甘草内生真菌分离及其抑菌活性初探

为了解药用植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis var.tritici）、枸杞黑果病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium f.sp.cucumeris）、黄瓜立枯病菌（Rhizoctonia solani）5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）4种细菌作为供试指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。试验结果显示,从甘草根、茎、叶中分离出20株内生真菌,其中根部最多,占分离菌株总数的65.0%,其次为茎部,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2目2科5属,梭孢霉属为优势菌属,占分离菌株总数的70.0%;在分离的内生真菌中有15株菌对1种或1种以上供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的75.0%,19株菌对1种或1种以上供试细菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的95.0%;有7株内生真菌对枯草芽孢杆菌拮抗活性差异显著（P＜0.05）,有 8株内生真菌对金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,有3株内生真菌对大肠杆菌拮抗活性差异显著,有1株内生真菌对革兰氏阴性铜绿假单胞菌拮抗活性差异显著,其中菌株RLEFR015对番茄灰霉病菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR010对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR002对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌供试细菌拮抗活性差异显著;菌株RLEFR015、RLEFR002、RLEFR010均为梭孢霉属,为高活性菌株。甘草内生真菌具有多样性和抑菌活性,多数菌株对供试病原真菌和病原细菌具有拮抗活性,对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和革兰氏阳性枯草芽孢杆菌拮抗活性较强,预示着甘草内生真菌具有重要的资源价值。     

几种鸡源肠道菌对沙门氏菌的体外生物拮抗试验

用从健康鸡消化道分离的鸡源乳酸杆菌４株,双歧杆菌２株,对引起雏鸡腹泻的鸡白痢沙门氏菌和鸡副伤寒沙门氏菌进行体外生物拮抗试验。试验结果显示：３株乳酸杆菌、２株双歧杆菌、１株芽孢杆菌对致病性沙门氏菌均有明显的生物拮抗作用（Ｐ＜０．０１）,而１株乳酸杆菌和１株芽孢杆菌拮抗作用不明显。     

SA38蜡样芽孢杆菌在体外对几种致病菌的生物拮抗试验

ＳＡ_（３８）蜡样芽孢杆菌在体外对几种致病菌的生物拮抗试验程安春，何明清，陈孝跃（四川农业大学动物科技学院，雅安６２５０１４）ＳＡ_（３８）菌系由健康动物体内分离到的一种蜡样芽孢杆菌，用该菌制成的生态制剂（调痢生），对多种动物无毒无害而有益，且对多种动...     

香蕉枯萎病拮抗内生细菌的筛选及鉴定

对健康香蕉植株体内的内生细菌进行了分离纯化，得到63株内生细菌菌株。采用平板对峙法筛选出2株对香蕉枯萎病具有强烈拮抗作用的菌株。这两株菌均能够显著抑制FOC菌丝生长, 抑菌率均在55%左右。通过生理生化、形态特征及16S rDNA序列同源性比较，鉴定均为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

芽孢杆菌ZS-1制剂对雏鸡抗病性和产蛋后期蛋鸡生产性能的影响

ZS-1(Bacillus subtilis Var.globigil)是本实验室从土壤中分离得到的一株芽孢杆菌,这株芽孢杆菌对实验病原细菌有极强的杀伤作用,动物急性毒理试验表明对动物无毒无害,经过生物发酵制成微生态制剂对雏鸡白痢有明显的预防和治疗效果,可以有效地改善产蛋后期蛋鸡的生产性能,提高产蛋率、产蛋量和平均蛋重,降低料蛋比,提升经济效益。     

蜡样芽孢杆菌生物学特性和安全性的研究——加速启动对动物有益的菌群

目前有学者认为：芽孢杆菌作为非特异性免疫因子,通过细菌本身或细胞壁成分刺激机体免疫细胞,使其激活,产生促分裂因子,促进细胞活力或作为佐剂发挥作用;此外,还可发挥特异性免疫功能,促进B细胞产生抗体的能力。笔者认为,动物口服饲用芽孢杆菌后,调整肠道菌群,使肠道微生态系统处于最佳的平衡状态,同时各正常菌群包括口服的芽孢杆菌在肠道具有抗原识别部位的淋巴组织集合上发挥免疫佐剂作用,活化肠粘膜内的相关淋巴组织,使Sign抗体分泌增强,提高免疫识别力,并诱导T、B淋巴细胞和巨噬细胞产生细胞因子,通过淋巴细胞再循环而活化全身免疫系统,从而增强机体的非特异性和特异性免疫功能。对仔猪最好从繁殖母猪开始使用,这样对仔猪的作用效果更突出。程安春等研究证实,饲用芽孢杆菌在体外能拮抗多种动物致病菌。不少学者对芽孢杆菌拮抗病原细菌和维持调节微生态平衡的作用机理,进行了研究和探讨。一方面认为芽孢杆菌参与消化道益生菌群与有害菌群之间有对生存和繁殖空间、定殖部位以及营养的竞争,限制有害菌的生存和繁殖;另一方面认为芽孢杆菌能产生抗菌素等物质,能够抑制病原菌。Goodiow等、Murray等、Ducluzean研究分别发现蜡样芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌能产生细菌素并可以拮抗致病菌。     

几种重要水果采后病害拮抗细菌的筛选与初步鉴定

从山东、安徽、湖北等7地采集土样40份，分离得到903株非病原性细菌，通过平板对峙培养，筛选出对草莓灰霉（Botrytis cinerea）、柑橘绿霉（Penicilliium digitatum）等五种水果常见采后病害菌株均有明显抑菌活性的40个菌株。室内果蔬贮藏保鲜试验表明， TL-2、TL-6、TL-8菌株的菌含量达到1x107cfu/ml时，均表现出较好的贮藏保鲜效果。经形态和生理生化鉴定，表现最好的两株拮抗菌TL-2和TL-6菌株的分类地位为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtitles)。     

青海省海晏县线叶嵩草内生细菌的生物功能鉴定及测定

对线叶嵩草（Kobresia capillifolia）内生细菌部分生物功能进行鉴定及测定;采用组织分离法从青藏高原青海省海西线叶嵩草根部分离出10株内生细菌。结果表明,10株内生细菌均能固氮,2G1和2G10能够产IAA;其中2G2、2G3、2G4、2G5、2G6、2G7、2G8和2G9对指示菌均有拮抗作用,对马铃薯炭疽菌Colletotrlchum coccodes的拮抗作用最强,抑菌率达88.58%。通过培养性状和形态特征,结合16S rDNA序列相似性分析,将2G1和2G10分别鉴定为苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis和Bacillus simpix,2G2和2G9鉴定为亲甲基醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus,2G3和2G6鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens,2G4和2G5鉴定为云南苏铁芽孢杆菌Bacillus siamensis,2G7和2G8鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。该研究结果为青藏高原极端生境牧草根部内生细菌的多样性及功能菌株的开发提供依据。     

枯草芽孢杆菌对三种水产动物病原菌体外拮抗作用的研究

为探明枯草芽孢杆菌BHI344菌株对水产养殖动物病害的生物防治功能,本文采用枯草芽孢杆菌与病原菌共同培养的方法,就枯草芽孢杆菌对三种水产动物病原菌(嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌)的体外拮抗作用进行了研究。结果表明:枯草芽孢杆菌BHI344菌株对三种水产动物病原菌都存在明显的拮抗作用,并随着枯草芽孢杆菌初始接种浓度的升高,以及培养时间的增长,拮抗作用越明显。     

一株桑树内生拮抗菌的分离鉴定

从经过严格表面消毒的桑树根、茎、叶中分离获得内生细菌76株。以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为指示菌进行拮抗菌的筛选,其中5个分离株具有抑菌活性,复筛选出抑菌活性及热稳定性最强的G21菌株。进一步研究表明G21菌株对家蚕病原真菌球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、绿僵菌(Metarhizium)均具有较强的拮抗作用。该菌株的形态及部分生理生化特征为:革兰阳性,杆状,产芽孢,接触酶阳性,好氧。16S rDNA序列分析表明该菌株与芽孢杆菌(Bacillus)的同源性达到99.8%。综合以上鉴定结果确定G21菌株为芽孢杆菌。     

动物微生态制剂菌种的毒性试验

本次试验对18株细菌进行了毒性试验,其中鸡肠源细菌8株,分别为蜡状芽孢杆菌、2株枯草芽孢杆菌、短乳杆菌、戊糖乳杆菌、2株植物乳球菌和棉籽糖乳球菌;猪肠源细菌10株,分别为蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、玉米乳杆菌、乳酸乳球菌乳酸亚种、植物乳球菌、棉籽糖乳球菌、棉籽糖肠球菌和粪肠球菌。通过用这些细菌对小白鼠进行为期30d的正常量和加倍量的饲喂,实验组小白鼠均未出现中毒现象,试验结束时,通过对小白鼠的解剖,实验组小白鼠的肝脏和肾脏与对照组小白鼠一样,未出现任何异常变化。结果表明：本次试验所选用的18株细菌均较安全,可作为动物微生态制剂的菌种应用。     

火龙果茎腐病拮抗细菌的筛选和鉴定

摘要：寻找1-2株对火龙果茎腐病具有拮抗作用的细菌菌株。通过对黑龙江、江苏、浙江、海南等地的土壤中的细菌进行分离纯化,得到细菌菌株206株。采用平板对峙法筛选出对火龙果茎腐病菌具有强烈拮抗作用的菌株1株,PCY－67。菌株能够显著抑制火龙果茎腐病菌菌丝生长,抑菌圈直径分别可达30mm。通过形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列同源性比较,鉴定该菌株均为类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa Ash, Priest & Collin）。     

圆孢芽孢杆菌A95的分离与鉴定

从茶树根际土壤中分离获得一株对多种家蚕病原真菌具有强烈拮抗作用的细菌。经培养特征观察以及生理生化指标测定、16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定该菌株为圆孢芽孢杆菌,定名为Bacillus globisporusA95。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank注册(登记号:AY387584)。     

猪肠道芽孢杆菌的分离鉴定、小鼠毒性以及体外颉颃试验

为了获得动物微生态的菌种并进一步研制猪用益生制剂,试验采用细菌分离法从猪肠道分离出50株菌,通过培养特性、形态观察、生化试验初步鉴定出10株芽孢杆菌;用这10株芽孢杆菌对小白鼠进行为期20 d的正常量和加倍量的饲喂;采用平板纸片扩散方法,用这10株芽孢杆菌对3株肠道病原菌(致病性大肠杆菌、沙门杆菌、金黄色葡萄球菌)进行了体外颉颃试验。结果表明:试验组小白鼠均未出现中毒现象,所选用的10株芽孢杆菌均较安全,可作为动物微生态制剂的菌种应用;10株芽孢杆菌中有6株对3株肠道病原菌有不同程度的生物颉颃作用。     

芽孢杆菌BH21防治葡萄灰霉病

正据《中国农业科学》2018年第5期《甲基营养型芽孢杆菌BH21对葡萄灰霉病菌的拮抗作用》(作者魏新燕等)报道,甲基营养型芽孢杆菌BH21是一株对葡萄灰霉病菌有较好拮抗作用的海洋源细菌,鉴定该菌株脂肽类抗菌物质合成基因,检测脂肽粗提物对葡萄灰霉病菌的拮     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及其益生潜质分析

 从健康肉鸡的粪便中分离出一株BF3芽孢杆菌,经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16SrDNA序列分析相似度为99%,确定该菌株为枯草芽孢杆菌,对该株芽孢杆菌对肠道致病菌的拮抗作用进行研究。结果表明BF3菌株在培养过程中,可以抑制鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌的生长。拮抗作用的强弱与芽孢杆菌和致病菌的接种时间有关。先接种芽孢杆菌后接种致病菌,拮抗作用最强;芽孢杆菌和致病菌同时接种次之;先接种致病菌后接种芽孢杆菌,拮抗作用最弱。并且BF3菌株代谢产物对鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌具有非常明显的拮抗作用。     

东祁连山高寒草地几株醉马草内生细菌的生物功能评价及鉴定

采用表面消毒划线法从醉马草分离获得6株内生细菌,分别命名为261MG1、261MG2、261MG3、261MG4、261MY5和261MY6,并对其进行了生物功能测定和鉴定。结果表明,有5株内生细菌对马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌有较好拮抗作用,有4株对马铃薯枯萎病菌有较好拮抗作用,且261MG2、261MG3、261MG4和261MY6对3种病原菌均有较好拮抗作用;除261MG4外均有固氮和产吲哚乙酸能力;通过培养性状和形态特征,结合16S rDNA序列相似性分析,将261MG1、261MG2、261MG3、261MY6、261MG4和261MY5分别鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、Bacillus axarquiensis、莫海威芽孢杆菌Bacillus mojavensis、解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens、耐盐短杆菌Brevibacterium halotolerans和棒形杆菌Clavibacter sp.。该研究结果为醉马草内生细菌进一步开发利用提供了依据。     

一株桑树内生拮抗细菌的分离鉴定及生物学特性研究

从健康桑树叶片中分离到一株内生拮抗细菌L144,该菌株对多种植物病原真菌及病原细菌均有较强的抑制作用。通过形态学观察、生理生化指标测定、16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌,定名为Bacillus subtilisL144。该菌株已在GenBank注册,登录号为EU118756。对菌株部分生物学特性研究表明,其生长的最适pH值为6.5,最适生长温度为33℃,能广泛利用碳源,氮源。     

枯草芽孢杆菌MA139类细菌素抑菌活性的研究

为测定枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素的抑菌活性。本试验采用管碟法对枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素对多株革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的抑菌活性进行测定。结果表明:类细菌素不但对芽孢杆菌属的其他菌种有抗菌活性,对病原菌和霉菌也有拮抗作用;不同指示菌对类细菌素的敏感性不一样,其中金黄色葡萄球菌对其最敏感。该类细菌素具有广谱抗菌作用,有作为畜禽饲料添加剂的潜力。     

奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌的PCR-16S rDNA鉴定及日粮的影响

设计9个精料梯度的日粮饲喂干乳期成年荷斯坦奶牛,并对其瘤胃液中的部分细菌进行了分离,PCR-16S rDNA鉴定和动态检测。结果显示,以瘤胃液为原料,采用人工培养基共分离到56株细菌,并对7株具代表性的细菌进行了PCR扩增,经序列同源性比较,最终把细菌鉴定为牛链球菌（A0625、A1212、0131）、蜡样芽孢杆菌（0113）、地衣芽孢杆菌（0091）、短小芽孢杆菌（0083）和嗜热链球菌（0123）。同时还发现随精料浓度的增加,牛链球菌、芽孢杆菌及嗜热链球菌的数量均呈不同程度的上升趋势。结果表明不同精料浓度的日粮对奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌有着不同程度的影响,其中对牛链球菌影响最大,从系统发育分析可知所分离细菌虽未形成新的细菌进化枝,但牛链球菌和嗜热链球菌的核苷酸序列仍发生了多处碱基突变。