养狐场污水中主要污染物检测

为了查清规模化养狐场排出的污水对环境的影响,试验分别采用重铬酸钾法、稀释接种法、重量法、钠氏试剂分光光度法、钼锑抗分光光度法检测2家养狐场污水中化学需氧量(COD)、五日生化需氧量(BOD5)、悬浮物(SS)、总磷(T-P)、氨氮(NH3-N)的含量。结果表明:养狐场排放出的污水中COD、BOD5、SS、T-P、NH3-N的浓度严重超出《畜禽养殖业污染物排放标准》(GB 18596—2001)规定的养殖业水污染物最高允许日排放浓度。山东省潍坊市某水貂狐良种场排放污水中COD、BOD5、SS、T-P、NH3-N浓度分别是标准值的6.18倍、6.20倍、8.05倍、8.13倍、1.31倍,黑龙江省哈尔滨市某养殖场排放污水中COD、BOD5、SS、T-P、NH3-N浓度分别是标准值的18.28倍、13.13倍、29.8倍、20.13倍、3.51倍。     

5-羟色氨调控动物采食的研究进展

关于5-羟色氨(5-HT)对采食量的影响已有几十年的研究历史。机体内的5-HT主要是以必需氨基酸色氨酸(Trp)作为前体物,在大脑和肠道中合成,并在机体中发挥重要的作用。5-HT无法直接透过血-脑屏障,因此中枢神经系统和外周5-HT作为两个相对独立的系统各自发挥作用。目前,已有大量的研究表明中枢5-HT的多种受体以不同的方式调控动物采食,主要有5-HT1A、5-HT1B、5-HT2A、5-HT2C、5-HT3A、5-HT4、5-HT5A、5-HT6和5-HT7。例如,现在临床上被批准使用的抗肥胖药物氯卡色林就是一种5-HT2C受体激动剂。此外,中枢5-HT还可以协同胰高血糖素样肽-1、饥饿素和胆囊收缩素等外周激素共同调控动物采食行为。外周5-HT也能够通过介导胰高血糖素样肽-1和胆囊收缩素来诱导饱腹感。畜禽生产中主要通过在饲料中添加Trp来增加动物体内5-HT的合成。但目前对于Trp对畜禽采食量的调控机制的研究尚不完善,且有研究表明,不同浓度的Trp对动物采食量的影响不同,不同畜禽饲料中最适Trp的浓度也不同。而Trp主要是通过其代谢产物5-HT来调控动物采食。作者查阅了大量国内外最新的研究成果,从中枢和外周两个途径对5-HT调控动物采食行为的研究进展作一综述,期望通过对Trp的代谢产物5-HT对动物采食调控机制的探讨,为Trp在畜禽生产中的应用提供一定的理论依据。     

5-Aza-CdR对德保黑猪手工克隆重构胚胎体外发育效果的影响

为了探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对德保黑猪手工克隆（HMC）重构胚胎体外发育效果的影响，本研究分别从供体细胞和重构胚入手，比较了5个不同处理浓度（0、5、10、20和40 nmol/L）5-Aza-CdR处理HMC重构胚的体外发育效果，筛选最佳处理浓度；在最佳浓度下比较5个不同处理时间（0、24、48、72和96 h）对HMC重构胚的体外发育效果，筛选最佳处理时间；用4个不同浓度（0、0.25、0.5和1 μmol/L）5-Aza-CdR结合最佳浓度和最佳时间处理供体和重构胚，比较其体外发育潜能。结果显示，与空白对照组相比，5、10、20和40 nmol/L 5-Aza-CdR处理72 h对重构胚卵裂率均无显著差异（P>0.05），20 nmol/L 5-Aza-CdR处理能显著提高重构胚的囊胚率（P<0.05），10和20 nmol/L 5-Aza-CdR处理均能显著提高囊胚细胞数（P<0.05），其中以20 nmol/L 5-Aza-CdR效果最佳；与空白对照组相比，利用20 nmol/L 5-Aza-CdR处理HMC重构胚72 h能显著提高重构胚的囊胚率和囊胚细胞数（P<0.05），其余处理时间对重构胚卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数均无显著影响（P>0.05）；在囊胚的最佳处理浓度（20 nmol/L）和最佳处理时间（72 h）下，结合供体的4个处理浓度（0、0.25、0.5和1 μmol/L），同时处理重构胚和供体，各处理组HMC重构胚的发育潜能均有提高，但效果均不显著（P>0.05），其中0.25~0.5 μmol/L 5-Aza-CdR处理效果较佳。综上表明，适宜浓度（0.25~0.5 μmol/L）的DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR处理供体细胞72 h并结合20 nmol/L 5-Aza-CdR处理重构胚72 h均能有效提高德保黑猪HMC重构胚胎的体外发育潜能，该结果可为今后研究德保黑猪HMC胚胎DNA甲基化调控机制提供参考。     

荧光定量RT-PCR检测PRRSV方法的建立及初步应用

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5保守区域为靶基因,基于SYBR Green构建了以RNA为模板、反转录和PCR扩增一步完成的荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法对质粒和细胞培养物中病毒的检测限分别为1×100copies/μL和1×10-2TCID50/m L;组内和组间差异系数(CV)均小于5%。利用本方法检测126份临床组织样品,PRRSV阳性率为42.06%,与传统RT-PCR检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.918),且敏感性显著高于传统RT-PCR。本研究建立的qRT-PCR方法为猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断提供了技术手段。     

束缚应激对小鼠小肠5-羟色胺表达的影响

为了探讨束缚应激对小鼠小肠5-羟色胺(5-HT)表达的影响,试验将小鼠随机分为对照组和束缚应激处理组,每日称小鼠体重,并采用免疫组织化学法对小鼠小肠内5-HT免疫阳性细胞进行检测。结果表明:处理组小鼠体重明显降低,小肠内5-HT免疫阳性细胞数显著高于对照组(P<0.05)。说明束缚应激可使小鼠小肠5-HT免疫阳性细胞表达增加。     

猪IFN-δ5的表达纯化及其抗PEDV感染的作用分析

【目的】试验旨在建立大量表达及纯化猪δ5干扰素(pIFN-δ5)的方法,并对其抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染的作用进行分析。【方法】根据GenBank中pIFN-δ5序列(登录号:NM_001164854.1)设计引物,以猪肝脏组织cDNA为模板进行PCR扩增;将目的基因连接入经EcoRⅤ和Hind Ⅲ双酶切的线性化pET-32a (+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,优化诱导表达条件,并进行SDS-PAGE和Western blotting检测;pIFN-δ5蛋白大量表达后使用镍离子亲和层析柱纯化,并测定蛋白纯度;采用细胞病变抑制法检测pIFN-δ5的干扰素效价,采用CCK8方法检测pIFN-δ5的细胞毒性,进一步测定其抗PEDV的感染能力。【结果】试验成功构建了重组表达质粒pET-pIFNδ5,经诱导条件摸索发现,在D_{600 nm}值为0.5~0.6、IPTG浓度为0.8 mmol/L、37 ℃诱导条件下,目的蛋白pIFN-δ5主要表达于菌体裂解上清中;经大量表达并纯化后可获得纯度＞95%的pIFN-δ5蛋白。使用VSV/MDCK细胞滴定系统检测pIFN-δ5的比活性为5×10⁴U/mg;CCK8检测表明pIFN-δ5的细胞毒性较小。实时荧光定量PCR、Western blotting和间接免疫荧光检测结果表明,pIFN-δ5具有显著抗PEDV感染能力。【结论】本试验建立了表达和纯化pIFN-δ5的方法,通过一系列的体外抗病毒试验证实pIFN-δ5具有良好的抗PEDV感染的活性,为将pIFN-δ5作为抗病毒药物及临床应用奠定了基础。     

绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立

研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊（Ovis aries）成纤维细胞生长因子5（fibroblast growth factor 5，FGF5）基因第1外显子以引入终止密码子，获得定点编辑类型的绵羊胚胎，为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA （single guide RNA，sgRNA）寡核苷酸链（sgRNA-T1~sgRNA-T4），构建4组不同的重组表达载体；将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞，随后用Cruiser^TM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示，sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被Cruiser^TM酶酶切，且测序结果表明都具有靶向效果，编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中，并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率，结果显示，胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max （ng/μL）∶sgRNA （ng/μL）=100∶50，从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示，引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子，通过在成纤维细胞转染表达载体，成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA （T1、T4）；通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎，成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变，为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。     

禽流感H5亚型(re-4/re-5)毒株免疫抗体水平检测

为了掌握甘肃省2012年禽流感发病情况和免疫情况,通过在兰州、白银、武威等市选择102个养殖场,采集1 621份鸡血清,用血凝抑制实验检测其H5亚型(re-4株/re-5株)的抗体水平,结果有68个养殖场合格率在70％以上,免疫效果较好,近期对禽流感有一定抵抗力,其余养殖场抗体效价较低,对禽流感抵抗力较弱.     

周期素依赖性蛋白激酶-5在不同成年牛皮肤中的表达

采用不同毛色的牛皮作为研究对象,运用免疫组织化学法对周期素依赖性蛋白激酶-5(CDK-5)在成年牛皮肤中的表达进行定位和定性研究。结果表明,CDK-5在牛皮肤毛囊的外根鞘和毛球部呈阳性表达,说明CDK-5可能与牛毛色形成有关。     

沂南县某蛋鸡场新城疫、禽流感H5亚型（Re-5株）抗体水平的监测

新城疫、禽流感作为危害养禽业的主要传染病,通过其抗体水平监测,分析免疫状态,对鸡群合理饲养,确保养鸡业健康发展。本次检测沂南县某蛋鸡场血样50份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体水平监测。试验结果表明,新城疫平均HI抗体效价为9.4 log 2,禽流感H5亚型(Re-5株)平均HI效价为7.64 log 2,说明整场免疫合格,但鸡群需要补种禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。     

费县养鸡场新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测

本次检测费县某蛋鸡场血样30份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测。结果表明,该鸡场新城疫HI抗体效价≥5log2的占87%,新城疫免疫合格;而禽流感抗体效价≥5log2的占67%,禽流感H5亚型免疫失败,鸡场必须补免或重免禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。     

MAP3K5基因在畜禽剩余采食量表型调控中的研究进展

随着分子遗传学的发展,已经鉴定出了影响剩余采食量(RFI)的大量数量性状位点和候选基因。有丝分裂原活化蛋白3激酶5(MAP3K5),也称凋亡信号调节激酶1(ASK1),属于MAPK超家族基因之一。目前,已有细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun N-末端激酶(JNK)和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38-MAPK)这3个MAPK家族成员在哺乳动物细胞中被克隆和鉴定,其主要作用机制是介导3条MAPKs信号通路,从而影响家畜的生长、体型及产奶性状等。课题组在前期对RFI的研究中筛选出与牛剩余采食量相关的MAP3K5基因,但其功能作用尚不明确,笔者在此基础上回顾了该基因的结构、生物学功能,概述了该基因在主要畜禽采食量变异及人类肥胖表型中的功能及作用,并从遗传学的角度重点分析了MAP3K5基因在畜禽RFI表型调控中的可能机制。通过对MAP3K5基因在畜禽RFI表型调控中的研究进展进行综述,期望为后期深入开展MAP3K5基因在畜禽采食量性状调控中的分子机制研究提供思路;对于其他可能通过MAP3K5基因影响畜禽表型的因素(如肠道菌群)有待进一步探讨。     

附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶(GPx5)的研究进展

谷胱甘肽过氧化物酶家族是很重要的自由基清除分子,附睾上皮细胞具有四种谷胱甘肽过氧化物酶,其中附睾特异表达的非硒依赖性谷胱甘肽过氧化物酶5(GPx5)具有很强的过氧化物转化能力,因此,对精子的成熟与保护起着非常重要的作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊断

为确诊广东省阳江市某规模化猪场（存栏800头母猪）保育猪发病死亡的原因,本试验对从该发病猪场采集的3份肺脏、肝脏、脾脏临床样品进行细菌学检测及药敏试验,采用PCR/RT-PCR检测临床样品中猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）和猪肺炎支原体等病原。对特异性扩增的3株PRRSV的ORF5基因产物进行序列测定,与VR2332、HuN4、JXA1、CH-1a等代表毒株进行核苷酸序列同源性分析,并构建系统进化树。结果表明,试验分离鉴定出1株副猪嗜血杆菌（Hps）,对7种临床常用药如阿莫西林、头孢拉定等均有较强的敏感性。同源性比对结果表明,3株PRRSV （LJW1、LJW2和LJW3）ORF5基因核苷酸同源性为99.3%~99.8%,与欧洲型代表毒株Lelystad核苷酸同源性为64.0%~64.2%,与HP-PRRSV毒株JXA1、HuN4、CH-1a和TJ核苷酸同源性较高,分别为99.2%~99.5%、99.0%~99.3%、94.5%~94.9%和98.8%~99.2%;与中国河南和广西分离的HP-PRRSV毒株HeNzm1-16和GXLZ05-2015核苷酸同源性较高,分别为99.3%~99.7%和99.2%~99.7%,与美洲型经典疫苗株MLV、美洲型标准株NC、美洲型经典株VR2332核苷酸同源性较低,分别为88.5%~88.8%、85.2%~85.5%和82.3%~82.6%。PRRSV ORF5基因系统进化树分析表明,3株PRRSV均属于美洲型毒株,与国内HP-PRRSV代表毒株JXA1、HuN4和TJ等处于同一分支,亲缘关系较近。本研究揭示了该场保育猪发病病原,并从分子水平上明确了分离的3株PRRSV与不同代表毒株的亲缘关系,为弱毒疫苗的合理选择使用和综合防控PRRSV提供了参考依据。     

MAP3K5基因在畜禽剩余采食量表型调控中的研究进展

随着分子遗传学的发展,已经鉴定出了影响剩余采食量（RFI）的大量数量性状位点和候选基因。有丝分裂原活化蛋白3激酶5（MAP3K5）,也称凋亡信号调节激酶1（ASK1）,属于MAPK超家族基因之一。目前,已有细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c-Jun N-末端激酶（JNK）和p38丝裂原激活蛋白激酶（p38-MAPK）这3个MAPK家族成员在哺乳动物细胞中被克隆和鉴定,其主要作用机制是介导3条MAPKs信号通路,从而影响家畜的生长、体型及产奶性状等。课题组在前期对RFI的研究中筛选出与牛剩余采食量相关的MAP3K5基因,但其功能作用尚不明确,笔者在此基础上回顾了该基因的结构、生物学功能,概述了该基因在主要畜禽采食量变异及人类肥胖表型中的功能及作用,并从遗传学的角度重点分析了MAP3K5基因在畜禽RFI表型调控中的可能机制。通过对MAP3K5基因在畜禽RFI表型调控中的研究进展进行综述,期望为后期深入开展MAP3K5基因在畜禽采食量性状调控中的分子机制研究提供思路;对于其他可能通过MAP3K5基因影响畜禽表型的因素（如肠道菌群）有待进一步探讨。     

MDA5在先天性免疫抗病毒作用中的研究进展

黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation-associated gene-5,MDA5)是胞浆内核酸受体,与病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)相结合,特异性地识别较长的双链RNA,功能与视黄酸诱导表达基因Ⅰ(retinoic acid-inducude gene Ⅰ,RIG-Ⅰ)相似,通过自身级联激活和招募结构域(CARD)与接头蛋白CARD同源相互作用之后,与接头蛋白线粒体连接蛋白(MAVS)(也叫VISA、Cardif或IPS-1)结合,相互作用后会导致RIG-Ⅰ样受体(RLR)在内膜上重新定位,一边招募来TRAF2/TRAF6活化IKK激酶复合物,从而激活转录因子NF-κB;另一边招募来TRAF3和TBK1,从而促进IRF3的磷酸化激活,活化后的转录因子NF-κB及IRF会进入细胞核,共同协作促进Ⅰ型干扰素基因的表达.     

添加呈味核苷酸对断乳仔猪采食量的影响

剌激断乳仔猪的食欲,提高采食量,才能最大限度地发挥断乳仔猪的生长性能。选择36头平均体重为7.36kg、30日龄的杜长大杂交断乳仔猪,按体重、公母等平均原则,随机分为对照组和试验组,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮基础上添加含5'-肌苷酸二钠(IMP)、5'-鸟苷酸二钠(GMP)的呈味核苷酸400mg/kg,试验期30d。结果显示:试验组各重复头均日采食量、头均日增重分别比对照组提高18.96%、13.61%。由此可知,添加含5'-肌苷酸二钠(IMP)、5'-鸟苷酸二钠(GMP)的呈味核苷酸能提高断乳仔猪的食欲及采食量,并改善断乳仔猪的生长性能。     

浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析

为了解2004-2009年猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因的变异情况,从浙江省各个地区采集了109份临床疑似病料,共检测到61份ORF5基因阳性,经序列测定得到可比序列11 7个.在核苷酸序列分析中,发现2004-2005年PRRSV ORF5序列之间同源性为83.6％～99.3％,2006年同源性最高达98.3～99.2％,2008-2009年同源性又有所降低.在氨基酸主要位点分析中,分离毒株的非中和表位27～～30位点与美洲株相比,2004-2006年大部分毒株的29 aa由A29-V29,而2007-2009年大部分毒株的29 aa又由V29-A29;在表位37～45 aa中,所有39位点处由L39”一I39;在表位80～197 aa中,从2004-2009年185 aa大部分都发生了变异,由V185-A185,第189位点由I189-L189.在蛋白生化特性分析中,发现与参考株VR2332 (AY150564)和CH la(AY032626)相比,浙江省PRRSV-GP5蛋白的第100～106位亲水性、表面可及性明显增加,抗原性指数也有所提高,而与参考毒株JX-06-2-EU480750相似.该试验结果说明随着时间的推移,PRRSV ORF5基因发生明显的变异.     

RELAP5应用于PRS系统蒸汽管道隔离阀常关对自然循环建立时间的影响分析

田湾核电厂5&6号机组作为M310改进机型,新增了蒸汽发生器二次侧非能动冷却系统(PRS)作为严重事故预防与缓解措施。蒸汽发生器二次侧非能动冷却系统的蒸汽管道与主蒸汽管道相连,凝水管道与辅助给水系统管道相连。在开展布置工作时发现,发现蒸汽管线非常长,若PRS系统蒸汽管线与主蒸汽管线之间的隔离阀常开,会对PRS系统的正常运行造成影响,因此考虑将PRS系统蒸汽隔离阀的状态由常开变换为常关。本文使用RELAP5热工水力计算程序对PRS系统蒸汽隔离阀常关状态下PRS系统压力平衡时间开展工作,并分析了蒸汽隔离阀常关对自然循环的影响。