不同来源的山羊供核细胞对核移植重构胚发育的影响

以山羊的胚胎细胞、卵丘细胞、体细胞克隆胚胎细胞为核供体,比较了以这3种细胞为核供体得到的重构胚的体外发育能力.结果显示,以体内受精所得桑椹胚为核供体的重构胚发育能力最高,卵裂率和囊胚率分别为81.25%和25.64%以卵丘细胞为核供体的重构胚发育能力次之(79.68%,21.57%),再克隆胚胎发育能力最低(64%,12.5%),但是各组间差异不显著(P>0.05).     

哺乳动物体细胞克隆技术研究进展

哺乳动物体细胞克隆技术又称哺乳动物体细胞核移植技术或无性繁殖技术，它是通过特殊的人工手段（显微操作、电融合等），对哺乳动物特定发育阶段的核供体（体细胞核）及相应的核受体（去核的原核胚或成熟的卵母细胞），不经过有性繁殖过程，进行体外重构，并通过重构胚的胚胎移植，从而达到扩繁同基因型哺乳动物种群的目的。目前，用核移植技术已生产出了几种体细胞克隆哺乳动物。体细胞动物在畜牧业实际生产中，哺乳动物体细胞克隆技术的成功使快速、大量生产优良种畜成为可能。在医学上，体细胞克隆技术为生产成年个体的胚胎干细胞、复制…     

TSA处理供体细胞或重构胚对山羊克隆胚胎发育的影响

本研究探讨了TSA处理供体细胞或重构胚对山羊克隆胚胎发育的影响,不处理组设为对照组.选择经5、25、50、75、100 nmol·L-1 TSA处理24 h的山羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞进行核移植,结果50和75nmol·L-1组的囊胚率显著高于对照组(27.34%、26.89%VS 16.18%,P<0.05);用5、25、50、75或100 nmol·L-1TSA处理重构胚10 h,结果5、25、50、75 nmol·L-1组的囊胚率均有所提高,其中50 nmol·L-1组显著高于对照组(27.34%VS 16.53%,P<0.05).结果表明,TSA处理供体细胞和重构胚均能显著提高山羊克隆胚囊胚率,说明TSA可能降低了核移植后供体细胞组蛋白去乙酰化水平和DNA甲基化水平,因而提高了克隆胚的发育率.     

转EGFP基因山羊克隆胚的发育

利用脂质体包裹含EGFP基因的质粒,并将之导入山羊乳腺上皮细胞,经G418筛选获得阳性细胞,以阳性细胞作为核供体,利用核移植技术构建转基因克隆胚。结果表明：用转基因山羊乳腺上皮细胞作为核供体,电融合法更适合构建转基因克隆胚。转基因山羊克隆胚体外培养最佳方案是用SOFaa培养液,在培养72 h后加入10%的正常山羊血清（Normal goat serum,NGS）。荧光显微镜下观察到转基因克隆胚中EGFP的表达,大部分克隆胚发育到8-16细胞以后的时期,绿色荧光蛋白才开始逐渐表达,随着发育时间的延长,绿色荧光蛋白的表达也逐渐增强。说明外源基因在胚胎早期发育阶段可以表达,EGFP可以作为报告基因来实现对外源基因整合及表达的监测。     

基因打靶制备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上，可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器，克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

哺乳动物体细胞核移植的DNA甲基化重编程研究进展

DNA甲基化是基因组主要的表观遗传修饰方式之一.核移植重构胚在对供体细胞基因组进行甲基化重编程过程中会出现异常的甲基化模式,而异常的甲基化重编程是导致克隆胚早期死亡及克隆动物发育畸形的主要原因.论文针对体细胞克隆动物基因组DNA的甲基化模式、造成克隆胚胎甲基化异常的原因及异常甲基化对重构胚胎发育的影响等进行了综述.深入研究核移植重构胚甲基化重编程的机制,有助于完善核移植技术,提高克隆效率,使其更好地应用于基础研究和生产实践.     

影响动物克隆效率因素的研究进展

哺乳动物克隆效率低下成为目前制约动物克隆技术发展和应用的瓶颈。文章概述了动物克隆中供体细胞的选择、卵母细胞的去核方法、重构胚的激活和重构胚的培养等因素对克隆效率的影响以及提高克隆效率的策略，并对近年来影响动物克隆效率的因素作了详尽的论述，以期为该领域的科研工作者提供参考。     

骨髓间充质干细胞为核供体的克隆绵羊的生产与鉴定

本研究旨在采用骨髓间充质干细胞（BMSCs）为核供体进行体细胞核移植,以获得成体干细胞克隆绵羊。选择幼体绵羊BMSCs为核供体,构建重构胚进行克隆胚胎移植,克隆绵羊诞生后,选取IASG上公布的绵羊10个微卫星标记位点,PCR扩增克隆羊、供体细胞及代孕母羊微卫星DNA,利用Quantity One软件进行基因分型,计算供体细胞与克隆羊之间的父子关系相对机会（RCP）值。结果显示,以幼体绵羊BMSCs为核供体,与去核成熟卵母细胞进行核移植,构建重构胚进行电融合,其融合率达80.62%,重构胚发育至桑椹胚阶段,经手术植入20只代孕母羊,获得克隆绵羊5只,成活3只。克隆羊基因型与供体细胞一致,供体细胞与克隆羊之间的RCP≥99.999%,证明克隆羊来自幼体绵羊BMSCs。本试验最终成功获得了首例以BMSCs为核供体的克隆绵羊。     

基因打靶备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上,可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

提高山羊胚胎移植效果的方法探析

试验研究了山羊胚胎移植过程中的影响因素。结果表明:对波尔山羊超排处理时,FSH适宜经济剂量为150u;山羊供受体发情同步差在±24h之内较好;移植最佳季节为10-11月份;胚龄对移植效果能产生较大的影响,囊胚移植成活率最高可达78.3%,移胚数量以2～3枚为宜,良好的饲养管理可提高移植效果。     

家兔胚胎细胞核移植与连续移植

将发育不同时期的兔胚和移核胚的卵裂球细胞核与去核的成熟卵母细胞共同组成移核胚,通过中间受体培养和移植实验检验胚胎的发育能力。结果表明,（１）兔囊胚之前各个时期的胚胎细胞核均可使移核胚发育到囊胚;（２）胚胎极化前后的卵裂球参与组成的移核胚发育到囊胚的比例无显著差异。但极化后 ６４细胞胚的卵裂球与去核卵母细胞的融合率低于极化前的 ８细胞胚胎卵裂球;（３）兔 １６细胞胚与去核的卵母细胞组成的移核胚可以发育到期,产仔率为 ３．１６％ ;（４）兔移核胚卵裂球用于连续核移植,其后 ２ 代均可发育成囊胚,其中第 １ 代移核胚与第 ２ 代移核胚发育率相似,但显著高于第 ３ 代移核胚;（５）兔移核胚和各代连续移核胚卵裂球与去核卵的融合率无显著差异。     

波尔山羊胚胎移植的操作与体会

胚胎移植是一个系统的生物技术工程 ,它采用当今最先进的繁育理论 ,采用了超数排卵 ,同期发情、借腹怀胎等先进技术、使用了内窥镜 ,检查胚胎质量 ,外科手术等先进手段、极大地提高了优良母畜繁殖力的功能。近 2年、笔者有幸先后 3次与澳大利亚专家合作 ,在贵州省波尔山羊基地开展波尔山羊的胚胎移植工作 ,取得了圆满的成功 ,现将 2 0 0 0年 10月第 3次开展胚胎移植 (简称胚移 ,下同 )的作法与体会报告如下 ,供同行参考。1　加强胚移山羊饲养管理正确的饲养管理 ,是家畜正常繁殖的基础 ,在制订胚移方案后 ,加强饲养管理显得更加重要。首先 ,…     

体细胞克隆的小鼠胚胎在附植前后发育的研究

采用成年小鼠的卵丘细胞核、胎儿成纤维细胞作核供体细胞来进行核移植,研究小鼠卵母细胞的去核程序和影响重构胚附植前发育的激活条件;随后将重构胚与供体细胞系共培养后获得囊胚阶段的小鼠重构胚,并将其移植到受体鼠体内后获得了24%克隆胚胎。结果表明,小鼠卵母细胞质能够进行重编程来支持早期的胚胎发育。     

细胞周期对核移胚发育的影响

本文综述了近年细胞周期与核移胚发育能力关系的有关研究，供体细胞周期对核移胚的发育有着重要的影响。以新鲜卵母细胞为受体，采用不排出第二极体（ｐｂ２）的激活方法（如电激）时，核移胚的发育以Ｇ１供体最好，Ｓ，Ｇ２核发育能力降低；采用排出ｐｂ２的激活方法（如酒粗）时，Ｇ２核发育能力最强。激活后的卵母细胞做受体也可重排供体核，核周期对核移胚的发育可能影响不大。但尚需实践证明。     

猪胚胎核移植研究进展

核移植就是将共体核移入受体卵胞质获得重组胚的过程，核移植可以产生遗传组成相同的若干后代，前景迷人。猪胚胎核移植目前以早期卵裂球做供体，次级卵母细胞做受体。猪胚母体－合子转变（ＭＺＴ）发生于４细胞期，ＭＺＴ不影响重组胚的发育能力。核质融合及激活老头儿采电激法，可有效地使重级胚发育，卵母细胞质可使融入的核发生再规范产重排发育程序，供体细胞周期对核移胚的发育有重要影响。由于猪胚的特殊性，核移植的难度较大     

体细胞克隆山羊"元元"肺的形态学观察

动物体细胞克隆是指由一个体细胞产生一个和亲代遗传基因一致、形态非常相像的动物。体细胞克隆已相继在牛、小鼠、山羊、猪、野牛、马、猫、大鼠等动物上取得成功。2000年6月中旬,西北农林科技大学生物工程研究所利用成年山羊耳部皮肤成纤维细胞作为核供体,获得两只体细胞克隆山羊——“元元”和“阳阳”。“元元”因呼吸衰竭仅存活36．05h。为了了解“元元”肺的发育情况,作者对“元元”的肺进行了肉眼、光镜和透射电镜观察。     

不同供核细胞处理方法及激活时间对猪核移植重构胚发育的影响

利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞经过去核、注核及激活等操作后,研究猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞,血清饥饿处理法及不同的激活时间等因素对猪核移植重构胚体外发育的影响。结果表明,猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞用作核供体与猪卵母细胞构建重构胚,在卵裂率上无显著性差异。作为供核细胞的猪成纤维细胞,经过血清饥饿与不经过血清饥饿培养,核移植重构胚的卵裂率无显著性差异(P>0.05)。在进行核注射后,使供核细胞与胞质受体作用适当的时间(1～6h)再进行激活,有利于重构胚的发育。     

热激损伤对牛孤雌激活胚胎后续发育的影响

为了研究早期胚胎核与胞质对热激的应激反应,以及产生应激后二者之间的相互作用对胚胎体外发育、合子期激活基因的表达及胚胎细胞凋亡的影响。本研究将孤雌激活胚随机分为2组分别于38.5或41℃培养7h;随后将二者核进行置换,使用正常培养的胚胎与热激胚胎进行核置换,分别构建热激核-正常胞质重构胚以及热激胞质-正常核重构胚,检测了核质置换胚胎的体外发育率、合子激活基因的表达和胚胎凋亡情况。结果,当正常核移入41℃热激的卵胞质,重构胚的发育率显著下降;热激后的核质置换胚胎中存在合子基因激活不完全的现象,这种情况主要存在于热激胞质-正常核重构胚中;热激能诱导胚胎发生细胞凋亡,早期胚胎的胞质对热激更敏感,并在后期的诱导凋亡中起到主导作用。这些结果表明,虽然热激对核和胞质都有损伤,但胞质对热激损伤更为敏感。早期胚胎受到热激后导致发育能力降低的易感性主要是由胞质所引起的;早期胚胎受到热激可能会损伤到卵胞质中的母源因子,即使与正常核构成重构胚也依然会导致合子基因表达异常;并且胞质受到热激损伤会在热激诱导的凋亡机制中起到比核更大的作用。     

供体细胞对绵羊转基因体细胞克隆胚胎体外发育影响的研究

研究比较了转入不同外源基因、转同一基因的不同细胞克隆、供体细胞的培养代数及冷冻对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育的影响,旨在为进一步探寻建立供体细胞个性化准备方案,为提高动物克隆效率提供参考。结果表明,转不同外源基因的供体细胞对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育无影响;转同一基因的不同细胞克隆对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育有一定影响,且转TERT基因的不同克隆间的重构胚的融合率及囊胚率差异显著(P0.05)。随着供体细胞培养代数的增加,重构胚体外发育的桑葚胚率及囊胚率无显著影响,但融合率随着培养代数的增加有上升趋势,且差异显著(P0.05);供体细胞冷冻可促进其融合率、桑葚胚率及囊胚率。研究结果表明,供体细胞的不同克隆、培养代数、冷冻等因素对转基因效率有一定的影响。     

影响水牛体细胞克隆胚胎移植的因素

从不同发情方式、不同胚胎类型、不同胚龄以及不同季节来探讨影响水牛体细胞克隆胚胎移植的效率。结果显示,自然发情与同期发情方法对水牛体细胞克隆胚胎的移植受胎率有显著影响。鲜胚和冻胚移植后受胎率没有显著差异,其受胎率分别是9.79%、14.5%。在移植中,不论是鲜胚还是冻胚,6日龄胚胎移植受胎率最高。而且不同日龄(5、6、7、8～10d)克隆胚胎移植受胎率差异不显著(鲜胚P=0.260 7,冻胚P=0。065 2)。克隆胚胎在秋季移植时受胎率最高,受胎率是16.06%,比其他季节高,且差异显著(P<00.05).其次是春季,但夏季和冬季克隆胚胎移植后受胎率差异不显著(P>0.05)。结果表明,水牛体细胞克隆胚胎在胚胎移植中是可行的,但效率比较低。