蓝狐源约氏乳杆菌菌株ZJBF004分离鉴定与体外益生潜能的评价

为获得犬科动物源乳酸菌并对其益生潜能进行评价,本研究通过测定生长曲线、产酸能力、对低pH和高胆盐环境的耐受性、在体外模拟胃肠道溶液中的存活能力、抑菌能力、抗生素抗性、对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力及抗氧化性评价了菌株ZJBF004的益生特性。结果表明:利用固体乳酸细菌培养基从蓝狐的肠道内容物中分离到1株优势乳酸菌,将其命名为菌株ZJBF004,经菌落菌体形态、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析鉴定其为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)。菌株ZJBF004产酸能力较强且在37℃培养时能迅速进入对数生长期;在pH=5的培养基中耐受6 h时仍能保持较好的生长情况,在胆盐浓度为3 g/L的条件下至少可耐受6 h,且存活率高于70%,在人工模拟胃液和肠液中耐受3 h时存活率高于90%;对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果;对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力为(18.67±3.12)个/细胞;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为28.50%,表明菌株ZJBF004具有一定的抗氧化活性。由此可见,新分离的蓝狐源约氏乳杆菌菌株ZJBF004具有优良的体外益生性能,可作为潜在犬科动物用益生菌进一步研究。     

羊乳活性发酵饮品中益生元增菌特性及发酵工艺优化

以羊乳为基料,研究低聚果糖、低聚半乳糖、菊粉、低聚异麦芽糖四种益生元及复合益生元对发酵羊乳活菌数的影响;以发酵时间、益生元添加量及接种量为因素进行正交试验,以活菌数和滴定酸度为综合指标,利用综合评分法优化活性羊乳饮品发酵因子,确定最优发酵条件。结果表明：菊粉和低聚果糖增菌效果较佳,且二者复合比例为9:1时,增菌效果最显著（P<0.05）;最优发酵工艺条件为：发酵时间40 h,益生元添加量1.50%,接种量4%,此条件下,益生菌发酵羊乳中活菌数最高。     

猪源乳酸菌的筛选、体外益生效果评价及对小鼠肠道菌群的影响

试验旨在筛选具有体外益生活性的乳酸菌株,并探讨其对小鼠肠道菌群的影响。试验从健康仔猪粪便中分离得到6株具有溶钙能力和对肠道致病菌有较强抑制性能的细菌,分别命名为R1~R6。经体外益生效果评价表明,在p H为3和4的条件下,菌株R1的菌数均显著高于其他菌株(P0.05),并可耐受浓度为0.3%的胆盐条件。细胞黏附试验表明,菌株R1的黏附率显著高于其他5株乳酸菌株(P0.05);乳酸菌R1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和藤黄微球菌这4种指示菌的抑菌能力均要优于其余的5株细菌。菌株R1经16S r RNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。经小鼠体内评价研究表明,通过灌喂小鼠乳酸菌R1可提高小鼠肠道内乳酸杆菌的数量(P0.05),同时显著降低其肠道内肠杆菌数量(P0.05)。结果表明,所筛选的乳酸菌R1具有益生菌特性,具有较好的开发应用前景。     

蛋鸡肠道嗜酸乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

为筛选具有益生特性的嗜酸乳杆菌,采用常规方法从山东省潍坊市及周边地区蛋鸡肠道内容物样本中分离乳酸菌。通过测定发酵液p H值,筛选产酸性能较好的菌株;采用PCR及测序技术对筛选到的菌株进行分子生物学鉴定;采用常规方法评价筛选到的菌株的益生特性。在分离到的9株乳酸菌中,筛选到1株产酸性能较好的菌株(命名为XMR-3),分子生物学鉴定结果显示,该菌株为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)。该菌株在培养6 h之后进入对数生长期,至16 h时,活菌数最高,此时培养液p H值为3.92;在p H值为3.0和4.0的酸性环境中培养4 h后,存活率均在99%以上;在0.3%的胆盐环境中,存活率为87.3%;对4种常见致病菌的抑菌圈直径均在20 mm以上。筛选到的菌株表现出一定的益生特性,在畜禽微生态制剂产品开发方面具有应用潜力。     

不同抗生素对乳酸菌抑制作用的研究

为了进一步探索抗生素与益生菌的关系,并为畜产品的安全生产服务,本研究采用不同浓度的硫酸粘杆菌素和金霉素作用于乳酸菌,通过测定培养液的pH、吸光度值及活菌数目来判断抗生素抑制作用的强弱。结果表明,在厌氧培养24 h后,0.025%的金霉素和0.05%的硫酸粘杆菌素可抑制乳酸菌的生长(P<0.05),随着培养时间的延长,两种抗生素对乳酸菌的抑制作用均逐渐减弱,说明益生菌的耐药性在逐步增强。     

四种低聚糖对乳酸菌体外增殖过程的影响研究

研究旨在探讨不同低聚糖对乳酸菌体外增殖过程的影响。以不同低聚糖代替葡萄糖作为MRS培养基中的碳源,进行植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌的体外培养,测定4种乳酸菌不同培养时间的OD_(600nm)、pH值、还原糖含量及24 h培养液中的有机酸生成量。结果表明:4种低聚糖对植物乳杆菌的增殖效果无显著差异,低聚果糖对干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌的增殖效果最好;低聚麦芽糖对保加利亚乳杆菌的增殖效果最好。因此,为充分发挥益生菌的功能应选择合适种类的低聚糖作为益生元添加到饲料中。     

酸驼乳中益生乳酸菌的分离筛选

旨在评价酸驼乳中乳酸菌的益生特性。采用常规方法从内蒙古阿拉善牧区采集的酸驼乳中分离乳酸菌;利用16S r DNA PCR及序列分析法对分离到的乳酸菌进行种水平鉴定;通过体外抑菌试验和耐酸、耐胆盐试验评价乳酸菌的益生特性。结果表明,从酸驼乳中分离到的1株疑似乳酸菌被鉴定为短乳杆菌,将其命名为Lactobacillus breris LT;该菌株的代谢产物对4种常见肠道性致病菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌)均表现出良好的抑菌特性,且抑菌特性不受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响;该菌株能够在低p H值(2.0、3.0)和高胆盐含量(0.1%~0.3%)的MRS培养基上生长。该研究结果为酸驼乳中优质乳酸菌资源的开发利用提供了科学依据。     

健康奶牛阴道乳酸菌分离鉴定及作为候选益生菌株的体外评价

为分离健康奶牛阴道乳酸菌并鉴定其益生特性,本研究采集健康奶牛阴道临床样品并分离筛选到4株乳酸菌,对其抑菌活性、产酸性能、产H_2O_2能力及对抗生素敏感性进行检测,通过16S rDNA序列分析鉴定乳酸菌分离株。结果显示,4株乳酸菌具有较好的抑菌活性和产酸性能,在体外均能够产生H_2O_2,并对万古霉素具有抗性;经鉴定4株乳酸菌分别为唾液乳杆菌1株、黏膜乳杆菌2株、坚强肠球菌1株。本研究分离鉴定的4株乳酸菌均可以作为候选益生菌株用于奶牛子宫内膜炎防治。     

益生菌行业仍处于起步阶段

<正>近日,由广东省食品学会主办、合生元协办的健康有"益"——2014益生菌、益生元高峰论坛举行,知名乳业专家王丁棉表示,世卫组织对于益生菌的定义是:通过摄取适当的量,对食用者身体健康发挥有效作用的活菌。而益生元则是指在人体肠道内能刺激有益菌群生长,是专供益生菌"养料"的一种专享物质。主要以低聚糖为代表。目前,市面上以益生菌为卖点的饮料琳琅满目、品类繁多。记者了解到,其中酸奶仅占中国整个乳品市场份额的15%左右(乳酸菌奶饮品不到5%)。而国外发酵型乳酸菌奶饮品已空前发达,日本、欧洲发酵乳饮料在     

鸽源乳酸菌的分离鉴定及生物特性研究

试验从鸽子小肠分离到3株优势乳酸菌,经16S rRNA和理化鉴定,Z1和Z2同为唾液乳杆菌,F6为粪肠球菌。其中Z1和Z2在培养24 h时活菌数最高,抑菌效果最好,对部分抗生素不敏感,在pH值3左右生长较好,耐酸性强,安全无毒性,但耐胆盐能力一般。作为可食用菌种,唾液乳杆菌在肉鸽养殖中应用较少。     

猪源乳酸杆菌的安全性及抗逆性评价

对本实验室自行分离自猪肠道的3株乳酸杆菌进行安全性和抗逆性检测,采用体外法对分离自不同生理阶段猪(仔猪、生长肥育猪、母猪)肠黏膜和食糜的罗伊乳杆菌(Lactobacillus reuteri)L45、植物乳杆菌(L.plantarum)L47和约氏乳杆菌(L.johnsonii)L63进行生长特性、溶血性、有害代谢产物、抗生素敏感性试验以及模拟胃肠道消化试验。结果:3株乳酸杆菌无溶血现象,不产生有害代谢产物。植物乳杆菌L47在37℃培养24 h时活菌数达到8.07lg CFU/mL,OD600值达到0.80,乳酸产量达到135.21 mmol/L,为3株菌中最高;对试验所用抗生素敏感性最高,且其在模拟胃液中消化4 h存活率依然高达99.11%,显著高于罗伊乳杆菌L45和约氏乳杆菌L63(P<0.05)。研究表明:植物乳杆菌L47益生特性良好且不是溶血菌株,发酵过程中不产生有害代谢产物,耐药性较低,在肠道中存活率高,具有潜在饲用价值。     

多抗性保加利亚乳杆菌的诱变和筛选

通过紫外诱变和硫酸二乙酯诱变,筛选出抗生素抗性(头孢氨苄和氨苄西林)的保加利亚乳杆菌,同时模拟人体胃酸环境(pH1.5～4.5)和十二指肠高胆酸盐环境(0.1g/100mL～0.4g/100mL)对诱变后的保加利亚乳杆菌的抗性进行了研究。结果表明,保加利亚乳杆菌突变株可抗头孢氨苄和氨苄西林(均为2mg/mL),并且在pH2.5～4.5时具有较强的生存能力,培养4h活菌数仍达108cfu/mL以上,在pH1.5条件下仍有部分存活。在0.1g/100mL～0.3g/100mL胆酸盐条件下培养4h,活菌数仍达106cfu/mL以上,且能在0.4g/100mL胆汁盐中存活。     

饲用地衣芽孢杆菌抗逆性与益生性的体外评价

为了探讨地衣芽孢杆菌的抗逆性与益生性,研究通过5个试验评定地衣芽孢杆菌的耐高温、耐酸性、耐胆盐、抑菌性和黏附性,于85℃水浴分别处理地衣芽孢杆菌2.5 min、5 min、7.5 min模拟制粒条件;利用pH值分别为2,3,4的人工胃液模拟胃液环境;用0.3%的胆盐模拟肠液环境;抑菌试验测定地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制能力;以蛋鸡肠道上皮细胞为模型测定地衣芽孢杆菌的黏附能力。结果表明:85℃处理地衣芽孢杆菌2.5 min后活菌数最高,与对照组相比提高了2.25%(P>0.05);用pH值为2,3,4的胃液分别处理,与对照组相比活菌数分别提高0.77%(P>0.05)、1.54%(P>0.05)、1.34%(P>0.05);地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分别为0和16.16 mm;在黏附性试验中,每100个蛋鸡肠道黏膜上皮细胞上平均可以黏附27个地衣芽孢杆菌。说明制粒过程、人工胃液、人工肠液不影响地衣芽孢杆菌的活菌数,地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌有显著抑制作用,使金黄色葡萄球菌基本不能在蛋鸡消化道内定植。     

低淀粉饲粮条件下不同瘤胃降解淀粉水平对体外瘤胃发酵的影响

本试验旨在研究玉米作为淀粉来源的低淀粉饲粮条件下不同瘤胃降解淀粉(RDS)水平对体外瘤胃发酵的影响。以3头安装有永久性瘤胃瘘管的健康荷斯坦奶牛作为瘤胃液供体,各组分别以不同RDS水平饲粮作为发酵底物,体外产气法测定培养48 h时产气量和瘤胃发酵参数以及24 h时瘤胃微生物区系变化。结果表明:1)随着饲粮RDS水平的提高,体外培养48 h时产气量、潜在产气部分和产气速率呈线性升高(P0.05),快速发酵部分产气量呈线性下降(P0.05),干物质消失率呈线性升高(P0.05);2)随着饲粮RDS水平的提高,体外培养48 h时发酵液微生物蛋白、乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸浓度呈线性升高(P0.05),pH和氨态氮浓度没有显著变化(P0.05);3)随着饲粮RDS水平的提高,体外培养24 h时发酵液中白色瘤胃球菌和嗜淀粉瘤胃杆菌的相对数量呈线性升高(P0.05),黄色瘤胃球菌、琥珀酸丝状杆菌、溶纤维丁酸弧菌、牛链球菌和溶淀粉琥珀酸单胞菌的相对数量没有显著变化(P0.05)。综合考虑,低淀粉饲粮条件下提高RDS水平有利于瘤胃发酵。     

Oral administration of Lactobacillus plantarum and Bacillus subtilis on rumen fermentation and the bacterial community in calves

The objective of this study was to assess the effect of dietary probiotics on rumen fermentation and the bacterial community in dairy calves. Twelve Holstein calves were randomly allocated to three treatments: a basal diet, the basal diet supplemented with Lactobacillus plantarum GF103 (LB) or basal diet supplemented with a mixture of Lactobacillus plantarum GF103 and Bacillus subtilis B27 (LBS). A milk replacer was fed to calves from 8 days of age. A starter and alfalfa hay was offered ad libitum from 21 and 28 days of age, respectively, and the orts were weighted daily. The ruminal fluid was sampled at 56 and 83 days of age to determine the rumen fermentation characteristics. The bacterial community was analyzed by denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and the number of certain bacteria was quantified by real‐time polymerase chain reaction. The ratio of total dry matter intake to average body wieght was higher in the control (P < 0.05). The DGGE fingerprint of the 16S ribosomal RNA gene was affected by the blended probiotics at 83 days of age. The number of Ruminococcus albus was lower in the LB and LBS treatment (P < 0.05). Oral administration of the probiotics affected the rumen bacterial community and the numbers of cellulolytic bacteria decreased.     

Study on the Isolation，Identification and Probiotic Characteristics of a Bacillus coagulans

This experiment was conducted to isolate and identify a strain of Bacillus coagulans from the soil at the bottom of the pond, and study its probiotic properties. A strong acid producing bacillus was isolated from the soil at the bottom of the pond and identified as Bacillus coagulans through the physiological and biochemical characteristics and 16S rDNA sequence analysis. The strain had high tolerance to the simulated gastric juice (pH 2.5, 12 h of incubation, survival rate was 71.9%) and simulated intestinal fluid (bile salt concentration 0.3%, 12 h of incubation, survival rate was 84.4%) and had high antibacterial activity to E.coliK88, E.coliK99, S.agalactiaeand A. hydrophila. It could degrade nitrite effectively and the degradation rate was 96.80% in 48 h. Two hundred and seventy AA broilers aged 1 day were randomly allocated into 3 groups. Diets were added 0 (group Ⅰ), 1.0×10⁶ (group Ⅱ) and 1.0×10⁷ CFU/g (group Ⅲ) Bacillus coagulans NJ102, respectively. The experiment lasted for 42 d. The average daily gain and final body weight of group Ⅱ and Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅰ(P<0.05), and the feed weight ratio of the two groups were significantly lower than that of groupⅠ(P<0.05). There was no significant difference in average feed intake among three groups (P>0.05). It was found that the soil-derived Bacillus coagulans NJ102 from the bottom of the pond had a certain degree of resistance and potential probiotic ability, which could improve the growth performance of broilers and had the potential to be a microbial feed additive.     

植物乳杆菌对玉米秸秆和水稻秸秆体外发酵特性的影响

本试验旨在探讨植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对玉米秸秆和水稻秸秆奶牛瘤胃体外发酵特性的影响。采用单因子随机区组试验设计,分别以玉米秸秆和水稻秸秆为发酵底物,分析不同添加水平[0(对照)、0.25×107、0.50×107和0.75×107CFU/m L]植物乳杆菌对发酵底物体外发酵产气量(1、2、4、6、12、24、36、48 h)、产气参数、干物质降解率(DMD)、中性洗涤纤维降解率(NDFD)、发酵液挥发性脂肪酸(VFA)、氨态氮(NH3-N)浓度及p H的影响。结果表明:添加植物乳杆菌能显著提高玉米秸秆发酵初期产气速率和产气量(1~24 h)(P0.05),以添加0.75×107CFU/m L效果最为理想;添加植物乳杆菌能显著提高水稻秸秆体外发酵后期(36~48 h)产气量(P0.05),而以添加0.25×107CFU/m L效果最为理想。随着植物乳杆菌添加水平的增加,2种底物体外发酵液NH3-N浓度均呈现显著的线性增加效应(P0.05)。不同植物乳杆菌添加水平对2种底物体外发酵NDFD、DMD、发酵液VFA(乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸和戊酸)浓度以及p H均无显著影响(P0.05)。由试验结果推断,添加植物乳杆菌能促进玉米秸秆和水稻秸秆体外发酵及其氮代谢,同时对维持p H的稳定平衡具有积极作用,最佳添加水平分别为0.75×107和0.25×107CFU/m L。     

Survival and persistence of Lactobacillus plantarum 4.1 and Lactobacillus reuteri 3S7 in the gastrointestinal tract of pigs

Lactobacillus sp. are important inhabitants of the intestines of animals. They are also largely used as probiotics for both humans and animals. To exert beneficial effects, lactobacilli have to survive through the gastrointestinal transit. Based on bile-salt resistance, pH tolerance, antimicrobial activity and heat resistance, Lactobacillus plantarum 4.1 and Lactobacillus reuteri 3S7 were previously selected and used as probiotic additives in pelleted feeding trials. Both strains were fed to pigs (sows and piglets) at a cell number of ca. 10(10) viable cells per day. A polyphasic approach, comprising growth on selective media, Biolog System analysis, 16S rRNA gene sequencing and RAPD-PCR typing, was used to identify and differentiate L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 from other faecal Lactobacillus sp., L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 had the capacity to survive during the gastrointestinal transit and were found in the feaces at a cell number of 6-8 log cfu/g. Their persistence was shown after 6 days from the administration. Compared to untreated pigs, the administration of L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 significantly (P<0.05) decreased the population of Enterobacteriaceae. Besides, the beta-glucuronidase activity of all pigs decreased of ca. 23.0% during administration. The findings of this study showed that L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 have the potential to be used as probiotic additives in pelleted feed for pigs.     

体外法研究不同硒源及硒水平对瘤胃挥发性脂肪酸的影响

试验旨在利用体外厌氧发酵培养技术研究不同硒源及不同硒水平的添加对奶牛瘤胃挥发性脂肪酸(VFA)含量的影响。试验按照3×4完全随机试验设计,第一因素为硒源,即亚硒酸钠、硒代蛋氨酸和酵母硒3种,第二因素为硒添加量,即每毫升培养液中设0μg、0.1μg、0.2μg和0.3μg共4个添加水平,其中0μg/mL添加水平为对照组,共计10个处理组,每个处理组均进行3h、6h、9h、12h、24h和48h的体外批次培养,每个处理组设3个重复。试验结果表明,体外培养液中添加3种不同来源的硒对乙酸、丁酸、TVFA的影响组间差异显著(P<0.05),对丙酸、乙酸丙酸比影响较小(P>0.05),其中以添加酵母硒的乙酸、丙酸、丁酸、TVFA的效果最好,添加硒代蛋氨酸次之;体外培养液中添加0.3μg/mL硒,可显著提高乙酸、丁酸、TVFA的含量(P<0.05),对丙酸及乙酸丙酸比影响组间差异不显著,但均以0.3μg/mL硒组的效果较好。     

复合益生菌和纤维素酶发酵对艾草营养品质和微观结构的影响

本试验旨在研究复合益生菌和纤维素酶发酵对艾草化学成分、活性成分、发酵品质以及微观结构的影响,并研究其适宜发酵时间。以全株艾草粉(70%)和混合饲料(30%,由80%的玉米、10%的麸皮和10%的葡萄糖组成)为发酵底物,按照不同处理方式分为4个组,其中对照组不添加其他物质,复合益生菌组添加1%复合益生菌(含干酪乳杆菌1.0×10^6 CFU/mL、产朊假丝酵母菌1.0×10^8 CFU/mL和枯草芽孢杆菌1.0×10^6 CFU/mL),纤维素酶组添加1%纤维素酶(滤纸酶活力为130 FPU/g),菌酶联合组同时添加1%复合益生菌和1%纤维素酶,每个组设3个重复。将发酵底物混合均匀后,按照固体∶蒸馏水=5∶3(质量比)的比例添加蒸馏水,高压灭菌后进行发酵,发酵时长为7 d。结果表明:1)与对照组相比,单独添加复合益生菌除显著降低了艾草中半纤维素的含量(P<0.05)外,对其他各项纤维成分的含量无显著影响(P>0.05);单独添加复合益生菌、纤维素酶以及二者联合添加显著降低了艾草中中性洗涤纤维和半纤维素的含量(P<0.05);单独添加纤维素酶以及与复合益生菌联合添加均显著提高了艾草中粗蛋白质的含量(P<0.05),且菌酶联合组粗蛋白质含量显著高于其他各组(P<0.05)。2)与对照组相比,纤维素酶组与菌酶联合组艾草的pH显著降低(P<0.05),可溶性碳水化合物含量显著升高(P<0.05);菌酶联合组艾草中总黄酮和多酚含量显著升高(P<0.05)。3)纤维素酶组和菌酶联合组艾草表面微观结构显示凹凸不平,出现了大面积的破碎。4)菌酶联合组发酵第4天时,艾草中枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌数以及总黄酮和多酚含量均处在较高水平,其中产朊假丝酵母活菌数和总黄酮含量显著高于其他发酵时间(P<0.05)。由此得出,复合益生菌与纤维素酶联合添加显著降低艾草的pH,显著提高了可溶性碳水化合物、总黄酮和多酚的含量,改善了艾草的微观结构。复合益生菌和纤维素酶联合添加时艾草的适宜发酵时间为4 d。