内蒙古地区乳样中牛支原体的分离及PCR鉴定

为检测内蒙古地区某牛场患乳房炎的奶牛乳样中是否存在牛支原体,同时建立直接提取乳样中牛支原体DNA进行PCR检测的方法,本研究无菌采集乳房炎乳样,通过支原体的分离培养、形态学观察和生化试验,初步鉴定分离株为牛支原体,然后提取液体培养基菌体DNA进行牛支原体特异性PCR鉴定,同时,采用Chelex-100法直接提取原乳样中菌体DNA进行PCR鉴定,并测序分析扩增片段序列。液体培养物提取DNA与Chlex-100法直接提取原乳样菌体DNA进行特异性PCR均扩增出目的条带,该片段序列与GenBank中牛支原体oppD/oppF基因的同源性达到99.8%,证实分离株为牛支原体。说明Chlex-100法可直接提取乳样中牛支原体DNA进行快速PCR鉴定。     

MALDI-TOF MS对河南地区鸡源沙门菌快速鉴定的研究

采集河南地区规模化种鸡场疑似沙门菌致死鸡胚和肝脏,共分离出41株沙门菌菌株;应用血清学、VITEK 2和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法对分离的41株沙门菌进行鉴定比较;3种方法均能鉴定出沙门菌,MALDI-TOF-MS方法能快速鉴定41株沙门菌,而且匹配度分值均大于2.300,表明鉴定结果的可信度很高。血清学鉴定的41株沙门菌血清型与MALDI-TOF-MS鉴定的沙门菌结果不一致,表明血清学分型结果和MALDI-TOF-MS分型结果没有相关性。MALDI-TOF-MS对鸡沙门菌的鉴定,操作快速简便、准确率高,为兽医微生物快速鉴定提供一种方法。     

MALDI-TOF MS法快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的研究

本研究考察了培养基、培养时间对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的影响。结果表明:在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基和肠球菌显色营养琼脂培养基上培养对粪肠球菌、屎肠球菌的鉴定没有显著区别;在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基上培养对大肠杆菌的鉴定没有显著区别,而麦康凯培养基则不适合大肠杆菌的快速鉴定。大于24h的培养时间对大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌3种细菌快速鉴定均有不同程度的影响,其中对大肠杆菌的影响最为显著,而对粪肠球菌的影响最小。重复性实验中,大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的鉴定分值均在90%以上,批间、批内变异系数均小于5%,说明本实验方法稳定性和重复性良好。与传统的生化鉴定方法比较,MALDITOF MS法操作简单快速、准确,可有效提升动物源细菌分离鉴定的工作效率。     

锡林浩特某牧场奶牛乳房炎致病菌分离鉴定

<正>本试验主要以锡林浩特某牧场为试验对象,采集50份患有临床型乳房炎奶牛的奶样和50份患有隐性乳房炎奶牛的奶样,进行致病菌的分离、鉴定,生化鉴定和药敏试验。本试验为指导临床合理用药和提高奶牛乳房炎防治效果提供了相关的理论依据,也为系统开展奶牛乳房炎致病菌的分子流行病学调查、血清学分型和耐药性研究奠定了一定的基础。1实验材料1.1培养基普通的琼脂培养基,SS琼脂培养基,西檬氏枸橼酸盐培养     

中药黄芪内生菌的分离鉴定及方法分析

为探索中药内生菌在动物免疫中作用机理和避免抗生素的耐药性提供新的途径,本研究分析了黄芪内生菌的种类,对其进行分离鉴定和活性筛选。以黄芪健康植株上的块根为材料,经过组织筛选、表面消毒、对照处理、培养基选择、分离菌的培养,形态学和革兰染色鉴定等研究方法,获得真菌17株,分列7个菌属中;细菌34株,革兰阳性菌19株、革兰阴性菌15株,以单胞杆菌和芽孢杆菌属为主。牛肉膏蛋白胨固体培养基上生长情况最好,为28株。LB固体培养基上次之,为20株。高氏Ⅰ号培养基上得到3株。     

桑褐斑壳丰孢菌Phloeospora maculans的主要生物学特性研究

桑褐斑壳丰孢(Phloeospora maculans)是近几年鉴定的云南蚕区桑园发生桑褐斑病的主要病原菌之一。采用菌丝生长速率法研究不同培养基及碳源和氮源、p H值、温度、光照条件对该病原菌菌丝生长与产孢量的影响。结果表明,桑褐斑壳丰孢的菌丝适宜在PDA培养基和PDA+1%桑叶碎片培养基(简称PDA桑叶培养基)上生长,其中PDA桑叶培养基是最佳的产孢培养基;菌丝生长最佳培养基中的碳源和氮源物质分别是麦芽糖、蛋白胨,以可溶性淀粉为碳源的培养基产孢量最大,而在所有有氮源和无氮源物质的培养基上均不产孢;菌丝生长的最适培养基p H值为6~9,而p H 6时产孢量最大;在22~28℃培养条件下,菌丝生长最快,产孢量最大;连续黑暗条件适合菌丝生长和产孢;菌丝的致死温度条件为50℃水浴处理10 min。上述研究结果提示桑褐斑壳丰孢有很强的营养利用和环境适应能力。     

中华鳖温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的研究:疫苗用菌液培养条件的优化

以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)口服缓释微球疫苗生产菌株 Z- 1株培养菌液含菌量和胞外产物溶血性为指标 ,考察了培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等因素对 As Z- 1株繁殖和产毒的影响 ,并采用正交试验方法 ,对培养基配方进行了优化试验。结果表明 :不同的培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等均会影响As Z- 1株的菌体产量和溶血性 ,其中 2 8℃振荡 (2 0 0 r/ min)培养 36 h菌液的含菌量和溶血价均较高 ;在营养肉汤中添加适量的硫酸铜、磷酸二氢钾、硫酸锰和硫酸铵 ,可显著提高菌液的含菌量和溶血价。     

牛乳中金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的PCR检测应用研究

采集92份患隐性乳房炎牛的乳汁,分别用PCR法和常规法进行致病菌检测,常规细菌鉴定法检测出金黄色葡萄球菌感染样18份,无乳链球菌感染样30份;双重PCR检测出金黄色葡萄球菌感染样22份、无乳链球菌感染样27份。本试验从基因水平对致病性乳汁进行检测,具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强等特点。     

1株鸡毒支原体的分离鉴定及体外敏感中药的筛选

本研究旨在对山东泰安地区鸡毒支原体的流行菌株进行分离培养及鉴定和纯化,并针对该分离株筛选体外敏感的中药,为后续进一步研究提供材料。采用液体培养法与固体培养法从病鸡组织样品中分离、培养和纯化鸡毒支原体,并通过瑞士染色和姬姆萨染色、血清学方法及分子生物学方法对分离株进行初步鉴定,在此基础上,采用微量稀释法测定8种中药对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）,从而筛选到对分离菌株敏感的中药。结果显示,分离菌株在鸡毒支原体液体培养基中增殖后,培养基颜色由红变黄且呈半透明状态,在固体培养基中培养后呈典型的"煎蛋"样儿菌落,均符合鸡毒支原体培养特性;瑞士染色和姬姆萨染色结果显示,菌体形态符合鸡毒支原体的特征;血清学鉴定结果显示,分离株与鸡毒支原体阳性血清发生凝集;分子生物学鉴定结果显示,所扩增的核酸序列与鸡毒支原体匹配度高达99%;MIC测定结果显示,中药黄连和黄柏对分离的鸡毒支原体的抑菌活性较强,属敏感范畴,其MIC分别为≤0.98和0.39 mg/mL,而中药金荞麦和鱼腥草对鸡毒支原体中度敏感,MIC均≥125 mg/mL,板蓝根、白鲜皮、当归、艾叶对鸡毒支原体均不敏感。综上所述,本研究成功分离到1株鸡毒支原体,并且筛选出4种对该菌株敏感的中药,分别为黄连、黄柏、金荞麦和鱼腥草,为后期进一步研究防治鸡毒支原体病的中药组方时提供参考依据。     

溶磷红豆草根瘤菌的分离和筛选

为获得溶磷红豆草(Onobrychis viciae folia)根瘤菌(Rhizobium sp.),本研究以Winogradsky无氮培养基和PKO溶磷培养基从红豆草根瘤中分离菌株。按解磷-固氮-结瘤的顺序逐级筛选,结合培养观察和回接鉴定。最终获得3株溶磷根瘤菌RS-1,RS-8和RS-14。其中RS-1产生长素能力及回接根瘤固氮酶活性均较高,溶磷量6.98mg·L^-1·d^-1,适应pH4~12的环境并耐受11%的盐胁迫。表明该筛选方法简便有效,菌株应用前景好。     

2株H11N3亚型禽流感病毒厦门分离株的基因特征及遗传进化分析

从厦门地区健康鸭群和环境中分离到2株H11N3亚型禽流感病毒(简称SD61和XA33),对其进行全基因组序列测定、遗传演化分析和特殊位点的氨基酸分析。结果显示:2株分离株的HA裂解位点均符合低致病性禽流感病毒特征,NA颈部均无缺失碱基;内部基因中M1基因N30D、T215A突变,PB1基因发生S622G突变,NS1均存在PL基序,为ESEV,SD61株中NS1发生P42S突变,提示当前分离株已出现致病性增强的变化。8个基因片段均属于欧亚谱系,除了HA基因外,与A/duck/Fujian/SD063/2017(H3N3)毒株其他7个基因片段有高度的同源性,同时与浙江、江西、江苏等不同亚型禽流感病毒同源性很高,说明这2株H11N3毒株发生基因重组现象。本研究结果将为本地区禽流感病毒生物学特性研究和防控提供科学依据。     

鲈鱼病毒性神经坏死病的诊断与防治

福建省漳浦县某海水养鱼场饲养的10万尾鲈鱼苗(Lateolabrax japonicus)发生以自转、狂游、侧游等运动失调及大批死亡为特征的疾病。病死鱼眼睛发亮、微肿,部分鱼体表有新鲜的破溃伤口,死亡率高达65%。寄生虫、细菌学检查均为阴性。应用世界动物卫生组织(OIE)推荐的检测引物,采用RT-PCR检测方法扩增出神经坏死病毒特异性的421 bp基因片段,依此诊断为病毒性神经坏死病(Viral nerve necrosis,VNN)。采取及时捞取病死鱼,去除网箱沉渣粪便,中草药吊袋消毒,减食和氯苯尼考、黄芪多糖、益生菌拌料等防治措施,收到很好的防治效果。     

福建省南美白对虾幼体急性肝胰腺坏死病病原分离与PCR检测

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是一种近年新发现的南美白对虾疫病,其病原为一种特异的副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)。本试验根据文献建立的PCR方法,对福建省9家规模化南美白对虾养殖场进行了AHPND检测,分析不同样本处理方式对检测结果的影响。从90份样本的27份中分离鉴定出81株VP,表明该地养殖场幼虾具有较高的VP感染风险;经PCR检测,在23份样本中,检出阳性菌株72株,其中16份样本的所有受检VP均为特异性菌株,6份样本的部分受检VP为特异性菌株,1份样本的所有受检VP均非特异性菌株,表明患病幼虾存在不同基因型VP同时感染情况;以肝胰腺DNA进行PCR检测,在90份样本中检出8份阳性,而以肝胰腺增菌液进行PCR检测,在90份样本中检出25份阳性,表明直接以肝胰腺DNA进行PCR检测的灵敏性较低。本研究为AHPND检测提供了技术支持。     

牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)方法,本研究采用文献报道的引物和探针,通过优化反应体系,首次建立了检测IBRV核酸的iiPCR方法。结果显示该方法仅特异性检测出IBRV,而对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛腺病毒3型、牛冠状病毒、牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌等病原则不能检出。该方法的检测下限为2.4拷贝/μL质粒标准品,并具有良好的重复性。对临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR方法的检测结果一致;该方法配合PetNAD核酸萃取试剂盒,从核酸提取到报告检测结果仅需1h,具有操作简便、快速、可现地化的特点。对9个省29份商品化冻精检测结果显示,IBRV阳性率为24%(7/29),表明我国流通的商品化冻精携带IBRV情况普遍。本研究为IBRV的现地检测提供了一个可靠的方法。     

啤酒酵母粉替代部分鱼粉对牛蛙生长、抗氧化能力以及肝脏和肠道组织形态学的影响

本试验旨在研究啤酒酵母粉替代部分鱼粉对牛蛙生长性能、体组成、肝脏抗氧化指标、血清生化指标、肠道消化酶活性以及肝脏和肠道组织形态学的影响。选取初始体重为(34.15±1.10) g的牛蛙135只,随机分为3组,每组3个重复,每个重复15只。以含20%鱼粉的饲料为对照饲料,用啤酒酵母粉分别替代对照饲料中25%(Y25%)和50%的鱼粉(Y50%),配制3种等氮等脂的试验饲料,进行为期8周的生长试验。结果显示:用啤酒酵母粉替代25%或50%的鱼粉后牛蛙的各生长性能指标均没有受到显著影响(P>0.05)。2个替代组蛙体水分含量显著高于对照组(P<0.05),蛙体粗灰分含量显著低于对照组(P<0.05),而蛙体粗蛋白质和粗脂肪含量则与对照组无显著差异(P>0.05)。对照组和Y25%组干物质和粗蛋白质的表观消化率均显著高于Y50%组(P<0.05)。粗脂肪的表观消化率随着啤酒酵母粉替代水平的升高而显著降低(P<0.05),而磷的表观消化率则随着啤酒酵母粉替代水平的升高而显著升高(P<0.05)。啤酒酵母粉替代25%或50%的鱼粉对牛蛙血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的活性均无显著影响(P>0.05),Y50%组血清碱性磷酸酶(ALP)、溶菌酶(LZM)活性显著高于对照组(P<0.05)。Y25%和Y50%组肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组(P <0.05)。肝脏中总超氧化物歧化酶(T-SOD)与过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)含量均随啤酒酵母粉替代水平的升高而显著升高(P<0.05)。2个替代组肠道蛋白酶、脂肪酶活性均显著低于对照组(P<0.05),而肠道淀粉酶活性则与之相反。组织学观察发现各组肝脏和肠道组织结构未见明显异常,但2个替代组肝细胞脂肪沉积较对照组减少。肝脏中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的相对表达量各组间没有显著差异(P> 0.05),但2个替代组肝脏中热休克蛋白70(HSP70)基因的相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上,啤酒酵母粉是牛蛙饲料中优质的蛋白质源,其替代鱼粉水平不超过50%时可维持牛蛙正常的生长性能,并有利于维护肝脏健康。     

厦门市宠物犬狂犬病的血清学调查

为掌握厦门市宠物犬狂犬病感染和免疫情况,厦门市动物疫病预防控制中心于2013年8月对厦门市宠物犬进行了狂犬病血清学调查。结果显示：抽检的145份犬血清样品中,检出疑似狂犬病阳性犬4只,同时在流浪犬中也检测到抗体阳性犬4只;在已免疫狂犬病疫苗的86只犬中,有3只是新办证免疫的宠物犬,免疫率为82.7%,免疫抗体合格率为56.6%,疫苗接种频率与抗体保护水平显著关联,免疫接种超过1次的犬只,抗体保护水平是免疫接种1次的犬只的3倍（P＜0.05）。     

荧光定量RT-PCR检测犬瘟热方法的建立和应用

根据Gen Bank发表的犬瘟热病毒(CDV)的F基因序列,经过分析在F片段的保守区域内设计引物,建立了SYBR Green I荧光RT-PCR检测CDV的方法,并通过对厦门市宠物医院收集的临床发病和疑似发病的犬病料(包括眼分泌物、鼻拭子、唾液、血液、尿液等)的检测,结果表明:本研究建立的快速检测CDV的SYBRGreen I荧光RT-PCR方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,值得推广应用。     

用ELISA技术检测厦门口岸进境斑节对虾亲虾携带杆状病毒的情况

本文应用ＥＬＩＳＡ方法检测从厦门口岸进境的斑节对虾携带杆状病毒情况，试验说明进境斑节对虾携带杆状病毒相当严重。按批次计，１９批进境斑节对虾阳性数为１２批，占６８％，按检测样品数算，４０份样品中有１８份阳性，占４５％，同时本文对不同组织杆状病毒含量进行检测，发现淋巴液含量最高，其次为腮，而肝胰脏、肠、肌肉和性腺则为阴性。     

一起疑似鸡大肠杆菌病的暴发调查

2013年7月中旬至9月初,厦门市同安区莲花镇某养殖场茶园放养鸡群10%（8/80）的鸡只出现畏寒、发抖、厌食、翅膀紧缩、尾下垂、腹泻等症状,为了解病因及发病风险因素,采用现场勘察、问卷调查和采样检测方法,判定病原可能为大肠杆菌,致病因素可能是家禽饮用水遭到猪粪水污染,据此,向养殖场主提出为家禽提供清洁饮用水和改造猪粪水池的建议。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在动物病原菌检测中的应用

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术,对厦门口岸进口的1000多份动物及其产品的样品进行致病菌的检测和鉴定,共检出20多种致病菌,并对这些菌株同时用传统生化鉴定方法进行确认。结果表明MALDI-TOF-MS对未知细菌进行鉴定,较传统方法更加快速、准确,而且可以进行高通量检测,可以广泛应用于口岸动物检疫以及微生物检验实验室的日常检验。此外,将国内分离鉴定的各种参考菌株建立的常见致病菌MALDI-TOF-MS数据库与布鲁克公司的MALDI Biotyper数据库进行病原菌鉴定的比较,结果表明,实验室自建的MALDI-TOF-MS数据库可以取得更加准确地结果。