鸭IFN-α真核表达质粒基因枪免疫对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭细胞免疫调节作用初探

为探索鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(pcDNA-SDIFN-α)对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭的细胞免疫调节作用,本研究将pcDNA-SDIFN-α以1、3和6μg/只3个剂量用基因枪轰击法分别免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA3.1( )为对照,所有鸭15 d后接种鸭瘟(DP)弱毒疫苗。接种后第3、7、14、21、28、35、49、63、84天采血用淋巴细胞增殖试验(MTT法)测定鸭外周血中T淋巴细胞转化效果;第7、14、21、28、35、49天采血用流式细胞仪(FACS)测定CD3 T淋巴细胞数量的动态变化。结果发现:①T淋巴细胞对ConA的反应能力(OD值),不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭外周血T淋巴细胞转化功能于第3-84天均高于PBS和空载体pcDNA对照组,其中第3-84天1μg/只组极显著(P≤0.01)高于PBS和pcDNA对照组,3μg/只组极显著(P≤0.01)或显著(P≤0.05)高于PBS和pcDNA对照组,6μg/只组于第7-49天极显著(P≤0.01)或显著(P≤0.05)高于PBS和pcDNA对照组;1μg/只组第3-35天显著(P≤0.05)高于3、6μg/只组;3μg/只组于第14-35天高于6μg/只组,但差异不显著(P≥0.05);pcDNA对照组略高于PBS对照组,但差异不显著(P≥0.05);②CD3 T淋巴细胞数量变化,不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭于第7-49天均高于PBS和pcDNA对照组,其中1μg/只组于第14-49天极显著(P≤0.01)高于PBS和pcDNA对照组,3μg/只组于第21-49天极显著(P≤0.01)高于PBS对照组和显著(P≤0.05)高于pcDNA对照组,6μg/只组于第7-49天显著(P≤0.05)或极显著(P≤0.01)高于PBS和pcDNA对照组;1、3和6μg/只组之间差异不显著(P≥0.05);pcDNA组于第14-49天高于PBS组,但差异不显著(P≥0.05)。研究表明,pcDNA-SDIFN-α提前15 d免疫能显著增强DP弱毒疫苗诱导的鸭细胞免疫力,以基因枪免疫1μg/只的效果最佳,它是一种良好的增强DP弱毒疫苗细胞免疫的分子佐剂。     

鸭瘟鸡胚化弱毒冻干疫苗对成鹅有效免疫剂量的初步测定

鹅的鸭瘟病预防,多年来都是使用鸭瘟弱毒疫苗按鸭的免疫剂量进行预防接种,但最适宜的免疫剂量尚未测定。为了测定鸭瘟疫苗对鹅的有效免疫剂量,采用鸭瘟鸡胚化     

石井系鸭瘟弱毒疫苗通过雏鹅继代后其毒力及免疫原性变化的初步观察

本文叙述了石井系鸭瘟弱毒疫苗连续通过雏鹅继代,对雏鹅的毒力逐步增强,主要表现在体温逐渐升高,肝脏病变愈来愈明显,死亡率也愈来愈大。同时对大鹅的毒力也不断的提高。在F_(22)代以前共接种雏鹅110只和大鹅27只,结果全部健活,但以后则死亡数不断增加。至F_(38)代时以10~(-1)稀释毒注射雏鹅5只及大鹅3只,全部死亡。与此同时,此雏鹅毒对鹅体的免疫原性则有明显的提高。在F_(15)代时以500及1000倍稀释毒各免疫大鹅5只,结果10只鹅全部死亡;但到F_(22)代时,以同样剂量对大鹅进行免疫及攻毒,结果两组共8只大鹅,则全部保护。后来为了降低雏鹅毒的致病性并保持其良好的免疫原性,又将雏鹅F_(27)代毒通过鹅胚5代后,再通过鸭胚5代,最后用鹅胚及鸭胚毒分别以10~(-1)稀释度注射大鹅各3只,结果鹅胚毒组2/3存活,而鸭胚毒组则3/3正常。石井系鸭瘟弱毒苗(以下简称石井苗)经过多年来在生产上使用推广,对控制鸭瘟流行起了良好作用,且抗原性一直保持稳定,用于对鸭的最小免疫剂量可达到10~(-7)l毫升/只。但近两年来我省各地鹅的鸭瘟病广泛流行,然而当使用此苗于鹅体时,则防疫效果不甚理想,免疫效价低,免疫期短。为此,本试验试图将石井苗先通过雏鹅继代,以期达到提高其对鹅体的免疫效果,为解决当前鹅感染鸭瘟而提供较理想的弱毒疫苗。     

用原位杂交检测基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内分布规律

将小鹅瘟病毒(Goose Parvovims,GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只6、3、1μg的剂量基因枪轰击免疫4周龄BALB/c小鼠,于免疫后不同时间采集小鼠心、肝、脾、肺、肾、肠、脑和免疫部位皮肤等组织,用原位杂交方法检测pcDNA-GPV-VF3在小鼠体内的分布规律.结果显示,pcDNA-GPV-VP3在免疫后1 h即分布于小鼠除脑外各个组织,脑组织于免疫后3 h呈阳性,各组织阳性信号随时间的推移逐渐减弱;pcDNA-GPV-VP3在不同组织中持续时间依次为肝脏>心>脾>免疫部位>肾、肠>肺>脑;pcDNA-GPV-VF3不同剂量组信号强弱和持续时间存在的总体规律依次为6μg组>3 μg组>1μg组.基因枪轰击pcDNA-GPV-VP3于免疫后能快速而广泛的分布于小鼠各个组织且持续存在达63 d.     

用鸭瘟疫苗免疫雏鸭、与雏鸡同居感染试验

以鸭瘟弱毒冻干苗注射初出壳的雏鸡可使雏鸡死亡。为了弄清在鸭瘟防疫工作中是否有可能因排弱毒而造成雏鸡的感染死亡。特设计本试验。     

鸭瘟强毒株和疫苗株对雏鸭IFN-γ基因表达的影响

本试验旨在探讨不同毒力的鸭瘟病毒(DPV)感染对雏鸭INF-γ mRNA表达水平的影响,为DPV的感染与免疫机制提供理论依据。应用实时荧光定量PCR技术,对接种了鸭瘟强毒株和疫苗株的雏鸭肝脏及外周血淋巴细胞(PBL)中IFN-γ mRNA的表达水平及鸭瘟病毒(DPV)的荷载量进行动态定量监测。结果表明:①感染鸭瘟强毒后,IFN-γ mRNA 在肝脏中的表达没有明显规律,PBL中IFN-γ mRNA表达水平很高,在此期间(1~12 h),病毒DNA量很少。IFN-γ mRNA表达量在6 h后大幅下降,直到144 h都非常低,而病毒的载量逐渐增大,至144 h时达到峰值。②接种弱毒疫苗后,肝脏中IFN-γ mRNA表达水平较高且稳定,至12 h达到顶峰,约比对照高出8倍。PBL中IFN-γ mRNA表达量较低且不稳定。弱毒DNA荷载量稳定上升,但载量约比强毒低两个数量级。病毒DNA在PBL检测不到。IFN-γ在抵抗鸭瘟强毒中发挥了重要作用;IFN-γ在肝脏中高水平的表达可能是鸭瘟疫苗的免疫机制之一。     

鹅源鸭瘟与小鹅瘟二联弱毒疫苗的研究（初报）

鹅的鸭瘟和小鹅瘟是当前严重威胁养禽业的两种传染病,虽然已分别有了预防疫苗,但鸭瘟疫苗对鹅的鸭瘟效价较低,免疫期短,效果不一,特别是接种两种疫苗时,需多次注射,使用不便。根据鹅源鸭瘟病毒和小鹅瘟病毒可同时在同一鸭胚复制增殖,未发现干扰作用的存在,特进行二联疫苗的研制,以便提高疫苗质量和满足防疫需要。 研究结果显示,二联苗对成鹅具有良好的安全性和免疫原性,免疫鹅对鸭瘟强毒攻击的半数有效免疫剂量(10~(6.5)ED_(50)/1ml)、免疫鹅血清对小鹅瘟病毒的中和指数(NI=7586)分别略高于鸭瘟疫苗(10~(6.5)ED_(50)/1ml)和小鹅瘟疫苗(NI=3163),免疫鹅的鸭瘟中和抗体反应和小鹅瘟沉淀抗体反应与相应的鸭瘟疫苗和小鹅瘟疫苗基本相同,从而初步研制成功二联弱毒疫苗。二联苗免疫鹅对鸭瘟有免疫力,其后代可免遭小鹅瘟侵袭,具有双重作用,由于使用同一鸭胚生产二联苗,可简化制苗工艺,降低成本,便于现场应用,减少对鹅的应激作用。     

H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究

为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情况。分别于攻毒后3d、5d和7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离,检测鸭排毒情况及免疫和攻毒后血凝抑制(HI)抗体、中和(NT)抗体的动态变化。结果表明:30μg和50μg免疫组均可对免疫鸭产生100%保护,而20μg剂量组则可对免疫鸭提供80%保护。     

消息信使

几种常见鸭病的防疫目前养鸭常见的有威胁的传染病有：小鸭病毒性肝炎、鸭瘟和鸭霍乱，其常规免疫方法是：一初生鸭雏：注射鸭胚化鸭瘟弱毒疫苗。按疫苗包装说明剂量、方法使用，注射后３－５天产生免疫，免疫期约１年。种鸭开产前没有给种鸭进行小鸭病毒性肝炎免疫时，...     

鸭瘟灭活疫苗效力试验和安全试验

将已建立的鸭瘟病毒(DPV)AV1221株基础种毒经鸭胚繁殖、收集胚液病毒、0.2%甲醛溶液灭活后,与矿物油佐剂乳化制备了3批鸭瘟灭活疫苗.成鸭的免疫攻毒测定,疫苗最小免疫剂量为0.12 mL,确定使用剂量为每羽份0.5 mL.单剂量、单剂量重复和超剂量安全试验结果显示,疫苗不引起产蛋鸭的全身不良反应和明显的局部反应.疫苗的免疫攻毒试验结果表明,疫苗在不同品种的成鸭中,使用不同的免疫途径,均能诱导产生80%以上保护;在雏鸭中,经二次免疫也能够诱导产生80%以上保护.疫苗一次免疫鸭后,不同时间诱导产生的中和抗体滴度(GMT)分别是,7 d为1:3.2、10 d为1:4.6、14 d为1:8,21 d、30 d和60 d均为1:7;免后10 d可以产生80%攻毒保护,14 d和21 d可产生完全保护.疫苗的免疫持续期试验结果表明,成鸭经1次免疫后150 d,雏鸭经二次免疫后60 d均可维持80%以上保护.     

1株鸭瘟病毒新分离株的毒力和抗原特性研究

将1株新分离的鸭瘟病毒(DPV)CY07株分别接种鸭胚和7日龄雏鸭,结果40%的胚24h内死亡,剩余胚24~48h内死亡;7日龄雏鸭48h发病3只(3/7),至120h共发病6只(6/7),死亡5只(5/7)。同时用标准株血清进行病毒中和试验,血清中和价为1∶19。对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭进行攻毒试验,证明能够抵抗鸭瘟病毒CY07株的攻击。表明DPVCY07株是1株毒力较强的病毒株,但抗原性没有明显变化。     

鸭瘟、鸭霍乱紧急防治措施研究

对鸭瘟、鸭霍乱紧急防治措施作了系列研究，结果表明：鸭瘟、鸭霍乱多价卵黄抗体对１００个ＬＤ５０鸭瘟强毒和８．３个Ｃ４８－１强毒菌的攻击具有１００％（８／８只）中和能力，对鸭瘟强毒（１００个ＬＤ５０）和Ｃ４８－１（８．３个）攻毒后５～６小时注射４倍稀释卵黄抗体２．０ｍｌ／只，具有１００％（６／６只）保护（口服有８３．３％保护）；分别以正常量和５倍量的鸭瘟弱毒苗免疫２月龄鸭，５～６小时后攻鸭瘟强毒，结果无一存活，鸭瘟弱毒苗和鸭瘟－禽霍乱二联活苗免疫后３天，对１００个ＬＤ５０鸭瘟强毒攻击获５０％（３／６）保护，７天获８３．３％（５／６）保护。Ａ群菌苗免疫后６天对Ｃ４８－１攻击获６６．７％（４／６只）保护，１２天获１００％保护。鸭瘟－禽霍乱二联活苗免疫后３天对Ｃ４８－１攻击获３３．３％（２／６）保护，７天获８３．３％保护；巴氏杆菌卵黄抗体和血清抗体能明显抑制巴氏杆菌生长并有溶菌现象出现；复方痢菌净、喹乙醇、庆大霉素、链霉素和四环素对多杀巴氏杆菌高度敏感（１７～４１ｍｍ）。     

应用ELISA检测鸭瘟抗体

应用ＥＬＩＳＡ间接法检测鸭瘟抗体,具有简单、快捷、特异的优点。小鸭免疫鸭瘟弱毒疫苗２周后抗体水平明显上升,４周达最高峰。用１０００个致死量鸭瘟强毒攻击,结果,抗体效价与免疫保护无明显的相关性。     

应用ELISA检测鸭瘟抗体

应用ＥＬＩＳＡ间接法测定鸭瘟抗体,具有简单,快捷,特异的优点,小鸭免疫鸭瘟弱毒疫苗２周后抗体水平明显上升,４周达最高峰,用１０００个致死量鸭瘟强毒攻击,抗体效价与免疫保护无明显的相关性。     

一株鸭瘟病毒(GM株)的分离与鉴定

针对山东潍坊地区鸭瘟零星发病现象,从潍坊采集具有典型症状病料,通过鸭胚接种,分离出一株病毒。通过分子生物学以及阳性血清定性中和试验鉴定为鸭瘟病毒(DPV),命名为鸭瘟病毒GM株。结果显示,该本病毒可适应鸭胚和鸡胚成纤维细胞;鸭胚ELD50为10-5.5/0.2 m L;该病毒无血凝活性,不能凝集1%鸡红细胞;本动物回归,使樱桃谷鸭在5~6 d死亡,成功复制出鸭瘟病毒;鸭瘟病毒GM株与鸭瘟病毒鸡胚化弱毒株(CVCC AV1222)疫苗的免疫攻毒试验表明,传统鸭瘟疫苗对该分离株具有保护力。初步确定该病毒为传统鸭瘟野毒。     

鸭瘟,鸭霍乱紧急防治措施研究

对鸭瘟，鸭霍乱紧急防治措施作了系列研究，结果表明：鸭瘟，鸭霍乱多价卵黄抗体对１００个ＬＤ５０鸭瘟强毒和８．３个Ｃ４８－１强毒菌的攻击具有１００％中和能力，对鸭瘟强毒和Ｃ４８－１攻毒扣５－６小时注射４倍稀释卵抗体２．０ｍｌ／只，具有１００％保护；分别以正常量和５倍量的鸭瘟弱毒苗免疫２月龄鸭，５－６小时后攻鸭瘟强毒，结果无一存活，鸭瘟轩和鸭瘟－禽霍乱二联活苗免疫后３天，对１００个ＬＤ５０鸭瘟强毒攻击获     

鸭瘟弱毒疫苗对雏鸭的饮水免疫试验

对1、5、10、15日龄含鸭瘟母源抗体雏鸭,用鸭瘟弱毒疫苗按1∶5(1个免疫量溶于5ml水中)进行饮水免疫。分别于免疫后30和60天,用鸭瘟强毒1000LD_(50)/ml攻击;90天时再与人工发病鸭混养。结果,均安全健活,保护率83～100％,与对照组相比,差异极显著(P<0.05)。作者提出,在有母源抗体存在的情况下,可采用饮水免疫方法进行鸭瘟弱毒苗的免疫,免疫期可达90天以上。     

鹅细小病毒VP3基因疫苗两种不同免疫方式对细胞免疫的影响

将构建的鹅细小病毒（GPV）VP3基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）转染鹅胚成纤维细胞（GEF），每隔12h检测VP3蛋白的表达情况，同时以不同剂量分别通过基因枪轰击和肌肉注射免疫28日龄健康雏鹅，于免疫后第3、7、14、21、28、35、49、63、77和105d采血，进行淋巴细胞增殖试验（MTT法）。结果，转染后第24h即可在GEF中检测到GPVVP3蛋白，第60h表达量达到高峰。试验组鹅外周血T淋巴细胞D490nm值在免疫后第35d达到最大。肌肉注射组和基因枪组免疫后第14～63d、第7～63d的D490nm值分别与PBS对照组差异板显著；肌肉注射组及基因枪组免疫后第21～49d的D490nm值显著高于弱毒疫苗对照组；肌肉注射组及基因枪组免疫后第14～63d的D490nm值板显著高于空质粒对照组。表明，基因枪轰击和肌肉注射pcDNA—GPV—VP3均能诱导雏鹅产生良好的细胞免疫应答。     

鸭瘟病毒对雛鸡病原性试验

鸭瘟强毒接种一日龄雏鸡能致死已有报导。黄引贤(1962)的报导称:鸭瘟病毒对一日龄雏鸡胸肌注射能使其感染并能继代通过。四川农学院廖德惠等(1980)进行对一日龄雏鸡的人工感染,试验结果,死亡为5/10。《Diseases of Poultry LeiPovltz》第七版报导鸭瘟强毒可以通过一日龄雏鸡并能连续继代后使二周龄的小鸡发病。至于鸭瘟弱毒是否对一日龄雏鸡有致病性的资料尚少,广东省农科院畜医系1965年     

增城县使用小鹅瘟鸭胚化GD弱毒疫苗的情况总结

1982年5月下旬,我们增城县科协和县畜牧兽医学会在三江公社联合举办小鹅瘟鸭胚化CD 弱毒疫苗预防小鹅瘟技术推广学习班后,全县共有派潭、朱村、宁西、永和等6个公社21群母鹅共2,785只,在产蛋前一个月,用佛山兽专研制的小鹅瘟鸭胚化 GD 弱毒疫苗,用灭菌生理盐水作10~(-2)稀释,每只母鹅肌肉注射1毫升。母鹅注射疫苗后未见不良反应,每年注射一次,对其生产性能亦无影响。我们曾调查了69个养鹅专业户所养的1,009只免疫母鹅后代,当养至30日龄时,成活986只,成活率为97.72％。广大社员普遍反映免疫母鹅的后代好养,能抵抗小鹅瘟。本县各