蜂王浆中氯霉素残留量的LC-MS/MS与ELISA检测方法研究

介绍了利用LC-MS/MS与ELISA方法快速、准确地测定蜂王浆中氯霉素残留量.前处理方法包括用酸沉淀蛋白、乙酸乙酯提取、自制硅胶柱、Oasis(HLB)小柱等净化步骤.同时,在LC-MS/MS测定方法中使用了同位素内标氯霉素-d5.建立的LC-MS/MS方法,多反应监测了氯霉素3对离子(321.0/256.9、321.0/194.0、321.0/175.8)和同位素内标氯霉素-d5 1对离子(326.0/157.1),检测低限为0.2μg/kg,线性范围为0.2～0.8μg/kg,加标回收率为97%～102%,RSD为1.9%～7.1%;ELISA方法检测低限为0.1μg/kg,该水平添加回收率为108.2%,RSD为12.2%.     

饲料中己烯雌酚ELISA检测方法的建立

为了建立一种饲料中己烯雌酚(DES)残留的检测方法,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测,并对该方法的检测限、准确度、精密度和特异性等参数进行考察。结果表明:本试剂盒的线性工作范围为0.1~8.1μg/kg,IC50浓度为0.417μg/kg,对饲料中DES的检测限为5μg/kg;对饲料样品中DES的添加回收率范围为83%~107%,批内变异系数≤5.7%,批间变异系数≤6.3%;与DES类似物无交叉反应。本研究所建立的ELISA检测方法具有简单、灵敏、准确等特点,适用于饲料中DES残留的快速检测。     

磺胺二甲嘧啶药物残留ELISA检测试剂盒的研制及初步应用

本试验旨在采用重氮化法合成的免疫抗原通过免疫BALB/c小鼠进行融合,获得高特异、高灵敏度的单克隆抗体。在建立磺胺二甲嘧啶单克隆抗体(SM2 mAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA的基础上,初步研制出一种一步法检测磺胺二甲嘧啶(SM2)的ELISA快速检测试剂盒(SM2-Kit)。结果表明:SM2-Kit检测范围为0.5～40.5μg/L,检测时间为30 min,IC50为1.4μg/L,最低检测限达0.1μg/L。经大量现场试验,猪肉组织最低检测限为1μg/kg,猪饲料最低检测限为1μg/kg,猪尿最低检测限为1.8μg/L,牛奶最低检测限为1.5μg/L,测试的回收率平均在70%～110%。     

鸡肉组织中环丙沙星残留的ELISA与HPLC检测方法比较

利用单克隆抗体间接竞争ELISA方法测定了鸡肉中环丙沙星的残留,同时利用HPLC方法进行了比较分析。间接竞争ELISA法的线性范围为6.25~400μg/L,最低检测限为4.10μg/L。HPLC法的线性范围为0.06~500μg/L,最低检测限为0.06μg/L。在标准品添加量为1.5625×10-4~1.25×10-3g/kg时,ELISA方法的平均回收率为73.81%,批内变异系数为8.75%,HPLC方法平均回收率为80.41%,批内变异系数为1.27%。结果显示,ELISA方法与HPLC方法具有很好的相关性(r2=0.9925),该ELISA方法可用于鸡肉样品中环丙沙星的检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测牛奶中7种氨基糖苷类药物残留

应用超高效液相色谱-串联质谱技术,建立了牛奶中7种氨基糖苷类药物(链霉素、双氢链霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、安普霉素、大观霉素)的检测方法。样品经乙酸铵缓冲液提取,固相萃取柱净化,CORTECS HILIC为分离色谱柱,采用甲酸铵溶液作为流动相进行梯度洗脱,通过多反应监测模式进行测定。在0.1~5μg/m L的范围内线性关系良好,相关系数均大于0.996。在20、50、200μg/kg添加水平下,平均回收率为80%~117.5%,相对标准偏差均小于15%。检测限为10μg/kg,定量限为20μg/kg,该方法准确、简单、快速。     

牛奶中庆大霉素半定量胶体金试纸条的研制

先将庆大霉素与载体蛋白偶联形成完全抗原,再与庆大霉素单克隆抗体反应制备试剂条。通过抗原抗体之间的免疫反应,采用胶体金检测方法,将抗原按不同浓度喷制两条检测线,使牛奶中庆大霉素检测灵敏度分别为20μg/kg和100μg/kg,该检测限满足我国及欧盟对庆大霉素检测的要求,并且能够实现牛奶样品中庆大霉素现场快速检测。     

三种方法检测克伦特罗确保猪肉食用安全

本篇文章主要提出用三种方法:试剂条法、ELISA法、液相串联质谱法做为检测克伦特罗的重要手段。我们利用6个尿样和6个组织样品分别做了添加回收。用试剂条法检测6份添加浓度分别是3μg/L、6μg/L猪尿样品,其结果显示是阳性。用ELISA法对添加浓度分别是100ng/kg、300ng/kg的6份组织样品进行检测,回收率是98.9%～99.4%,液相串联质谱法检测猪肉组织中添加浓度为50ng/kg,100ng/kg,300ng/kg,500ng/kg的组织样品,检测回收率为99.4%～103.4%,验证结果证明三种方法均能满足实际检测的需要。     

水产品中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺酶联免疫多残留测定

将氟苯尼考胺与载体蛋白相连作为抗原免疫动物,获得抗甲砜霉素等药物的抗体,建立了水产品中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的ELISA检测方法。结果显示,人工抗原中氟苯尼考胺与蛋白质分子的结合比约为12∶1,血清效价达到1∶2000倍以上,50%抑制浓度(IC50)为3μg/L左右,3种酰胺醇类药物交叉反应率在30%～156%之间,鱼和虾肌肉组织中的检测限分别为6.3μg/kg和6.1μg/kg,在鱼和虾肌肉组织中三种药物的回收率在40%～120%之间,检测范围为0.2～125μg/L。该方法可同时测定甲砜霉素、氟苯尼考及其标示残留物氟苯尼考胺等3种化合物残留量。方法灵敏度、精密度和准确度均能满足兽药残留筛选检测要求。     

大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法的建立

旨在建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法。经琼脂糖凝胶层析纯化大豆抗原蛋白,以不同剂量皮下注射免疫小鼠,采用方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法,利用该方法检测小鼠免疫后血清抗体水平。通过方阵滴定法确定11S蛋白最佳包被浓度为5.0μg/mL,血清稀释倍数为1∶800;7S蛋白抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL,血清稀释倍数为1∶1 600;两者的批内、批间系数均小于10%,重复性较好,通过ELISA法确定11S和7S蛋白的最佳免疫次数为2次,免疫剂量为1 000μg/kg。结果表明本试验初步建立大豆抗原蛋白抗体检测间接ELISA方法,具有很强的特异性、敏感性和重复性,可用于大豆抗原蛋白过敏反应的临床检测。     

鸡组织中对羟基肉桂酸残留的UPLC检测方法研究

建立了鸡组织(肌肉、肝脏、肾脏)中对羟基肉桂酸(PCA)超高效液相色谱检测方法。组织样品用无水乙醚提取,提取液50℃氮气吹干,20%的甲醇溶液复溶,用0.22μm滤膜过滤。以C18为色谱柱,甲醇-1%乙酸溶液(20/80,v/v)为流动相,检测波长310 nm,流速0.3 mL/min,用超高效液相色谱检测。对羟基肉桂酸标准品工作液在5～400 ng/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9996);组织中药物添加浓度分别为20、50、100μg/kg时,其样品中药物平均回收率分别98.46%～103.66%、85.09%～107.15%和80.27%～97.63%;日内、日间变异系数均≤10%。在该检测条件下,PCA在鸡肌肉、肝脏、肾脏中检测限分别为1μg/kg、2μg/kg和1μg/kg。定量限分别为2μg/kg、4μg/kg和2μg/kg。该方法样品处理简单,且准确度和精密度均符合残留检测方法要求,可以作为对羟基肉桂酸在鸡组织内的残留检测方法。     

金黄色葡萄球菌肠毒素ELISA检测方法的建立及应用

采用金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)和金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)免疫Balb/c小鼠制备相应的单克隆抗体(m Ab),并以此为基础建立SEA和SEB的ELISA检测方法,用于牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。SEA双抗体夹心法ELISA的曲线范围是1~16μg/L,相关系数R2=0.9996,检测牛乳的检测限是0.431μg/L,加标4μg/L和10μg/L,准确度分别为89.18%和97.62%。SEB双抗体夹心法ELISA的曲线范围是0.5~8μg/L,相关系数R2=0.9998,检测牛乳的检测限是0.335μg/L,加标4μg/L和10μg/L,准确度分别为107.83%和89.88%。     

液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中7种氟喹诺酮类药物的残留量

建立了一种液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中7种氟喹诺酮类药物残留的方法。样品经EDTA-Mcllvaine缓冲液提取,冷冻离心,然后用正己烷脱脂,有效地去除杂质,HLB固相萃取柱净化,氮气吹干浓缩,流动相溶解,进行LC-MS/MS定性定量分析。其中5种氟喹诺酮类药物含量在2.5μg/kg~100μg/kg范围内,线性关系良好,环丙沙星和恶喹酸含量分别在6μg/kg~240μg/kg和0.25μg/kg~10μg/kg范围内,线性关系良好,相关系数均大于0.995 9;添加量在100、200、500μg/kg时,该方法的加标回收率为36.9%~81.2%,相对标准偏差均小于15.8%。该方法对环丙沙星和恶喹酸的检测限分别为1.2μg/kg和0.05μg/kg,定量限为24μg/kg和1μg/kg,其他5种氟喹诺酮类药物的检测限为0.5μg/kg,定量限为10μg/kg,表明所建立的方法适用于鸡蛋中7种氟喹诺酮类药物残留的定性和定量检测。     

猪肉中四环素类抗生素残留的ELISA检测

采用间接竞争ELISA检测猪肉及内脏组织中土霉素、四环素、金霉素的残留量,在50~300μg/kg浓度范围内,标准添加样品回收率81.3%~122.4%,变异系数2.7%~11.1%。本方法的建立为四环素类抗生素残留的快速检验试剂盒的研制奠定了基础。     

猪肉中氟苯尼考残留量高效液相色谱-串联质谱检测方法的建立

本研究通过高效液相色谱-串联质谱法(High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,HPLC-MS/MS)建立了猪肉中氟苯尼考残留物残留量的检测方法,检测限和定量限分别为5μg/kg和10μg/kg。在10μg/kg~4000μg/kg浓度范围内,空白猪肉样品的标准曲线线性关系良好,相关系数均在0.99以上。氟苯尼考和氟苯尼考胺的添加浓度在10μg/kg、500μg/kg和2000μg/kg时,回收率均大于85%,批间和批内变异系数均小于5%。该方法适用于猪可食性组织中氟苯尼考残留量的测定。     

动物源性食品中群勃龙ELISA检测技术的研究与应用

采用琥珀酸酐法对群勃龙进行化学修饰,合成半抗原,免疫动物,制备了特异性强的群勃龙单克隆抗体.建立了群勃龙ELISA检测方法,其灵敏度为0.05μg/L,对群勃龙的交叉反应率为100%,对去氢表睾酮和睾酮交叉反应率小于1%,19-去甲睾酮交叉反应率小于4.5%.以2.5,5.0,10.0 μg/kg添加水平的牛肉样本回收率范围为78.4%~105.6%,变异系数小于15%.该方法的建立为群勃龙残留检测提供了可靠的分析检测手段.     

液相色谱-串联质谱法测定羊肉中红霉素残留量

建立测定羊肉中红霉素残留量的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),为羊肉的监督检验和红霉素残留量监控提供技术支持。采用乙腈提取,正己烷除脂低温离心的前处理方法。电喷雾离子源ESI正离子扫描,选择MRM多反应监测等质谱条件进行样品检测,内标法定量。在5μg/kg～200μg/kg浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=5)。10、50、200μg/kg 3个浓度的相对回收率为97.54%～102.70%,日内精密度7%,日间精密度9%,检测限(LOD)为5μg/kg,定量限(LOQ)为20μg/kg,符合检测要求。建立的羊肉中红霉素残留量的LC-MS/MS检测方法操作简便,实用性强,灵敏度高,稳定性好,分离完全,峰形良好,适合羊肉中红霉素的残留量检测。     

鸡肉中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测方法的改进

对《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》进行改进,经试验验证,洗脱液改用含30%乙腈的流动相时,能提高方法的回收率。添加10μg/kg、100μg/kg、200μg/kg浓度水平时,测得的回收率为77.6%~95.2%,精密度10%,该方法检测环丙沙星的线性范围是5~200μg/kg,检出限是0.5μg/kg、定量限是11.7μg/kg;达氟沙星的线性范围是1~40μg/kg,检出限是0.11μg/kg、定量限是3.4μg/kg;恩诺沙星的线性范围是5~200μg/kg,检出限是0.5μg/kg、定量限是11.6μg/kg;沙拉沙星的线性范围是5~200μg/kg,检出限是0.5μg/kg、定量限是16.7μg/kg。说明改进后的方法能够满足鸡肉中氟喹诺酮类药物残留的检测。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法测定饲料中的无机砷及其他砷形态

试验旨在建立一种饲料中不同形态砷化合物分离检测方法,采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(HPLC-ICP-MS)分离检测饲料中的无机砷及其它砷形态。5种砷形态的方法检出限(以砷计)分别为:三价砷[As(Ⅲ)]4.0μg/kg,五价砷[As(V)]5.0μg/kg,一甲基砷(MMA)3.0μg/kg,二甲基砷(DMA)2.0μg/kg,砷甜菜碱(AsB)2.0μg/kg。加标回收率为88.6%~105%,相对标准偏差为2.1%~6.7%(n=6)。应用所建立的方法成功测定了饲料中不同形态砷化合物的含量。结果表明,饲料中的砷形态以有机砷为主,该法完全可以满足饲料中无机砷的检测要求。     

乌鸡中硝基咪唑类药物检测方法的研究

本研究建立了高效液相色谱串联质谱法测定乌鸡鸡肉中羟基甲硝唑和甲硝唑含量的方法。鸡肉样品经过乙腈水溶液提取,离心取用上清液再经过PRIMEHLB固相萃取柱净化、氮吹、甲醇水溶液定容以及0.22μm水相滤膜过滤,随后用液相色谱法串联质谱法检测硝基咪唑。结果显示:在线性范围0.1μg/L～500μg/L内,硝基咪唑类药物线性关系良好,甲硝唑相关系数为r=0.997,羟基甲硝唑相关系数为r=0.9993。在1.0μg/kg、2.0μg/kg和10μg/kg三个水平添加回收试验条件下,甲硝唑的回收率为80%～109%,相对标准偏差为2.45%～11.0%;羟基甲硝唑的回收率为74.0%～96.6%,相对标准偏差为3.96%～8.33%。可确定的方法检出限甲硝唑为0.35μg/kg,羟基甲硝唑为0.38μg/kg。该方法具有灵敏度高和重现性好的特点,可满足鸡肉中痕量元素的检测。     

TTC法检测牛奶中的抗菌药物

针对用TTC法检测牛奶抗菌药物残留过程中因为在被检乳样中加入指示菌的数量不稳定而影响检测的问题,本研究增设了菌液稀释度试验以确定加入的菌液量。同时,采用TTC法对奶牛场常用的几种抗菌药物检测其在乳中的最低检测浓度。结果是青霉素3μg/kg,链霉素660μg/kg,庆大霉素620μg/kg,卡那霉素6200μg/kg,红霉素30μg/kg,环丙沙星500μg/kg,土霉素100μg/kg,金霉素100μg/kg,磺胺嘧啶100μg/kg。本研究用TTC法对青霉素、红霉素、土霉素、金霉素和磺胺嘧啶的检测灵敏度均达到农业部规定的牛乳中兽药残留最高限量要求。TTC法具有简便、价廉的优点,并且所检测的抗菌素范围较广,符合我国奶牛场中使用抗菌药物种类较多的现状。