6种核酸提取试剂盒的布鲁氏菌核酸提取效率比较

为比较不同类型核酸提取试剂盒的布鲁氏菌核酸提取效率,选取6种核酸提取试剂盒(磁珠法、柱式法各3种),分别对布鲁氏菌灭活菌液和16份临床组织样品进行核酸提取,使用荧光定量PCR方法评估提取效率。结果显示:6种试剂盒在提取10~2和10~4稀释度的布鲁氏菌灭活菌液核酸时,磁珠法的提取产物荧光定量PCR的Ct值整体低于柱式法,批内变异系数小于5%;提取临床组织样品时,2种柱式法细菌提取试剂盒能够提取全部样品的核酸,2种磁珠法细菌提取试剂盒提取了14份核酸,剩下的1种磁珠法和1种柱式法病毒提取试剂盒分别提取了12份和3份核酸。结果表明:6种试剂盒均能有效提取布鲁氏菌灭活菌液,其中磁珠法提取效率略高于柱式法;柱式法细菌DNA对临床组织样品的提取效率略高于磁珠法细菌DNA,但磁珠法和柱式法的病毒DNA提取试剂盒均不适用于临床组织样品的布鲁氏菌核酸提取。在实际操作中,应根据实验室条件、样品数量和任务紧迫性等因素,选取应用合适的试剂盒。本研究为布鲁氏菌核酸提取方法的选择提供了参考。     

核酸提取方法的研究进展

系统详细的阐述了核酸提取过程中针对细胞裂解和核酸纯化两大关键步骤的各种研究方法,包括对组织细胞裂解的胍盐裂解法、碱裂解法、CTAB裂解法以及酚抽提法等,和纯化采用的固相基质：二氧化硅基质、磁珠和阴离子交换介质。阐明了各种方法的技术原理以及优缺点,以及各技术在实践中的应用发展情况。     

核酸提取方法的研究进展

系统详细的阐述了核酸提取过程中针对细胞裂解和核酸纯化两大关键步骤的各种研究方法,包括对组织细胞裂解的胍盐裂解法、碱裂解法、CTAB裂解法以及酚抽提法等,和纯化采用的固相基质:二氧化硅基质、磁珠和阴离子交换介质。阐明了各种方法的技术原理以及优缺点,以及各技术在实践中的应用发展情况。     

3种核酸提取试剂盒对猪不同样品RNA病毒核酸提取效果的比较研究

为了筛选出高效、低成本、用时短的RNA核酸提取试剂盒,为各级实验室开展动物疫病监测提供参考,试验选择3种常用磁珠法核酸提取试剂盒(病毒DNA/RNA提取试剂盒A、病毒RNA提取试剂盒B及病毒总核酸提取试剂盒C)对临床粪便样品提取猪流行性腹泻病毒RNA、临床组织病料样品提取猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA,通过实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法进行检测,以Ct值评价分析提取效率及重复性,同时对不同试剂盒提取时间及价格进行综合比较分析。结果表明:对于粪便样品,B、C试剂盒的RNA提取效率要高于A;3种试剂盒对PRRSV浓度较高的组织样品均具有较好的提取效果,A、B试剂盒的RNA提取效率高于C试剂盒,但B、C试剂盒的重复性优于A试剂盒。其中A试剂盒对于组织样品中高浓度病毒样品提取效率较高,时间最短;B试剂盒对于粪便样品中低浓度RNA病毒提取效率最高,但价格最贵,且时间最长;C试剂盒对粪便中低浓度样品RNA提取效率高于A试剂盒,价格最低。综合提取效率、时间及成本等因素分析认为,试剂盒C性价比较高,可用于大批量临床样品检测。说明不同试剂盒对不同种类样品提取后,提取效率存在差异,实验室可根据实际情况进行选择。     

油菜蜂花粉核酸提取工艺的比较研究

采用三氯乙酸法(TCA法)、硫酸盐法和相分离法,从油菜蜂花粉中提取核酸产品,并对三种提取方法提取的核酸产品进行核酸和蛋白质吸收比值分析,从而得出三种分离法中相分离法是最优的提取方法。     

应用猪繁殖与呼吸综合征核酸标准物质比较5种核酸提取试剂盒

为比较不同核酸提取试剂盒对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核酸的提取效率,使用国家标准物质“猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株核酸标准物质”作为模拟样品,分别使用试剂盒A、B、C（磁珠法）以及试剂盒D、E（柱式法）等5种核酸提取试剂盒进行核酸提取,然后通过荧光RT-PCR和数字RT-PCR方法评估提取效率,并分析不同基质对提取效率的影响。结果显示：5种试剂盒均能有效提取PRRSV RNA,其中磁珠法的提取效率高于柱式法;试剂盒B和C对PRRSV RNA的提取效率较高;基质会对提取效率造成影响,精液和抗凝血对试剂盒提取效率的影响较大。综上,试剂盒B、C均可适用于猪繁殖与呼吸综合征临床样品的核酸提取。实际操作中,应根据实验室条件、样品数量、样品类型和时间要求等因素,选择应用合适的提取试剂盒。     

快速提取病毒核酸用于PCR或RT-PCR

PCR或RT—PCR因其操作简便快速、灵敏度高已越来越广泛的应用到病毒核酸的检测中，但其检测效率在很大程度上受到核酸提取速度和质量的影响。经典的病毒核酸提取方法主要包括变性剂裂解、蛋白酶K处理、有机溶剂抽提、乙醇或异戊醇沉淀等操作。众多的步骤和多次的转移操作以及在每个步骤上消耗的时间往往会降低核酸提取的效率。本文介绍了一种改进的异硫氰酸胍法，经多次提取鸭瘟疱疹病毒（Duck plague herpesvirus，DPV）的基因组DNA和鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）的基因组RNA，显示出该法具有简单快速、安全可靠、低成本和高效率的特点。     

全自动核酸提取仪对不同类型ASFV、PEDV样品的提取效果

研究以非洲猪瘟病毒（ASFV）的各类型阳性样品以及流行性腹泻病毒（PEDV）阳性样品为检测对象,评测全自动核酸提取仪对DNA和RNA核酸的提取效果,旨在帮助动物疫病检测实验室了解如何评测全自动核酸提取仪是否满足检测需求。试验选用已经过检测结果为阳性的不同类型ASFV样本和PEDV阳性的粪便拭子样品,进行10倍梯度稀释并将检测结果与已知的检测原值进行对比。结果显示,试验使用的核酸提取仪的稳定性满足需求,但敏感性较差,可能存在环境、人员、车辆等病毒含量低的样品被漏检。在抗干扰方面,试验使用的核酸提取仪对咽喉拭子的核酸提取结果存在假阴性的情况;该仪器对肛门拭子和环境样品的抗干扰性不佳,也可能出现假阴性结果;该仪器不会受样品影响而检测出假阳性结果。     

五种核酸提取试剂盒对新城疫病毒RNA提取效率的比较

本研究采用罗氏、天隆、赛默飞世尔等公司生产的5种核酸提取试剂盒,对新城疫病毒RNA的提取效率进行比较,以优选出提取效率高、耗时短、成本低的核酸提取方法,为各级实验室开展新城疫病毒核酸检测提供技术参考。采用5种商品化核酸提取试剂盒,对不同浓度(稀释度10~0~10~(-8)/EID50 10~(8.3))的新城疫病毒标准样品进行RNA提取,通过实时定量荧光RT-PCR进行检测,以Ct值评价5种试剂盒的RNA提取效率,并对试剂盒的RNA提取时间和价格等进行综合比较分析。结果显示:High Pure Viral RNA Kit(罗氏)、动物疫病病毒RNA核酸提取试剂盒(天隆)和Lab Serv Viral Total NA Kit(赛默飞世尔)的RNA提取效率较高。其中,Lab Serv Viral Total NA Kit对低浓度样本的RNA提取效率最高,价格最便宜;Tian Long的RNA提取所需时间也较短,但操作最为简便。综合提取效率、时间及成本等因素,分析认为Lab Serv Viral Total NA Kit(赛默飞世尔)性价比最高,适用于大批量临床样品的集中检测。     

猪精液提取蓝耳病病毒核酸的方法比较

为筛选从猪精液中提取微量蓝耳病病毒(PRRSV)核酸的有效方法,将蓝耳病(变异株)弱毒苗稀释成不同滴度(TCID₅₀/mL)的病毒液,与健康猪常温精液混合作用。分别用Trizol法、磁珠法、离心柱法提取含毒精液中的病毒RNA,用荧光RT-PCR试验检测病毒RNA,结果表明,当精液中病毒滴度高于0.1 TCID₅₀/mL时,3种病毒RNA提取方法均可检出。离心柱法对猪精液中PRRSV核酸提取灵敏度最高,可检出0.01 TCID₅₀/mL滴度的病毒,稳定性好。     

新一代的磁珠法核酸自动提取仪研究进展

新一代的磁珠法核酸自动提取仪采用先进的磁珠分离技术,结合相关的磁珠分离试剂盒,可以从多种样品如全血、血清、组织、细胞中分离出高纯度的核酸。文中详细介绍了核酸自动提取仪的原理及应用,并通过检测证明该仪器运动控制稳定,可靠性好,提取效果优,自动化程度高。     

快速提取牛脾中核酸的方法探讨

一种新的DNA提取方法可快速从奶牛脾脏中提取到高质量DNA样品。氯化钠的最合适提取浓度是A缓冲液1．6％，B缓冲液14％，乙醇加入量3～4倍，处理时间30min，温度65℃，在这一条件下基因组的提取量较其它方法显著提高。紫外吸收测定结果表明：所获DNA的A260/A280值大于1．80。该方法所需实验仪器简单、操作容易、纯度好、用时短、成本低等优点。     

新城疫病毒核酸提取方法的优化与比较

为提高新城疫病毒荧光RT-PCR检测灵敏度,对柱式提取法提取新城疫病毒核酸的裂解液(异硫氰酸胍)、洗液1(盐酸胍)浓度进行了优化;探索Triton-100和EDTA对病毒裂解效果的影响;采用荧光RT-PCR检测方法比较优化后的柱式提取法和Trizol经典法提取新城疫病毒核酸的效率。结果显示,柱式提取法提取新城疫核酸裂解液(异硫氰酸胍)的最佳浓度为5 mol/L,洗液1(盐酸胍)最佳浓度为5.5 mol/L;将20 mmol/L EDTA加入裂解液对新城疫病毒核酸的提取有抑制作用,将0.8%Triton-100加入裂解液能提高核酸提取效率;优化后的柱式提取法比经典Trizol提取法提取效率高。该试验优化了适合从新城疫病毒中高效提取核酸的方法。     

王浆核酸含量的测定和核糖核酸的提取

本实验初步测定了王浆中核酸含量为560.37微克/克鲜王浆,其中脱氧核糖核酸为23.51微克/克鲜王浆,核糖核酸为536.86微克/克鲜王浆。仿斯蒂尔(Steele)法从30克王浆中提出了21.1毫克核糖核酸,测定了吸收光谱,最大吸收峰260毫微米;最小吸收峰236毫微米。     

磁珠法核酸自动提取仪在分子生物学领域的应用

磁珠法核酸自动提取仪可以简单、快速、高效和经济地实现各种标本核酸的自动提取。本文概述了核酸自动提取仪的原理及分类，磁珠法核酸自动提取仪原理、分类、特点及其在分子生物学领域的应用。     

三种核酸提取方法检测禽流感病毒的比较

为比较不同核酸提取方法检测禽流感病毒敏感性的差异,将 H5N1禽流感抗原做10－2～10－10稀释,分别用 Trizol 法、磁珠法和膜吸附法提取上述抗原稀释度核酸模板,采用荧光 RT-PCR 对其进行评价。结果表明,在不同稀释度的抗原的检测中,3种核酸提取方法以膜吸附法提取效率最高,其依次为磁珠法、Trizol 法,经方差分析,3种核酸提取方法之间存在显著性差异（P＜0．05）。说明 3种核酸提取方法提取效率存在显著差异,核酸提取效率的高低影响禽流感病毒荧光 RT-PCR 检测的敏感性,建议实验室根据实际情况选择核酸提取的方法。     

五种核酸提取法对猪繁殖与呼吸综合征病毒提取效率的比较

目的：研究Trizol RNA提取法、杭州博日吸附柱RNA提取法、Promega核酸提取仪磁珠RNA提取法、西安天隆核酸提取仪磁珠RNA提取法、Thermo核酸提取仪磁珠RNA提取法等五种不同核酸提取方法对不同含量猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）阳性样品的相对提取效率,为动物疫病监测诊断实验室核酸提取方式的选择提供技术参考。方法用五种不同核酸提取方法对4份10倍梯度稀释的PRRSV阳性血清、2份PRRSV阳性组织悬液及其离心后的上清液共8份样品同时进行核酸提取,用荧光RT-PCR方法进行检测,获取各样品PRRSV荧光RT-PCR结果的CP值,分析五种提取方式的相对提取效率。结果对合适的提取样品,磁珠提取法相对提取效率最高,吸附柱法其次,Trizol提取法相对效率较差;在三种磁珠提取法中,提取效率相差在2个CP值内,差异不明显,但以天隆磁珠提取法提取效率更高。结论预装试剂结合仪器自动化操作的磁珠法提取效果稳定,效率最高;国产仪器国产试剂提取效率不亚于进口仪器和试剂。     

实时荧光定量PCR模板核酸提取方法的比较

对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法酚/氯仿法DNA/RNA同提取法。提取效率为酚/氯仿法DNA/RNA同提取法试剂盒提取法。表明各提取方法效果差异显著(P0.01),为实验室核酸提取提供了参考。     

非洲猪瘟两种核酸提取方法的对比报告

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前,非洲猪瘟没有有效的疫苗。建立快速准确的诊断方法对于控制本病的传播至关重要。荧光PCR核酸检测是目前灵敏度最高的检测方法。而荧光PCR检测结果准确与否与非洲猪瘟核酸提取的质量有很大关系。笔者在检测工作中对农业部公布的常用快速检测试剂盒裂解液提取核酸与商品化试剂盒全自动核酸提取仪提取核酸,用同一检测反应液进行扩增,并从检测结果的准确性、操作简便程度、样品的使用范围、成本控制等方面进行比较,从而筛选出最佳的核酸提取方法,以期为非洲猪瘟疫情防控提供技术支撑。     

猪制品中非洲猪瘟病毒核酸提取方法的比较

为比较猪制品中非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸提取效率,将非洲猪瘟假病毒掺入新鲜猪肉、香肠、血粉试验材料,制备相关模拟感染样品,然后采用核酸免抽提、柱式核酸提取及磁珠吸附核酸提取方法提取ASFV核酸,计算ASFV核酸回收率,评估提取效率。结果显示：猪制品模拟感染样品中,ASFV核酸在上清和沉淀中均被检出,且上清中的检出量高于沉淀;对于香肠模拟感染样品上清,3种核酸提取方法均适合,但以柱式提取方法为佳,病毒回收率高达82.8%;对于新鲜猪肉模拟感染样品上清,以磁珠吸附核酸提取方法为佳,病毒回收率为20.9%;对于血粉模拟感染样品上清,以柱式核酸提取方法为佳,病毒回收率为10.2%。本研究为不同猪制品中ASFV核酸提取提供了参考。