不同诱变方法对TL-15028菌株产泰乐菌素相关性能的影响

为了选育出泰乐菌素高产菌株,以弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)TL-15028菌株作为出发菌株,利用化学诱变、物理诱变以及复合诱变的方法对菌株进行诱变处理,比较不同诱变方法的诱变效果,通过诱变筛选出1株遗传稳定性好、且具有泰乐菌素和豆油抗性的菌株TLEU-1503,其发酵效价比出发菌株提高了36.5%,达到14124μg/m L,对泰乐菌素高效生产、品质提升具有重要意义。     

泰乐菌素高产菌株的推理选育

以弗氏链霉菌CK6-6为出发菌株,分别采用紫外(UV)、甲基磺酸乙酯(EMS)、紫外与氯化锂(LiCl)复合、甲基磺酸乙酯与紫外复合4种方法对其进行诱变。比较了4种方法的最大提高率、致死率、正变率及突变株的传代稳定性,结果发现诱变效果较好的为EMS与UV复合诱变,筛选出1株传代稳定菌株EU45-15,相对于出发菌株CK6-6,泰乐菌素产量的提高率为15.36%。经HPLC分析发现,它的最高活性组分A的含量高于对照,提高率为48.28%。同时利用豆油作为筛选物质对弗氏链霉菌进行定向筛选,筛选效果较好,筛出1株高产稳定菌株O3.6-8,效价提高率为12.15%。     

弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV工程菌的构建

为提高弗氏链霉菌对泰乐菌素的产素能力,构建了弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV基因工程菌。本研究以弗氏链霉菌作为出发菌株,并以其全基因组DNA为模板分别扩增tylF和tylE以及tylCV基因、以质粒pSET152为模板扩增强启动子基因permE,采用重叠延伸PCR技术和EcoRV、XbaI双酶切结合的连接方法,构建弗氏链霉菌表达载体pSET152-permE-tylF-tylE-tylCV,并转化至大肠杆菌ET12567,利用大肠-链霉菌属间接合转移技术获得工程菌株。研究结果表明,工程菌株摇瓶效价(14580 u/mL)比出发菌株(11318 u/mL)提高了29%;液相色谱结果显示,工程菌株的泰乐菌素A和泰乐菌素C相对峰面积显著(P≤0.05)高于出发菌株。增加弗氏链霉菌tylF、tylE和tylCV的拷贝数可有效提高泰乐菌素的产量,以及优化组分,为泰乐菌素生产菌的遗传改造提供参考。     

螺旋霉素高产菌株的选育

以螺旋霉素链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)SPM-14078菌株作为出发菌株,利用常压室温等离子体(ARTP)诱变、紫外线(UV)诱变和亚硝基胍(NTG)诱变的方法对菌株进行诱变处理,比较3种方法的诱变效果,通过诱变筛选出1株遗传稳定性好且具有Co~(2+)和豆油耐受性、噬菌体抗性的菌株SPMAR-1603,其发酵效价比出发菌株提高了294.9%,此结果对螺旋霉素高效生产、品质提升具有重要意义。     

猪喘气病的克星--爱乐新

爱乐新(Aivlosin)是由英国伊科动物保健公司生产的全新大环内酯类抗生素新药———酒石酸乙酰异戍酰基泰乐菌素的商品名称。该药现已在世界60多个国家注册销售。2003年该药首次在中国上市。防治猪喘气病的药物多沿用泰乐菌素或枝原净(泰妙菌素)。泰乐菌素也是大环内酯类药物,上市之初,其杀灭支原体的效果极好,但多年大量的应用使得支原体对泰乐菌素的抗药性增加了数十倍,甚至使泰乐菌素对某些抗性菌株失去了作用。枝原净是泰妙菌素的商品名称,属杂环类抗生素。经英国、日本、阿根廷、墨西哥等国的抑菌及临床试验,证实爱乐新对猪肺炎支原体…     

替米考星饮水剂治疗人工感染禽巴氏杆菌试验

替米考星是泰乐菌素的合成衍生物，具有其类似的分子结构和抗菌谱，但对某些病原菌的抗菌活性比泰乐菌素更高，如鸡支原体，巴氏杆菌等。替米考星由于具有非常高的抗菌活性，在鸡上作为饮水剂预防和治疗呼吸道感染疾病，具有使用剂量比泰乐菌素低得多的优势。近年来国内多家药厂已开始研制并生产出替米考星，     

多拉菌素的复合诱变及发酵条件优化

为通过诱变获得遗传性状稳定的多拉菌素高产菌株,对多拉菌素产生菌RDL19-1进行多种诱变处理包括常压室温等离子(ARTP)诱变,紫外(UV)诱变,及ARTP-UV复合诱变。该菌株接种瓶后于28 ℃摇床培养32 h,以10%的接种量转入装量为35 mL/300 mL 发酵瓶中,在28 ℃条件下发酵培养14 d,多拉菌素发酵产量达到了1390 μg/mL,相较于诱变前提高了4倍。通过对多拉菌素产生菌RDL19-1进行ARTP-UV复合诱变,获得了一株遗传性状稳定的高产菌株。     

高效、低毒、无残留的动物专用抗生素——泰乐菌素及其应用

泰乐菌素是由弗氏链霉菌产生的一种大环内酯类动物专用抗生素，主要有酒石酸泰乐菌素和磷酸泰乐菌素，具有抗菌谱广、临床应用范围广、促生长作用明显、毒副作用小、残留量低等特点。在兽医临床上，泰乐菌素对支原体有特效，是治疗畜禽支原体疾病的首选药物。在畜禽饲养业，泰乐菌素广泛应用于鸡、猪、牛的饲料中，能明显促进畜禽生长，提高生长速率，缩短饲养周期，提高饲料利用率和经济效益。1． 泰乐菌素的使用方法（图1） 2． 使用泰乐菌素的注意事项 1．配伍禁忌 泰乐菌素一般不与杆菌肽锌、北里霉素、维吉尼亚霉素、黄霉素、喹乙醇、…     

替米考星在预防和治疗几种呼吸道疾病中的优越性

<正>替米考星是泰乐菌素的合成衍生物,具有泰乐菌素类似的分子结构和抗菌谱,但其对病原菌引发的猪呼吸道疾病的抗菌活性比泰乐菌素更强。基于这一原理,     

环境中泰乐菌素残留及其与土壤微生物的互作效应研究进展

泰乐菌素是中国养殖业广泛使用的抗菌促生长类兽用抗生素之一,它进入畜禽体后,其原形和代谢产物会随畜禽粪尿进入环境,与环境微生物产生互作效应,由此本文首先介绍了环境介质中泰乐菌素残留现状,然后综述了泰乐菌素与土壤微生物的互作效应。目前畜禽生产中使用的泰乐菌素是泰乐菌素A、B、C和D的混合物,其中泰乐菌素A占80%以上,因此泰乐菌素A也是泰乐菌素在环境中残留的主要形式,但在不同环境条件下,泰乐菌素A可转化为泰乐菌素B、C和D,而且已有研究表明在畜禽粪便、污水、土壤及水体等环境介质中均检测到泰乐菌素A及其代谢产物的残留。土壤中残留的泰乐菌素可与微生物产生互作效应,即一方面泰乐菌素可影响土壤中微生物的数量、群落结构和功能;另一方面土壤微生物在受到泰乐菌素胁迫时会产生和传播耐药基因以及可降解泰乐菌素微生物等。笔者还对今后该领域的研究进行了展望。     

大环内酯类药物对木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜形成的影响

为了探究大环内酯类药物泰乐菌素和阿奇霉素对木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜形成的影响,试验首先通过倍比稀释法测定两种药物对木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株的最小抑菌浓度(MIC),然后利用结晶紫染色法考察木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜的形成能力,并测定细菌生长情况,最后考察两种药物浓度及药物孵育时间对生物被膜形成的影响。结果表明：木糖葡萄球菌耐药菌株生物被膜的形成能力弱于敏感菌株,木糖葡萄球菌敏感菌株与其耐药菌株的生长存在差异。0.312 5μg/mL的泰乐菌素和阿奇霉素对木糖葡萄球菌敏感菌株生物被膜的形成具有极显著抑制作用(P<0.01),对耐药菌株生物被膜形成的抑制作用不显著(P>0.05);25μg/mL的泰乐菌素和阿奇霉素对耐药菌株生物被膜的形成具有显著或极显著抑制作用(P<0.05或P<0.01)。随着药物孵育时间的延长,对生物被膜形成的抑制效果逐渐增强。说明大环内酯类药物泰乐菌素和阿奇霉素在一定程度上能抑制木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜的形成且具有时间依赖性。     

基于核糖体工程技术的泰乐菌素高产菌株选育研究

为了进一步提高泰乐菌素的产量满足生产需求。我们从生产实践中选出一株优良菌株T19-805，利用多次引入抗生素的核糖体工程育种技术，选用的7种抗生素中有4种抗生素（林可霉素、硫链丝菌素、链霉素与遗传霉素）对泰乐菌素产量有了大幅度提高。经过三轮抗性筛选获得一株含4重抗生素的高产突变株Tltsg-69，产量达到16507 μg/mL，将原始出发菌株T19-805（12000μg/mL）提高了37.6%，该菌株连续培养5代，其化学效价基本稳定，具有较好的遗传稳定性。结果表明，利用核糖体工程育种方法能有效地提高泰乐素产量。     

兽药泰乐菌素的生态毒理学研究进展

泰乐菌素是目前养殖业广泛使用的抗菌促生长类兽药之一,它进入畜禽体后,其原形和代谢产物会随畜禽粪尿进入环境,对环境生物造成影响。本文首先介绍了泰乐菌素在畜禽粪尿、土壤和水体等环境基质中的残留形式及残留量,其次总结了泰乐菌素在环境中的降解、吸附、迁移等行为,并且说明了泰乐菌素对环境微生物、水生生物、土壤动物及植物等的毒理学效应以及泰乐菌素抗药性的研究现状,最后对今后泰乐菌素的生态毒理学评价的研究方向进行了展望。该文可为合理评价泰乐菌素在环境中的生态毒学效应提供参考。     

鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定与药敏试验

无菌采集山西某地临床上疑似为鸡大肠杆菌病的6只病死鸡的心、肝、脾,进行细菌学检验,鉴定出6株鸡大肠杆菌。将分离菌株分别接种试验动物小白鼠,致死率达83.33%。药敏试验结果表明,6个菌株表现出相似的药物敏感性,对庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星敏感,对土霉素、双黄连、多西环素、板蓝根、泰乐菌素耐药。     

泰乐菌素注射剂稳定性试验

目前,国内外出售的泰乐菌素注射剂主要有2种：酒石酸泰乐菌素注射剂和泰乐菌素碱注射剂。经试验证实并推荐,仅使用泰乐菌素碱制作泰乐菌素注射剂方为稳定和合理。     

山羊传染性胸膜肺炎支原体和绵羊肺炎支原体对抗菌药物敏感性的研究

测定了环丙沙星、氧氟沙星、单诺沙星、红霉素、罗红霉素、泰乐菌素、泰妙菌素、四环素等8种药物对羊肺炎支原体两个标准株Y-98和Y-goat的体外抑菌浓度以及红霉素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y-goat和四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y-98的联合药敏作用.结果表明,这8种抗菌药物对Y-goat和Y-98的MIC(μg/mL)分别为:环丙沙星0.223、0.002 23,氧氟沙星0.281、0.014 0,单诺沙星0.136、0.014 0,红霉素0.021 8、无效,罗红霉素0.032 7、无效,泰乐菌素0.042 2、0.039 0,泰妙菌素0.021 7、0.052 0,四环素0.195、0.052 0.红霉素与氧氟沙星的联合药敏指数为1,是相加作用;红霉素与泰乐菌素对Y-goat的联合药敏指数为1.5,是无关作用;四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y-98的联合药敏试验指数均为0.375,是协同作用.     

替米考星及其他抗菌药对猪肺炎支原体的体外联合抑菌试验

采用2倍稀释法测定了替米考星等7种抗菌药对猪肺炎支原体济南系F64株的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度,再以棋盘法测定替米考星 土霉素、替米考星 金霉素、替米考星 多西环素、替米考星 甲氧苄啶、泰乐菌素 土霉素、泰乐菌素 多西环素共6种不同联合对猪肺炎支原体的敏感性。结果表明,7种抗菌药中替米考星与泰妙菌素对猪肺炎支原体的活性最强,MIC分别为0.056和0.075mg/L,其次是泰乐菌素、多西环素、土霉素、金霉素,MIC分别为0.0875、0.219、0.563、1.25mg/L,甲氧苄啶最弱,MIC为128mg/L。在6种不同联合对猪肺炎支原体的联合敏感性试验中,替米考星 土霉素、替米考星 甲氧苄啶2种联合表现出协同作用,替米考星及泰乐菌素与其他抗菌药联合均表现出相加作用,未出现无关作用或拮抗作用。     

替米考星防治猪呼吸道病的疗效总结

替米考星是泰乐菌素的衍生物，具有和泰乐菌素（农业部426号公告已列入废止目录．编者注）相似的分于结构和抗菌谱，但替米考星对猪呼吸道病的抗菌活性比泰乐菌素更强。基于这一原理，在兽医临床上，笔者采用替米考星预防和治疗猪气喘病、猪肺疫和传染性胸膜肺炎，效果显著。     

替米考星防治猪肺炎支原体猪肺疫猪胸膜肺炎效果观察

<正>替米考星是泰乐菌素的合成衍生物,具有泰乐菌素类似的分子结构和抗菌谱,但其对病原菌引发的猪呼吸道疾病的抗菌活性比泰乐菌素更强。基于这一原理,在临床上,我们用其预防和治疗猪肺炎支原体(喘气病)、猪巴氏杆菌病(猪肺疫)、猪传染性胸膜肺炎等呼吸道疾病,取得较好的效果。     

Ce（Ⅳ）-Na2SO3-H^＋化学发光法测定泰乐菌素含量

泰乐菌素属大环内酯类抗生素药物为广谱抗菌药,2002年发布的《农业部发布动物性食品中兽药残留最高限量》中有残留最高限量的明确规定,欧盟规定泰乐菌素禁止作饲料添加药物使用。目前,高效液相色谱法、紫外可见分光光度法、微生物浊度法、ELISA等分析法已被用于泰乐菌素的含量测定。近几年来,化学发光分析法以高灵敏度、仪器设备简单等优点在抗生素类药物的分析测定得到越来越广泛的应用。目前未见利用化学发光分析法测定泰乐菌素的报道。笔者等试验发现,酸性条件下,泰乐菌素对Ce（Ⅳ）-Na2SO3-H^＋微弱化学发光体系具有很强的增敏作用,根据这一现象,建立了用静态注射化学发光法测定泰乐菌素的新方法。