更强.     

河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌分离鉴定、毒力因子及耐药性检测

[目的]为了分析河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌携带毒力基因和耐药性情况,[方法]2020—2021年在河西走廊地区采集患腹泻病犊牛的粪便、肛拭子及肝脏等病料组织279份,采用人工感染试验动物、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测犊牛腹泻性大肠杆菌致病性、毒力因子和耐药性。[结果]结果表明,分离得到了126株大肠杆菌,其中79株犊牛腹泻性大肠杆菌能引起小鼠死亡;分离的79株致病性大肠杆菌的毒力基因crl、irp2、fimH、papC、K88、K99、stx1、stx2检测率在40.5%～100%之间,其他毒力基因检测率在15.2%～34.2%之间;分离的79株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等8种药物的耐药率在49.4%～96.2%之间,对其他药物的耐药率在5.1%～32.9%之间。[结论]从河西走廊地区患腹泻病犊牛病料组织中分离得到79株致病性大肠杆菌,这些菌株携带多种毒力基因,对临床中常用的抗菌药物产生了耐药性。     

3种抗菌药对鸡大肠杆菌病的临床疗效比较

本次试验用从锦州地区郊区某养殖户采集的鸡大肠杆菌病料进行了体外抑菌试验和临床试验,观察了康诺奇、安氟尼和普维欣对大肠杆菌的抑制效果。体外抑菌试验采用的是药敏试验的纸片扩散法,采用两种方法制备菌悬液,2种方法的药敏试验结果均显示康诺奇极敏感、安氟尼高度敏感。选取某养殖户病鸡300只,分为3组,分别用这3种药物进行治疗,并在组内设4个重复,其平均治愈率为康诺奇98.2%、安氟尼96.2%、普维欣92.3%。3种药物中康诺奇的疗效最好,显效快,其他两种药物也有很好的疗效。通过本次试验为锦州地区鸡大肠杆菌病的防治用药提供参考。     

中药对鸡致病性大肠埃希菌的体外抑菌试验

为研究25种中药对秦皇岛地区鸡致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)地方流行株QH1(O78)、QH2(O89)、QH4(O1)的体外抑菌效果,以E.coli标准株ATCC25922作为质控菌株。利用水提法制备中药药液,使终浓度为1g/mL;用平板琼脂打孔法和改良微量二倍稀释-平板法分别测定25种中药的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,金银花、黄连、乌梅、五味子4种中药对鸡致病性E.coli地方株极度敏感,抑菌圈直径在20.3mm~22.7mm之间,其MIC在15.65mg/mL~31.25mg/mL之间;其他药物对鸡致病性E.coli地方株有不同程度的敏感性,为鸡致病性E.coli地方株中药防治提供理论基础。     

藏香猪源大肠埃希菌致病性和血清型检测及药敏试验

为了解四川省藏香猪源大肠埃希菌致病性、血清型及耐药性情况,从四川省藏香猪养殖场中无菌采集腹泻仔猪肝脏、肛拭子及粪便等组织病料253份中,分离得到155株大肠埃希菌。采用人工感染小鼠致病性试验、玻板凝集试验和KB药敏纸片法分别测定155株大肠埃希菌分离菌株的致病性、血清型及耐药性。结果显示,小鼠致病性试验表明155株分离菌中120株有致病性;玻板凝集试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株属于14个血清型,以O111、O147、O109和O119为主要流行的优势血清型;耐药性试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株对阿莫西林、氨苄西林、新霉素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药较严重,耐药率在94.2%~98.3%之间,对庆大霉素、氟苯尼考、多西环素等6种药物耐药率在44.2%~85.0%之间,对其他药物耐药率在15.0%~37.5%之间。说明该地区藏香猪源致病性大肠埃希菌血清型呈多样性分布,耐药性严重。     

双黄连可溶性粉不同组分抗菌抗病毒活性研究

为了深度开发双黄连可溶性粉（金银花、连翘、黄芩，1：1：2），并为家禽、家畜合理选择用药提供科学依据，本研究以双黄连口服液生产工艺生产的双黄连可溶性粉及其醇沉物（多糖组分）、滤液（黄酮组分）作为研究材料，以哺乳动物牦牛源轮状病毒、鸡新城疫病毒，牦牛源致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌为研究对象，采用牛津杯结合平板二倍稀释法，探讨其体外抗菌活性；以牦牛MA-104细胞株、鸡胚成纤维细胞株UMNSAH/DF-1为宿主细胞，采用噻唑蓝比色法（MTT）和细胞病变（CPE）检测法，探讨其体外抗病毒活性。研究结果表明，双黄连可溶性粉对革兰氏阴性菌（牦牛源大肠杆菌、牦牛源沙门氏菌、大肠杆菌质控菌株）的抑菌效果优于对革兰氏阳性菌（牦牛源金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球质控菌株）的抑菌效果，从双黄连可溶性粉中分离的黄酮组分可能是双黄连可溶性粉抑菌的主要成分，而多糖组分则无抑菌活性；黄酮组分对革兰氏阳性菌的抑菌效果优于对革兰氏阴性菌的抑菌效果；双黄连可溶性粉及其黄酮组分和多糖组分对鸡胚胎成纤维细胞UMNSAH/DF-1的最小无毒浓度（TC₀）分别为：2.58、1.17和1.56 μg/mL，对牦牛细胞MA-104的TC₀分别为：1.290、0.585和0.780 μg/mL，对牦牛轮状病毒均具有良好的抗病毒效果，双黄连可溶性粉对鸡新城疫病毒的抗病毒效果优于黄酮和多糖组分。研究结果为双黄连可溶性粉深度开发和对畜禽合理选择用药提供了科学依据。     

Isolation,Identification and Genetic Evolution Analysis of Mink Serratia marcescens

In order to determine drug resistance, pathogenicity and genetic of the pathogenic bacteria in mink of Heilongjiang province, three strains were isolated from dead minks and identified. Based on colony morphology, microscopic characteristics, biochemical test and 16S rRNA sequencing. The antibiotic susceptibility to 24 antibiotics were detected by using standard K-B paper method, and virulence assay, phylogenetic analysis were carried out at the same time. The result showed that the isolates were highly tolerance to antibacterials, could cause 100% death of mice in experimental group and were closely related to strains from activated sludge and volcanic deposits. It showed that Serratia marcescens infection of mink existed in Heilongjiang province. Strains resistance phenomenon was serious and had a strong pathogenicity, and might be originated from the environment. It was the first time that the pathogenic Serratia marcescens isolated from the mink was reported. The results provided information for the detection, identification, diagnosis, treatment and prevention of related diseases.     

水貂源致病性黏质沙雷氏菌的分离鉴定与遗传进化分析

为确定水貂黏质沙雷氏菌的耐药状况、致病性及其遗传特征,本研究从黑龙江省患病死亡水貂中分离得到3株细菌,根据其形态特征、培养特性、生化试验及16S rRNA序列测定对分离菌进行鉴定;随后用K-B法测试分离株对常见的24种抗菌药的敏感性,并进行了致病性试验和遗传进化分析。结果显示,分离菌为黏质沙雷氏菌,对多种常用抗菌药物具有高度耐药性;可引起试验组小鼠100%死亡;分离株与来自活性污泥与火山堆积物环境的菌株遗传亲缘性最近。表明黑龙江省水貂中存在黏质沙雷氏菌的感染,分离株耐药现象较严重并具有很强的致病性,同时提示该菌株可能来源于环境中。本试验从水貂中分离得到致病性黏质沙雷氏菌为首次报道,研究结果可作为该菌感染水貂导致相关疾病的检测、鉴别和预防依据。     

Extraction,Purification and Activity Analysis of Lipopolysaccharides from Escherichia coli Isolated from Swine

In order to obtain higher purity and high yield of LPS isolated from Escherichia coli, and evaluate its virulence,excrement of diarrhea piglet was collected as pathological samples, of which, some strains of Escherichia coli were isolated and identified. And furthermore, a strain of Escherichia coli was acquired by 16S rDNA identification. The LPS from this strain of Escherichia coli was isolated with the hot-phenol water method and purified by DNaseⅠ, RNaseA, proteinase K treatment and alcohol precipitation. The polysaccharide, protein and nucleic acid content of purified LPS were detected by phenol-sulfuric acid method, Bradford method and UV points spectrophotometric method. And its bioactivity and acute median lethal dose was determinated by tachypleus amebocyte lysate (TAL) method and acute toxicity experiment method, respectively. The results showed that a strain of highly pathogenic Escherichia coli was successfully isolated. The average yield of purified LPS was 3.74%, the proportion of the polysaccharide was 13.40%, the protein was 0.48%, and the nucleic acid was 0.06%. SDS-PAGE electrophoresis and silver stain showed that the bands were mainly concentrated in the range of 14 to 160 ku. The LAL bioactivity of the prepared LPS was 1.21×10⁷ EU/mg, LD₅₀ of the mouse abdominal cavity was 31.86 mg/kg. The results revealed that the diarrhea piglets in the farm was caused by pathogenic Escherichia coli,purified LPS from this strain of Escherichia coli had the advantages of higher purity, high yield and strong virulence, which would provide theoretical data for clinical prevention and treatment of diarrhea piglets.     

猪源大肠杆菌脂多糖的提取、纯化及活性分析

为了从猪源大肠杆菌中获得纯度高、产率高的脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）,并评价其毒力,本试验采集仔猪腹泻粪便作为病料,进行细菌分离鉴定和16S rDNA鉴定,采用热酚水法提取细菌的LPS,通过DNaseⅠ、RNaseA、蛋白酶K和醇沉法对LPS进行纯化,通过苯酚硫酸法、Bradford法和紫外分光光度法测定LPS多糖、蛋白及核酸含量,鲎试剂定量法测定其活性,采用小鼠急性毒性试验方法测定小鼠半数致死量（LD₅₀）。结果显示,分离获得一株具有高致病性的猪源大肠杆菌,纯化的猪源大肠杆菌LPS平均产率为3.74%,其中多糖含量为13.40%,蛋白含量为0.48%,核酸含量为0.06%,主要条带集中在14~160 ku范围内,鲎试剂定量法测定其活性为1.21×10⁷ EU/mg,提取LPS对小鼠的LD₅₀为31.86 mg/kg。该猪场仔猪腹泻是由致病性大肠杆菌引起,获得其毒力因子LPS纯度高、产率高、毒力强,这将为临床防制猪大肠杆菌病及LPS提取纯化提供理论依据。     

南昌市郊梨轮纹病病原菌鉴定

摘要：为了明确南昌市郊区梨轮纹病菌的种类归属，本文从果园采集呈典型症状的梨轮纹病样本，采用组织分离法进行病菌分离和病菌纯化，获得5个梨轮纹病菌分离株，该5个分离株的培养性状相同且与已报道的葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的培养性状一致。用菌饼对离体梨枝条进行接种，结果5个分离株均导致典型病斑，对该病斑进行再分离，又分离到与原接种菌一致的病原菌。任选其中的一个分离株NC-1进行rDNA-ITS序列扩增和序列测定，获得片段长为543bp的核苷酸序列，通过BLAST分析，发现该序列与GenBank中葡萄座腔菌的同源性高达100%。上述结果表明南昌市郊区梨轮纹病菌属于葡萄座腔菌