应用X精子冷冻精液生产体内性控胚胎的试验

采用CIDR FSH PG法对206头优秀荷斯坦供体母牛进行超数排卵,其中实验组73头超排后用X性控冷冻精液输精(每头3支),获可用胚310枚,头均可用胚4.25枚;对照组133头,采用常规冷冻精液输精(每头3支),获得可用胚787枚,头均可用胚5.92枚,差异不显著。结果表明,用已分离的X精子冷冻精液对超排母牛进行人工授精生产体内性控胚胎是可行的。     

CIDR的两次应用对超排效果的分析

2002年11月至2003年1月,在新疆乌鲁木齐金牛股份有限公司牛场展开了进口澳大利亚供体牛超数排卵工作.供体牛埋植CIDR进行超排.CIDR用过一次后第2次继续埋植使用(第2次称为旧CIDR).共对184头牛进行超数排卵,其中14月龄供体牛埋植新CIDR,平均每头获可用胚7.6枚,埋植旧CIDR超排后平均每头获可用胚6.1枚;而15月龄供体牛埋植新CIDR超排后平均每头获得可用胚胎6.9枚,埋植旧CIDR超排后平均每头获得可用胚胎6.6枚.对同一批次不同月龄供体牛每头胚胎可用数结果进行对比分析,结果显示14、15月龄平均每头胚胎可用数差异不显著.     

绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究

应用EFS40玻璃化液对6.5～7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验.结果:桑椹胚、囊胚冷冻解冻后移植的妊娠率分别为37.50%(3/8)和54.55%(6/11),胚胎存活率分别为33.33%(3/9)和50.00%(6/12),差异均不显著(P＞0.05);胚胎解冻后用0.5 mol/L蔗糖脱防冻剂与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的妊娠率分别为44.44%(4/9)和50.00%(5/10),胚胎存活率分别为40.00%(4/10)、45.45%(5/11)差异不显著(P＞0.05);10枚解冻后的胚胎细管内脱防冻剂后,直接装管移植给8只受体,妊娠率为50.00%(4/8),胚胎成活率为40.00%(4/10),与同期常规冷冻解冻组相比无显著差异(P＞0.05).     

绵山羊CIDR放置时间对超排效果的影响

研究主要针对CIDR放置时间长短对绵山羊超排效果的影响进行研究,以期为羊胚胎工程技术产业化提供坚实的基础.研究结果表明绵羊第10天起针的供体,平均回收数8.94枚±3.78枚,平均可用胚7.67枚±3.76枚,胚胎可用率90.34%.第13天起针超排的供体绵羊,平均回收8.38枚±3.79枚,平均可用胚6.37枚±3.03枚,胚胎可用率为76.03 %;第10天起针平均可用胚高于第13天起针的超排效果,两者差异显著(P＜0.05),两者之间平均回收胚基本一样,无显著差异(P＞0.05),但第10天起针的胚胎利用率高于第13天起针的胚胎可用率,差异极显著(P＜0.01).CIDR放置9天起针的供体山羊,平均可用胚为17.59枚±3.22枚,胚胎可用率87.40 %;CIDR放置15天起针的供体,平均可用胚数为12.73枚±4.01枚,胚胎可用率为67.95 %.CIDR放置9天起针平均可用胚高于CIDR放置15天起针的超排效果,差异极显著(P＜0.01),CIDR放置9天起针的胚胎可用率高于放置15天的胚胎可用率,差异极显著(P＜0.01).波尔山羊在11月、12月这种结果更明显;4月份虽然9天比15天高,但平均可用胚数和胚胎可用率之间没有差异(P＞0.05),而3月份平均可用胚差异显著(P＜0.05),胚胎可用率差异显著(P＜0.05).     

影响山羊胚胎冷冻效果因素的研究

分别用浓度为1.5 mol/L的乙二醇(EG),1.5 mol/L 1,2-丙二醇(PROH)和1.5 mol/L甘油为冷冻保护液对山羊胚胎进行常规冷冻保存,结果三者对山羊胚胎的冷冻保护效果无显著差异,其中以1.5 mol/L EG的冷冻保护效果为佳。以EFS40为玻璃化液对山羊胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻,其结果与常规冷冻间差异不显著,表明常规冷冻法、玻璃化细管法和OPS法均可用于山羊胚胎的冷冻保存。采用25℃和37℃水浴对常规冷冻和玻璃化冷冻后的山羊胚胎进行解冻,从解冻后的发育效果看,二者间无显著差异,但37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃。还比较了玻璃化液EFS40中添加FCS和BSA后与不添加其他成分的EFS40对胚胎冷冻保护效果的影响,结果表明添加BSA的EFS40的冷冻保护效果显著地高于不添加其他成分的EFS40,但与添加FCS的EFS40间不存在统计学上的差异。     

重复应用CIDR进行超排的效果分析

2002年11月至2003年1月，在新疆金牛生物股份有限公司牛场开展了澳大利亚进口荷斯坦牛超数排卵工作。供体牛埋植CIDR进行超排。CIDR用过一次超排后，经过处理供第二次使用(第二次为旧CIDR)。经过对184头澳大利亚供体牛进行超数排卵，其中：14月龄供体牛埋植新CIDR平均每头获可用胚7．6枚，埋植旧CIDR平均每头获可用胚6．1枚；15月龄供体牛埋植新CIDR平均每头获可用胚胎6．9枚，埋植旧CIDR平均每头获可用胚胎6.6枚。对同一批次不同月龄供体牛平均每头获可用胚胎数进行对比分析，结果差异不显著。     

黑萨福克和杜泊羊新鲜和冷冻胚胎移植效率的研究

为提高优质肉用种用绵羊胚胎移植的效率,试验选取76只黑萨福克羊和27只杜泊羊作为供体,采用"CIDR+FSH+PMSG"法进行超数排卵处理。选取384只小尾寒羊为受体,采用"CIDR+PMSG"法进行同期发情处理,以探索供体胚胎发育阶段、胚胎冷冻处理、胚胎体外停留时间以及移植给受体时移植侧黄体数量等因素对胚胎移植妊娠率的影响。结果表明:移植新鲜囊胚的妊娠率极显著高于桑椹胚(P0.01);冷冻/解冻囊胚移植妊娠率极显著低于新鲜囊胚(P0.01),而冷冻/解冻桑椹胚移植妊娠率与新鲜桑椹胚无显著差异(P0.05);此外,移植桑椹胚时,移植侧有1个黄体的受体妊娠率极显著低于有2~3个黄体受体妊娠率(P0.01),但移植囊胚时两者间差异不显著(P0.05)。综上可知,子宫角移植桑椹胚和囊胚时,移植新鲜囊胚、移植冷冻桑椹胚效率较高;将新鲜桑椹胚移植给移植侧有2~3个黄体受体效果好于1个黄体受体。     

影响绵羊冻胚移植妊娠率的因素分析

本研究对胚胎质量、胚胎移植数量、胚胎发育阶段、冷冻方法、移植方法及饲养管理水平等因素对移植产羔率的影响进行研究,以提高绵羊胚胎移植效率。结果表明:采用1.5mol/L乙二醇做冷冻保护剂对胚胎进行常规冷冻,冻前A级胚胎冷冻/解冻后可用胚率、存活率、降级率均高于B级,差异极显著(P<0.01)。移植1枚冷冻解冻后A级、B级或2枚(A+B)胚胎的受体移植产羔率分别为44.48%、46.84%和44.81%。经χ2检验分析,三者之间无显著差异(P>0.05)。移植双胚的受体双羔率为22(%53/241),以胚胎为单位计算,产羔率仅为33.40%。A级囊胚和桑椹胚的产羔率之间无显著差异(P>0.05)。1.5 mol/L乙二醇常规冷冻保存的体内胚胎移植产羔率高于EFS40玻璃化冷冻保存,但经统计学分析,二者无显著差异(P>0.05)。子宫手术移植和腹腔内窥镜法子宫移植之间产羔率不具统计学差异(P>0.05)。在牧场条件下大规模移植的平均产羔率为43.95%,范围在20%￣70%之间,受体饲养管理水平对绵羊移植产羔率有较大影响。     

冷冻—解冻兔桑椹胚同期和异期移植的成活率

冷冻一解冻胚胎成活力的评价方法有多种,常用的是解冻后的形态学观察和体外培养法,但能够表明其进一步发育能力的最好方法是将其移植入一个假妊娠受体。据报道,冷冻一解冻兔胚胎的移植成活率通常低于非冷冻胚胎。冷冻与非冷冻兔胚胎的这种差异可能是冷冻—解冻胚胎与子宫之间没有同步化所致。冷冻和解冻可延迟胚胎正常代谢和合成作用的恢复。     

应用1.8mol/L乙二醇+蔗糖冷冻保存奶牛胚胎

以 1 .8 mol/L乙二醇 0 .1 mol/L蔗糖 2 0 ?S-m PBS和 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖 2 0 ?S-m PBS对奶牛胚胎进行了冷冻保存试验 ,并与以 1 .4 mol/L丙三醇 2 0 ?S-m PBS常规冷冻保存奶牛胚胎效果进行了比较。冷冻程序为 -7℃平衡 5min后植冰 ,平衡 1 0 min,然后以 0 .3℃ /min的速率降至 -3 3℃ ,直接浸入液氮中保存。胚胎解冻后的培养结果 ,3组之间的胚胎存活率 ,分别为 80 .0 %( 1 6/2 0 )、90 .5%( 1 9/2 1 )、90 .0 %( 1 8/2 0 ) ,差异不显著 ( P>0 .0 5) ;胚胎的囊胚孵化率 ,1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖组达 81 .0 %( 1 7/2 1 ) ,极显著高于 1 .8mol/L乙二醇 0 .1 mol/L蔗糖组的 3 0 .0 %( 6/2 0 )和 1 .4mol/L丙三醇组的 2 5.0 %( 5/2 0 ) ( P<0 .0 1 )。 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖组冷冻的 A级胚胎和 B级胚胎之间的存活率差异不显著 ( P>0 .0 5) ,但是 A级胚胎的囊胚孵化率 ( 1 0 0 %,1 1 /1 1 )显著高于 B级胚胎( 60 %,6/1 0 ) ( P<0 .0 5)。另外 ,胚胎解冻后透明带断裂对其发育率无影响 ;冷冻前胚胎在 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖液中平衡 1 0 min和平衡 2 0 min,冷冻解冻后培养发育率差异不显著 ( P>0 .0 5)。试验结果表明 ,应用 1 .8mol/L乙二醇 0 .0