培养基成分对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻性的影响

以益生菌植物乳杆菌LIP-1为研究对象,MRS基础培养基为对照,通过改变培养基的成分及其含量（碳源、氮源、碳氮总量及碳氮比、缓冲盐）,研究培养基成分的变化对植物乳杆菌LIP-1高密度培养的活菌数以及冷冻干燥后存活率的影响。结果表明：通过优化工艺和配方确定的最佳培养基组成为碳源（蔗糖）添加量33.35 g/L、复合氮源（酵母粉、大豆蛋白胨、酪蛋白胨质量比3∶3∶5）添加量10.80 g/L、缓冲盐（乙酸钠、磷酸氢二钾、柠檬酸钠质量比2.5∶1∶1）添加量14.85 g/L（即0.13 mol/L）;用优化后     

复合饲用酶菌株A3产果胶酶的研究

本试验对黑曲霉A3菌株产果胶酶的液体发酵条件进行了初步研究。不同的碳源、氮源对产果胶酶均有影响,试验结果表明,该菌株产果胶酶较适培养基为:碳源为麸皮70 g／L和可溶性淀粉10 g／L、氮源为(NH4)2SO410 g／L和NH4NO3 3．5 g／L;诱导物以果胶20 g／L为最佳;适宜产酶条件为培养基起始pH 3．0,培养温度为25℃,发酵 72 h达到产酶高峰。     

青海高原早熟禾有益内生真菌营养生理特性的初步研究

禾草有益内生真菌是一种极具开发潜力的真菌,本实验从碳源、氮源、无机盐(Na Cl、Mg SO4·7H2O)、生长因子,单因子、正交这五个实验对禾草内生真菌进行摇床培养,p H均为自然。单因子实验培养选出最佳碳源为可溶性淀粉,其次为蔗糖、麦芽糖、山梨醇;最佳氮源为蛋白胨,其次为酵母膏、硝酸钾、硫酸铵;无机盐中Na Cl最佳浓度为2.5g/L,Mg SO4·7H2O最佳浓度为0.75g/L,最适生长因子是麸皮;通过正交实验研究了有益内生真菌营养生理特性液体培养基配方,筛选出适宜有益内生真菌菌丝体生长的最佳液体培养基配方为可溶性淀粉25 g/L,蛋白胨6g/L,Na Cl2.5 g/L,Mg SO4·7H2O0.5g/L。     

Lactobacillus fermentum F6的增殖培养基优化及高密度发酵的研究

对分离自少数民族传统乳制品中的Lactobacillus fermentum F6菌种的增殖培养基进行优化,并对其高密度发酵条件进行探索。通过测定不同组成培养基中菌体在600nm波长下的光密度和发酵液在不同发酵条件下的活菌数,得到最适增殖培养基配方及其高密度发酵条件。增殖培养基配方为:蔗糖62.0g/L、酵母粉35.5g/L、大豆蛋白胨12.0g/L、柠檬酸1.35g/L、柠檬酸钠22g/L、MgSO4·7H2O2g/L、MnSO4·5H2O100mg/L、Tween-801g/L。在5L发酵罐中,Lactobacillus fermentum F6经优化发酵条件,其活菌数可达到2.30×1010CFU/mL,加入保护剂经冷冻干燥后活菌数可达到1.45×1011CFU/g,存活率为79.11%。中试培养液中活菌数可达1.02×1010CFU/mL,存活率为58%。以上优化的增殖培养基和高密度发酵条件为Lactobacillus fermentum F6的工业化生产奠定了基础。     

短乳杆菌ZLB004发酵培养基的优化研究

为得到短乳杆菌ZLB004最佳发酵培养基,本试验研究了不同碳源、氮源、缓冲盐、微量元素对短乳杆菌活菌数的影响,并利用响应面分析法对筛选出的主培养基成分进行了优化,得到短乳杆菌ZLB004的发酵培养基为:葡萄糖31.4 g/L、酵母粉3.5 g/L、牛肉膏8.5 g/L、牛肉蛋白胨10 g/L、乙酸钠7.5 g/L、柠檬酸氢二铵3 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、硫酸锰0.2 g/L、硫酸锌0.6 g/L、吐温-80 1 ml/L、pH 6.5。短乳杆菌ZLB004在此培养基中37℃培养24 h,活菌数可达3.15×10~9cfu/mL,是优化前活菌数的4.03倍。     

一株枯草芽孢杆菌产抗菌肽培养基筛选及发酵工艺优化的研究

试验旨在对一株产抗菌肽枯草芽孢杆菌BL0006的发酵培养基和发酵条件进行优化,以提高发酵液中抗菌肽的效价。首先通过单因子试验筛选出培养基的最适碳源、氮源与无机盐分别为葡萄糖、蛋白胨和K_2HPO_4;在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法得到培养基最佳配方:通过摇瓶单因素试验对发酵条件、温度、接种量、转速进行了优化,优化后的发酵培养基为葡萄糖47.7 g/L、蛋白胨29.0 g/L、K_2HPO_4 3.3 g/L,摇瓶发酵工艺为接种量30 mL/L、初始pH 7.5、摇床转速220 r/min、培养温度37℃。优化后抗菌肽的效价提高到了4.25×10~4 U/mL,是优化前的3.51倍。综合试验结果,本研究筛选的培养基和优化后的发酵工艺可达到高产、降低成本、缩短发酵时间的效果。     

一株枯草芽孢杆菌产抗菌肽培养基筛选及发酵工艺优化的研究

试验旨在对一株产抗菌肽枯草芽孢杆菌BL0006的发酵培养基和发酵条件进行优化,以提高发酵液中抗菌肽的效价。首先通过单因子试验筛选出培养基的最适碳源、氮源与无机盐分别为葡萄糖、蛋白胨和K_2HPO_4;在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法得到培养基最佳配方:通过摇瓶单因素试验对发酵条件、温度、接种量、转速进行了优化,优化后的发酵培养基为葡萄糖47.7 g/L、蛋白胨29.0 g/L、K_2HPO_4 3.3 g/L,摇瓶发酵工艺为接种量30 mL/L、初始pH 7.5、摇床转速220 r/min、培养温度37℃。优化后抗菌肽的效价提高到了4.25×10~4 U/mL,是优化前的3.51倍。综合试验结果,本研究筛选的培养基和优化后的发酵工艺可达到高产、降低成本、缩短发酵时间的效果。     

长双歧杆菌BBMN68工业化培养基筛选

本实验以长双歧杆菌BBMN68生长状况为评价指标筛选一种低成本、易配制的工业化培养基。实验比较了菌株在四种常用双歧杆菌培养基中的生长状况,结果表明NPNL培养基生长效果最好（P〈0．05）;通过低成本氮源代替NPNL氮源,发现玉米浆干粉培养效果最好（P〈0．05）,玉米浆干粉最佳用量为55g／L;玉米浆干粉培养基中剔除磷酸盐缓冲液、无机盐溶液、L-半胱氨酸盐酸盐,对BBMN68生长状况没有显著性影响（P〉0．05）。长双歧杆菌BBMN68工业化最佳培养基配方为：55g／L玉米浆干粉,10g／L葡萄糖,1g／L吐温-80,活菌数达到4．4×10^9cfu／mL。     

短乳杆菌LB-02培养条件及培养基成分优化研究

研究通过单因子优化试验和正交试验对短乳杆菌培养条件和培养基成分进行初步的优化。结果表明:短乳杆菌属于兼性厌氧菌,最佳培养条件是:温度35℃、培养时间24h,pH5.5,接种量为1%;优化培养基成分:蛋白胨12g,酵母提取物5g,牛肉膏12g,葡萄糖16g,乙酸钠5g,柠檬酸铵2.15g,Tween801mL,MgSO4·7H2O0.58g,MnSO4·4H2O0.05g,K2HPO42g,水1000mL。优化培养后OD值达到1.839,活菌数能达到728亿CFU/mL。     

响应面法优化冬虫夏草菌产多糖液体发酵培养基

本试验应用响应面法对冬虫夏草菌CC-10液体发酵培养基进行优化,以提高胞内多糖含量同时降低生产成本。试验以多糖含量为响应值,先通过单因素试验确定最适碳源和氮源,采用Plackett-Burman试验从7个培养基组分中筛选出主要影响因素,爬坡试验逼近最佳响应值区域,最终通过Box-Behnken Design和响应面分析确定主因素的最优浓度。结果表明:冬虫夏草菌CC-10产多糖的最适碳源为麦芽糖,最适氮源为蛋白胨,综合菌株生长特性和生产成本,选择葡萄糖、麦芽糖组合碳源和蛋白胨、豆饼粉组合氮源;确定葡萄糖、麦芽糖、蛋白胨3个主因素,得到最优的产多糖培养基为葡萄糖9.3 g/L、麦芽糖18.8 g/L、蛋白胨6.1 g/L、豆饼粉4 g/L、KH_2PO_41 g/L、MgSO_40.5 g/L、核黄素0.5 mg/L。优化后的多糖含量为4.23%,是优化前的2.06倍。试验为后续大规模发酵生产提供理论参考。     

两歧双歧杆菌TMC3115冻干菌粉生产工艺优化

为制备高活性两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）TMC3115冻干菌粉,对培养基初始pH值和初始接种量进行研究,同时对不同碳源和氮源进行初步筛选,进而以发酵16 h发酵液pH值、光密度和活菌数为评价指标,通过正交试验对碳源和氮源组合进行筛选。考察18 种冻干保护剂对两歧双歧杆菌TMC3115的冻干保护效果,并通过正交试验确定复合冻干保护剂配方。结果表明：两歧双歧杆菌TMC3115在培养基初始pH值7.2、接种量4%时所得发酵液活菌数最高;两歧双歧杆菌TMC3115发酵培养基配方为葡萄糖添加量25 g/L、胰酪蛋白胨20 g/L、酵母蛋白胨10 g/L、酵母浸粉FM902 15 g/L、柠檬酸氢二铵2 g/L、无水乙酸钠5 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、吐温-80 1 g/L、硫酸镁0.58 g/L、硫酸锰0.25 g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5 g/L;最佳冻干保护剂配方为：脱脂乳添加量12%、海藻糖12%、丙三醇1.2%、谷氨酸钠0.6%、L-半胱氨酸盐酸盐0.15%,此条件下,两歧双歧杆菌TMC3115冻干粉活菌数达到4.26×1011 CFU/g。     

乳酸乳球菌高效电转化方法的建立

以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactisNZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明：在固定电阻200Q、电容25μF条件下,收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞,并以80μL体积分装,采用2mm规格的电击杯,加入浓度为1．2μg／μL的质粒,在电场强度和脉）中时间分别为10kV／cm和5ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2h后涂板计数,转化效率最高可以达到2．6×10^4CFU／μgDNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。     

饲用枯草芽孢杆菌SR096产孢培养基及培养条件的优化

试验旨在为了降低枯草芽孢杆菌SR096的工业生产成本和提高发酵液的芽孢含量,采用单因素试验和响应面法试验设计对菌株SR096的培养条件和发酵培养基组分优化,优化后的培养基组分为:葡萄糖7.5 g/L、玉米粉15.7 g/L、黄豆粉45.0 g/L、柠檬酸钠4.5 g/L、碳酸钙2.0 g/L、硫酸镁1.0 g/L,经验证在5 L发酵罐中以接种量3%、37℃、250 r/min条件下培养30 h,枯草芽孢杆菌SR096发酵液的活菌含量为1.67×10^10 CFU/mL,芽孢含量为1.56×10^10 CFU/mL,芽孢率为93.3%,为枯草芽孢杆菌SR096后期的产业化放大和推广应用奠定基础。     

2018年天津市原料奶细菌总数、体细胞数及奶牛乳房炎病原菌、耐药基因调研报告

本研究旨在调查天津市原料奶细菌总数、体细胞数及乳房炎病原菌、耐药基因,了解全市原料奶的质量状况及引起奶牛乳房炎发生的主要原因。采集天津市5家乳品加工企业奶罐车的原料奶样品,用于检测体细胞数和菌落总数;采集天津市奶牛养殖场储奶罐奶样品,用于检测体细胞数;采集奶牛场临床型乳房炎发病乳区的牛奶样品,用于检测乳房炎病原菌及耐药基因。结果显示:2018年天津市乳品加工企业原料奶体细胞数平均值为44.65万/mL,标准差42.41万/mL,变异系数94.97%,最大值为225.50万/mL,最小值为1.20万/mL,SCC≤50万/mL的样品占74.37%,50万/mL200万/mL的样品占3.13%;细菌总数平均值11.54万CFU/mL,标准差26.28万CFU/mL,变异系数227.66%,最大值190.00万CFU/mL,最小值0.095万CFU/mL,细菌总数≤10万CFU/mL的样品占74.37%,10万CFU<细菌总数≤50万CFU/mL的样品占21.25%,50万CFU<细菌总数≤100万CFU/mL的样品占1.88%,100万CFU/mL<细菌总数≤200万CFU/mL的样品占2.50%。2018年天津市奶牛养殖场原料奶体细胞数平均值为38.81万/mL,标准差36.49万/mL,变异系数94.03%,最大值为210.00万/mL,最小值为0.80万/mL,SCC≤50万/mL的样品占79.17%,50万/mL200万/mL的样品占0.83%。乳房炎病原菌检测结果显示:36个样品检出病原菌,总检出率为94.74%;共检出8种病原菌,检出率最高的是乳房链球菌,检出率为73.68%,其他病原体检出率依次为:牛支原体34.21%,牛棒状杆菌13.16%,无乳链球菌10.53%,大肠杆菌5.26%,白色念球菌5.26%,停乳链球菌2.63%,铜绿假单胞菌2.63%。14个样品检出耐药基因,总检出率为36.84%;2种耐药基因的检出率分别为β-内酰胺耐药基因CTX-M934.21%,耐甲氧西林葡萄球菌耐药基因MecA 2.63%。研究表明,2018年天津市原料奶SCC及细菌总数大部分接近欧盟标准,但仍有待进一步提高;引起天津地区临床型乳房炎的3种主要致病菌为乳房链球菌、牛支原体和牛棒状杆菌。     

副干酪乳杆菌LC-01对便秘小鼠的通便作用

副干酪乳杆菌LC-01是一株具有较强抗氧化活性和免疫活性的益生菌菌株,为评价该菌株的润肠通便作用,实验通过将Balb/c雄性小鼠随机分为空白组、模型组、LCS对照组和3个副干酪乳杆菌LC-01给药组.空白组和模型组经口灌胃0.1mL/(kg·d)(以体质量计)质量分数10％的脱脂乳.选取代田乳酸菌LCS及干酪乳杆菌菌株LC-14作为对照菌株.代田乳酸菌LCS对照组灌胃1×108CFU/mL的菌悬液0.1mL/(kg·d),LC-14对照组和LC-01给药组分别相应给予低、中、高剂量(1×106、1×108、1×1010CFU/mL)的活菌液0.1mL/(kg·d).使用复方地芬诺酯建立小鼠便秘模型,副干酪乳杆菌LC-01给药7d后,便秘小鼠首次排便时间缩短,排便粒数和质量明显增加,粪便水分含量提高:连续15d灌胃副干酪乳杆菌LC-01,便秘小鼠小肠墨汁推进率也得到显著增加.结果表明,副干酪乳杆菌LC-01具有良好的润肠通便功能.     

乳酸菌产酸特性研究

对比研究了嗜热性乳酸菌、乳球菌的产酸特性以及影响后酸化的因素。结果显示,乳球菌最大产酸量为64.4^0T～72.7^0T;嗜热性乳酸菌的最大产酸量为106.8^0T～294.2^0T。德氏乳杆菌保加利亚亚种、唾液链球菌嗜热亚种的最大产酸速率为20.75^0T/h、24.57^0T/h。乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳油亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种丁二酮变种的最大产酸速率分别为7.65^0T/h、6.52^0T/h、9.65^0T/h。优良的菌株特性、低温贮存、较低的最终发酵酸度是保证乳酸菌低后酸化的有效措施。     

Microbiota analysis of Caspian Sea yogurt, a ropy fermented milk circulated in Japan

We analyzed the microbiota of domestic ropy fermented milk, Caspian Sea yogurt (or 'kasupikai yohguruto' in Japanese), circulated in Japan. We collected six varieties from five localities. Lactococcus ( L) lactis ssp. cremoris was isolated from all samples as the dominant strain at levels of 10⁸−10⁹ CFU/g. We show this strain produces an extracellular polysaccharide (EPS) that causes the unique characteristic viscosity of the product. From analysis of the RAPD pattern of 60 bacterial isolates from the six samples, we found that 59 strains from a total of 60 isolates were identical and produced this viscosity. Furthermore, PFGE analysis of representative strains from each sample indicated that the isolates could be classified into four subgroups. This suggests these L. lactis ssp. cremoris strains found in Caspian Sea yogurt may have been slightly mutated during subculture in Japan. In addition, Lactobacillus (L.) sakei ssp. sakei were isolated from three samples; L. plantarum , Gluconoacetobacter sacchari and Acetobacter aceti were isolated from two samples; and L. paracasei , L. kefiri , Leuconostoc ( Leu. ) mesenteroides were isolated from one sample.