MAPK信号通路在炔雌醚诱导大鼠生精细胞凋亡中的作用研究

旨在探讨MAPK信号通路在炔雌醚诱导大鼠生精细胞凋亡中的作用。将20只8周龄雄性SD大鼠随机分为4组,适应饲养1周后,按体重分别以0.00、0.01、0.10、1.00mg·kg-1腹腔注射溶解于橄榄油的炔雌醚,50μL·只-1,每天1次,连续1周。处理结束后,取睾丸并制备组织切片,通过HE染色观察睾丸组织结构的变化;通过免疫组织化学方法检测睾丸生精细胞PCNA、MAPK信号通路磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化JNK(p-JNK)及磷酸化P38(p-P38)蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果显示,炔雌醚处理后大鼠睾丸曲细精管上皮厚度下降,各级生精细胞数量显著减少,细胞皱缩,间隙增大,结构松散,管腔内成熟精子数量减少。生精细胞PCNA与pERK蛋白表达显著减少;TUNEL、p-JNK蛋白及p-P38蛋白表达则显著增加。综上表明,炔雌醚暴露通过影响MAPK信号传导通路抑制生精细胞增殖,促进细胞凋亡,最终抑制大鼠睾丸发育。     

牛膝多糖对炔雌醚致大鼠生精损伤的保护作用研究

为研究牛膝多糖对炔雌醚(Quinestrol)致雄性大鼠生殖损伤的保护作用,以20只8周龄成年雄性SD大鼠为研究对象。随机分为4组,分别进行炔雌醚与牛膝多糖处理。试验结束后,取睾丸、附睾、精囊腺和前列腺称重,取精子检测品质,测定睾丸抗氧化酶活性并观察睾丸形态与组织结构,检测Tunel表达。结果表明,炔雌醚引起大鼠生殖器官重量减少,形态萎缩,组织结构异常,精子数量和品质下降,抗氧化酶活性降低;Tunel表达增加。而炔雌醚+牛膝多糖处理组睾丸抗氧化酶活性升高,Tunel表达减少,降低精子畸形、提高精子数量和品质,缓解生精小管损伤,提高生殖器官重量,最终改善雄性大鼠生殖功能。与对照组相比,单独牛膝多糖处理组睾丸抗氧化酶活性、组织结构和精子质量均有一定程度提高。综上表明,牛膝多糖有效抑制了炔雌醚对生殖功能的破坏作用,对雄性生殖功能具有改善作用。     

叶酸对炔雌醚致雄性大鼠生殖损伤的保护作用研究

旨在探讨叶酸对炔雌醚致雄性大鼠生殖损伤的保护作用。将20只8周龄成年雄性SD大鼠适应饲养1周后,随机分为4组。对照组:橄榄油+生理盐水;炔雌醚组:1.0mg·kg-1炔雌醚;炔雌醚+叶酸组:1.0mg·kg-1炔雌醚+1.1mg·kg-1叶酸;叶酸组:1.1mg·kg-1叶酸;灌胃处理,每天一次,连续2周。处理结束后,取生殖器官称重,检测精子质量,测定睾丸抗氧化功能,制作睾丸组织切片,观察睾丸组织结构,通过免疫组织化学染色检测Caspase-3与eNOS表达。结果显示,炔雌醚单独处理组造成大鼠生殖器官萎缩,重量下降,精子发生异常,精子质量下降,抗氧化酶活性下降,睾丸发生氧化应激;与之相反,凋亡效应酶Caspase-3与eNOS表达增加。炔雌醚+叶酸处理组通过减少eNOS表达降低氧化应激,抑制Caspase-3表达,降低精子畸形率、生精小管损伤,最终改善雄性大鼠生殖功能。与对照组相比,单独叶酸处理组睾丸抗氧化酶活性、组织结构和精子质量均有一定程度提高,无显著差异。本研究首次证实叶酸有效地抑制了炔雌醚对雄性大鼠生殖功能的破坏作用。     

As_2O_3对小鼠雄性生殖系统的毒性作用

为了研究三氧化二砷(As_2O_3)对雄性小鼠生殖系统的影响,将40只6周龄雄性小鼠随机分为4组,以0,3,6,9 mg/kg的剂量连续4周皮下注射As_2O_3溶液,观察睾丸和附睾病理变化,检测精子活力、血浆和睾丸中砷含量、睾酮含量、抗氧化指标(MDA、GSH-Px)、生殖相关标志性分子AR、GPx5和Miwi基因表达以及Miwi定位表达。结果显示,As_2O_3处理组中睾丸生精管畸形,管内生精细胞排列紊乱,附睾管内精子和生精细胞显著减少。随着As_2O_3浓度的增加,精子活力下降,血浆和睾丸中的砷含量增加,睾酮水平降低。在血浆和睾丸中,MDA和GSH-Px含量在6和9 mg/kg As_2O_3组显著增加(P0.05)。生殖相关标志性分子AR、GPx5和Miwi的表达量与对照组相比显著降低(P0.05)。Miwi在睾丸初级精母细胞中的定位表达随着As_2O_3剂量的增加明显降低。上述结果表明,As_2O_3诱导小鼠发生氧化应激,阻碍了小鼠的精子成熟和精子发生,导致生殖毒性。     

吡咯喹啉醌二钠对种公鸡抗氧化能力及睾丸组织形态的影响北大核心CSCD

本试验旨在研究饲粮添加不同水平的吡咯喹啉醌二钠(PQQ·Na2)对种公鸡抗氧化能力及睾丸组织形态的影响。试验选用96只健康的440日龄京红1号种公鸡,随机分为4组,每组6个重复,每个重复4只鸡,分别在基础饲粮中添加不同水平(0、0.5、1.0、2.0 mg/kg)的PQQ·Na2。试验期6周。结果显示:饲粮添加1.0和2.0 mg/kg PQQ·Na2可显著提高血清、肝脏、肾脏和睾丸中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性(P<0.05),显著提高血清、肝脏、肾脏和睾丸清除羟自由基能力(P<0.05),显著提高血清、肝脏和睾丸清除超氧阴离子能力(P<0.05);显著降低血清、肝脏、肾脏和睾丸中丙二醛(MDA)含量(P<0.05);显著提高睾丸生精小管直径和生精上皮厚度(P<0.05)。由此可见,饲粮添加PQQ·Na2可改善种公鸡的抗氧化能力,提高种公鸡睾丸生精小管直径和生精上皮厚度,适宜添加水平为1.0 mg/kg。     

Chinese1弓形虫对雄性小鼠生殖系统的病理损伤

雄性BALB/c小鼠腹腔注射10~4个绵羊源弓形虫TgSheepCHn1(Chinese1)速殖子,分别采集弓形虫感染后2,4,6,8,10 d(days post infection,DPI)和6周的小鼠血清、睾丸、附睾、输精管、精囊腺、尿道球腺和凝固腺,血清检测睾酮含量,采用HE和IHC染色方法分析生殖系统的病理损伤情况和弓形虫的分布。结果发现,与对照组比较,雄性BALB/c小鼠感染弓形虫后睾酮含量先增加,8 DPI后减少(P0.05)。6 DPI后,小鼠生殖器官出现病理损伤,特点为副性腺生殖器官:睾丸曲细精管内生精细胞层数减少,生精细胞数目减少并且排列紊乱;睾丸和附睾管内精子数量减少,精囊腺内分泌蛋白减少,实质少见炎症反应;精囊腺、尿道球腺和凝固腺上皮细胞变性、脱落。6 DPI后,在各器官均可观察到弓形虫,多分布在被膜疏松结缔组织和间质,且随感染时间延长,弓形虫数量显著增加(P0.05)。感染后6周,睾酮和生殖系统结构未见明显异常表现。结果表明,小鼠感染弓形虫,对睾酮含量影响不明显,但虫体可侵入雄性生殖系统和副性腺,并引起损伤,推测弓形虫急性感染可减弱雄性动物生育功能,并可能通过精液传播。     

孕期双酚A暴露对雄性子代大鼠生殖损伤的研究

本研究采用组织化学和酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法探讨孕期双酚A暴露对子代大鼠的生殖毒性作用。将15只妊娠0 d的雌性SD大鼠随机分为3组,分别灌胃50μL含0、1、10 mg/kg体重双酚A的橄榄油。分娩出的雄性子代大鼠生长至8周龄,取睾丸、附睾、精囊腺及前列腺称重,并制作组织切片观察组织结构的变化;取睾丸,测定抗氧化能力;取附睾,检测精子品质。结果显示,双酚A显著降低睾丸、附睾、精囊腺及前列腺的重量,抑制器官发育及睾丸精子发生;降低抗氧化酶活性、升高活性氧含量,破坏抗氧化能力;造成精子品质下降。     

三苯基锡对雄性SD大鼠性腺发育的影响

为研究三苯基锡(TPT)对雄性哺乳动物生殖的毒性作用,将20只雄性青春期Sparague Dawley(SD)大鼠随机分为3个不同剂量的试验组(0.5、5、50μg/kg)和1个对照组(生理盐水)。每3d灌胃1次,暴露54d,末次灌胃24h后用100g/L水合氯醛麻醉并处死大鼠,取其睾丸和附睾。采用石蜡切片和HE染色方法观察睾丸和附睾组织学;采用分光光度法测定睾丸中碱性磷酸酶(AKP)、总抗氧化能力(TAOC)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)水平。结果显示,大鼠睾丸内曲精小管直径随药物剂量的增加而减小,曲精小管生精细胞和管腔内精子数量均有不同程度减少;低、中剂量组AKP高于对照组,高剂量组低于对照组,但差异不显著(P0.05);低剂量组γ-GT活力和T-AOC显著高于对照组,中剂量组与对照组相比变化不明显,高剂量组显著低于对照组(P0.05)。试验证实了TPT在一定程度上影响了雄性大鼠性腺生长发育与精子发生,推测TPT对雄性哺乳动物具有生殖毒性。     

枸杞多糖对双酚A暴露小鼠生精细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

研究枸杞多糖(LBP)对双酚A(BPA)暴露小鼠睾丸生精细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax凋亡蛋白表达的影响.将50只成年雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D、E共5组,每组10只.除正常对照组(A组)注射等量橄榄油外,其余4组小鼠分别腹腔注射20 mg·kg 1的BPA,连续7d,建立生精损伤模型.同时C、D、E组小鼠分别灌服7d不同剂量的LBP(50、100、200 mg·kg-1),正常对照组(A组)和模型组(B组)小鼠灌服等量生理盐水.制备组织切片观察睾丸组织病理学变化,免疫组化法测定睾丸组织Caspase-3、Bax和Bcl-2凋亡蛋白的表达.结果显示,BPA可极显著增加睾丸生精细胞Caspase-3和Bax的阳性细胞数量(P＜0.01),降低Bcl-2的表达(P＜0.05).补充不同剂量LBP后,Caspase-3的阳性表达均极显著低于模型组(P＜0.01).200 mg·kg-1 LBP组生精细胞Bax的阳性细胞数量极显著低于模型组(P＜0.01);Bcl-2的表达随LBP剂量的增加而提高,其中200 mg·kg1LBP组阳性表达极显著高于模型组(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值也随着LBP剂量的增加而上升.结果表明,枸杞多糖通过调节凋亡相关基因的表达,抑制生精细胞凋亡,从而缓解双酚A引起的雄性生殖损伤.     

杨梅黄酮对环磷酰胺诱导雄性小鼠生精障碍的试验

为了研究杨梅黄酮对环磷酰胺所致雄性小鼠生精障碍的保护作用及作用机制,采用腹腔注射环磷酰胺(50 mg/kg·bw)连续7 d建立雄性小鼠生精障碍模型,杨梅黄酮组分别灌胃杨梅黄酮(100 mg/kg·bw、200 mg/kg·bw、400 mg/kg·bw),连续30 d。观察雄性小鼠的精子密度、精子畸变率,血清中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,睾丸组织中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及核因子κB(NF-κB)等指标,并观察睾丸组织的病理改变。结果显示:与模型组比较,杨梅黄酮中、高剂量组的精子密度增加、精子畸变率减少,杨梅黄酮中、高剂量组睾丸组织中TNF-α及NF-κB含量降低,杨梅黄酮中、高剂量组血清中GSH水平增加,杨梅黄酮低、中、高剂量组睾丸组织中MDA含量降低、LDH活性增强。病理可见模型组睾丸组织生精上皮明显变薄,生精细胞层次、数量减少,多数生精小管腔未见精子形成,而杨梅黄酮可改善环磷酰胺所致的生精细胞的损伤。表明杨梅黄酮对环磷酰胺诱导雄性小鼠的生精障碍有一定保护作用,作用机制与抗氧化、抗炎有关。     

增精宝对环磷酰胺致小鼠生精障碍保护作用的研究

为评价增精宝对雄性动物生精作用的影响,采用环磷酰胺致小鼠生精障碍为动物模型,考察不同剂量增精宝对环磷酰胺致小鼠生精障碍的保护作用。结果显示,高剂量组对小鼠的附睾、睾丸、储精囊和前列腺均有较显著的促进作用;低剂量组精子总密度和精子活率均差异显著(P<0.05);高剂量组精子活率差异显著(P<0.05);对小鼠睾丸各倍体生精细胞比例的影响,高剂量组小鼠睾丸生精小管较为饱满,管腔内存在大量精子,生精上皮较厚,可见各级生精细胞排列整齐,界膜明显,睾丸间质细胞排列整齐。结论表明,增精宝两种剂量均能够显著促进环磷酰胺导致小鼠生精障碍的保护作用,高剂量组对雄性小鼠的作用尤为显著。     

槲皮素对双酚A致小鼠生精功能障碍的治疗作用

将50只雄性昆明小鼠随机分为5组,A组（n=10）正常喂饲,B、C、D、E组（各10只）小鼠均腹腔注射50mg／kg·d的BPA,1次／d,连续注射7d,构造小鼠睾丸损伤模型,同时C、D、E组分别用100、200、400mg／kg·d浓度的Que灌胃7d,A组和B组给予等量生理盐水。记录小鼠的体征、体质量变化及试验结束时睾丸、附睾和精囊腺的质量;试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GsH—Px）和丙二醛（MDA）的含量;酶联免疫法测定血清睾酮（T）、黄体生成素（LH）和促性腺激素释放激素（GnRH）的水平;对睾丸组织进行组织学观察。结果显示：D组200mg／kg·d小鼠体质量、各脏器质量均较B组有明显改善（P〈O．05或P〈0．01）,接近A组,C组和E组只有附睾质量变化显著（P〈0．05）;Que各剂量组血清中的SOD、GSH—Px活性均高于BPA组,差异极显著（P〈0．01）,其中D组抗氧化酶的活性最高;MDA测定结果显示,D组明显降低,差异极显著（P〈0．01）,E组也有所降低,差异显著（P〈0．05）;C、D、E组小鼠血清生殖激素水平均有一定程度的恢复,但D组各生殖激素指标均接近A组;组织学观察见各给药组睾丸生精小管生精细胞层数、精子数目均高于B组,尤以D组200mg／kg·d恢复最为明显。结果表明：Que能够促进BPA致小鼠睾丸生精功能障碍后生精功能的恢复,且最佳剂量为200mg／kg·d。     

羔羊睾丸支持细胞发育的组织学观察

为研究羔羊睾丸支持细胞发育过程中的形态学变化,本实验以湖羊1-5月龄的羔羊睾丸为材料,采用常规石蜡包埋、组织切片技术,应用Olympus DP71显微镜照相系统和DP Control软件拍照获取图像,观察了睾丸支持细胞、生精细胞的的形态学变化,利用显微测微系统测量了支持细胞大小、数量、生精小管管径以及面积变化。结果表明:性成熟前羔羊睾丸的解剖特征参数总体表现出左侧大于右侧;随着羔羊睾丸的发育,支持细胞的结构更加清晰完整,细胞体积逐渐增大,生精小管管径、睾丸支持细胞和生精细胞的数目都有增加,并没有在生精小管中发现圆形精子。性成熟之前,羔羊睾丸支持细胞的快速增长主要表现在生精小管直径显著性增大,随着羔羊睾丸生长发育,支持细胞的增殖能力增强,并对生精细胞的发育有一定的影响,本研究可为进一步研究不同季节及不同发情时期滩羊睾丸发育特征提供参考。     

热应激对雄鼠生殖器官及精子发生的影响

每天在固定时间用不同梯度温度(42℃,37℃和33℃)处理实验组鼠1 h,热应激前后分别记录小鼠的肛温和体重.在应激的第8 d、13 d分别处死受试鼠后分离睾丸、附睾并分别称量其重量,计算睾丸、附睾与体重指数,将睾丸和附睾组织切片后镜检.结果表明,应激组小鼠的肛温显著升高(P＜0.05);睾丸和附睾内的精子数量、生精细胞上皮层数显著减少,精母细胞数量减少,且排列混乱,细胞的凋亡数量增多;而睾丸、附睾与体重指数无明显变化.     

细菌脂多糖急性暴露通过炎症反应诱导小鼠睾丸损伤

旨在研究细菌脂多糖(LPS)急性暴露对小鼠睾丸及其功能的影响。将健康雄性小鼠随机分为4组:对照组(Control)、1.25 mg·kg^-1 LPS组、2.5 mg·kg^-1 LPS组和5.0 mg·kg^-1 LPS组,对照组腹腔注射200μL生理盐水,其余3组注射等体积含不同剂量的LPS,作用12 h。收集睾丸组织制作石蜡切片,染色后观察其病理变化,记录体重、睾丸和附睾指数,并测定精子品质相关指标,用RT-qPCR法检测炎症相关基因TNF-α、IL-6、GAS6和TGF-β1的转录,同时用ELISA检测血清中睾酮(T)的含量。结果表明,与对照组相比,LPS急性暴露时,以剂量依赖性方式降低小鼠体重(P<0.05或P<0.01),同时显著降低睾丸指数(P<0.05或P<0.01)、精子密度(P<0.01)及精子活力(P<0.05或P<0.01),增加精子畸形率(P<0.05或P<0.01);使睾丸组织发生不同程度的病理学变化,表现在生精细胞凋亡,曲细精管管腔增大,精子数量减少等;导致血清中睾酮(T)的含量显著下降;另外,LPS还呈剂量依赖方式增加促炎因子TNF-α和IL-6及抑制抗炎因子GAS6和TGF-β1的转录。结果提示,细菌LPS急性暴露可通过破坏机体中炎症因子的平衡,使睾丸组织受到损伤从而导致生精障碍。     

香猪睾丸发育的形态学变化

为了解香猪睾丸发育过程中的形态学变化,外科手术取30、40、50、60、90、110日龄（每个年龄组n=3～4）香猪右侧睾丸经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,组织切片采用HE染色,40倍物镜下观察细胞数量变化,经显微照相后用Scion image软件测量生精小管、输出小管和附睾管的管壁面积。结果发现30～50日龄时睾丸生精...     

槲皮素通过影响Nrf2-Keap1信号通路减缓镉中毒大鼠的生殖机能损伤

本试验旨在探索联合使用槲皮素(QE)可以减轻镉(Cd)致雄性大鼠生殖系统损伤及在此过程Nrf2-Keap1信号通路发挥的作用。试验选取32只3月龄、体重相近的SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为4组,每组8只,分别为对照组[0.5mL·(kg·d)~(-1)生理盐水]、Cd组[5mg·(kg·d)~(-1) CdCl_2]、QE组[15mg·(kg·d)~(-1) QE]、Cd+QE组[5mg·(kg·d)~(-1) CdCl_2+15mg·(kg·d)~(-1) QE],连续灌胃1个月。试验结束后,计算各组大鼠睾丸及附睾脏器系数,检测精子质量及睾丸组织抗氧化水平等变化,利用RT-qPCR及Western blot法检测Nrf2及其相关基因mRNA和蛋白的表达。结果表明:与对照组相比,Cd组大鼠生殖机能受损严重。与Cd组相比,Cd+QE组大鼠睾丸附睾脏器系数(P0.01)和睾酮分泌量(P0.05)增加明显;精子质量提高;睾丸组织中MDA、H_2O_2含量极显著降低(P0.01),GSH含量(P0.05)和CAT、T-SOD、GSH-Px酶活性(P0.01)明显提高;Nrf2及其相关基因NQO1、γ-GCS、HO-1、GSH-Px的mRNA和蛋白的表达呈现明显上升趋势(P0.01或P0.05),而Keap1基因和蛋白质的表达显著降低(P0.05)。综上,QE可能通过激活Nrf2-Keap1信号通路有效减轻Cd引起的大鼠生殖系统损伤。     

不同月龄山羊睾丸生精小管及固有层结构分析

试验旨在探究不同月龄山羊睾丸生精小管、固有层的结构及成分变化，及睾丸中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的分布情况。选用1月龄和2月龄(幼龄)、12月龄(成年)山羊睾丸，利用特殊组织染色、免疫荧光、透射电镜并结合形态学计量统计分析，研究性成熟前后山羊睾丸生精小管、固有层细胞的结构成分及变化。结果显示：随着睾丸发育，生精小管管径增大，生精细胞种类、数量增多；支持细胞发育完善，体积增大，但轮廓不明显；睾丸间质细胞逐渐发育成熟，胶原纤维广泛分布于生精小管固有层基膜和睾丸间质中。免疫荧光染色观察可见：在1月龄、2月龄山羊睾丸中，α-SMA在管周肌样细胞、小动脉血管管周平滑肌细胞中表达阳性，在支持细胞、各级生精细胞、睾丸间质细胞中无表达；在12月龄山羊睾丸中，α-SMA在管周肌样细胞、小动脉血管管周平滑肌细胞中表达阳性，在支持细胞、各级生精细胞、睾丸间质细胞中无表达。本试验为深入研究睾丸的生理功能提供了基础形态学依据。     

单侧睾丸动脉结扎／再通对小鼠生精上皮、血清抗精子抗体的影响

采用单侧睾丸动脉结扎／再通以研究其对小鼠睾丸生精功能以及血清中抗精子抗体IgG、IgM含量的影响。实验选择健康成年BALB／c雄性小鼠于显微镜下行单侧睾丸动脉结扎。再于2h、4h、6h后开通血管。ELISA法检测血清抗精子抗体IgG、IgM水平,光镜观察睾丸生精小管内变化。结果表明：与非术侧相比,术侧睾丸生精小管内生精细胞不同程度地凋亡坏死,生精上皮脱落。各手术组血清中抗精子抗体IgG、IgM含量均有明显增长（P〈0．05）。实验结论：单侧睾丸动脉结扎／再通可引起睾丸生精细胞的凋亡坏死,同时血清抗精子抗体IgG、IgM含量增加。     

二乙基己烯雌酚对成年仓鼠睾丸一氧化氮生成和生精细胞凋亡的影响

探讨了在二乙基己烯雌酚（DES）诱发成年动物生精细胞凋亡过程中睾丸一氧化氮（NO）生成和生精细胞一氧化氮合酶（eNOS和iNOs）表达的变化，以期为阐明DES诱发生精细胞凋亡机理的研究提供基础资料。成年雄性仓鼠皮下注射不同剂量DES（分别为0．01、0．1和1mg／kg体重），连续注射7d后取其睾丸，进行NO含量的测定和eNOS、iNOS免疫组化染色。电镜观察生精细胞超微结构的变化，并用TUNEL法检测睾丸中生精细胞凋亡的变化，苏丹Ⅲ染色法检测睾丸生精小管内脂滴分布的变化。结果显示：NO的生成与DES呈剂量依赖性。DES处理后，在1mg／kg体重剂量组，大量生精细胞表达eNOS和iNOS，并出现大量凋亡，退化的生精细胞胞浆内有大量髓样结构，并有大量脂滴分布于生精细胞内和细胞间。eNOS和iNOS阳性生精细胞与凋亡的生精细胞数量和类型基本一致，主要为精母细胞和圆形精子细胞。