伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究

用纯化的伊氏锥 虫变异表面糖蛋白（ＶＳＧ）免疫大白鼠制备出抗血清，经饱和硫酸铵盐析，ＤＥ－５２纤维素离子交换层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ新和层析提取ＶＳＧ特异性多克隆ＬｇＧ抗体。用Ａｂ１免疫大白鼠和家兔制备出抗独特型血清。ＥＬＩＳＡ抑制试验检测结果表明，８份大白鼠抗独特型血清的抑制率高于２５％。用正常大白鼠ＩｇＧ致敏的醛化绵羊红细胞吸收兔抗独特型血清除去异种抗体，采用Ａｂ１－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究Ⅱ．伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗独特型抗体制备与检测

用纯化的伊氏锥虫变异表面糖蛋白（ＶＳＧ）免疫大白鼠制备出抗血清，经饱和硫酸铰盐析，ＤＥ－５２纤维素离子交换层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析提取ＶＳＧ特异性多克隆ＩｇＧ抗体（Ａｂｌ）。用Ａｂｌ免疫大白鼠和家兔制备出抗独特型血清。ＥＬＩＳＡ抑制试验检测结果表明，８份大白鼠抗独特型血清的抑制率高于２５％。用正常大白鼠ＩｇＧ致敏的醛化绵羊红细胞吸收兔抗独特型血清除去异种抗体，采用Ａｂｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，可从每毫升兔抗独特型血清中获得９７．４微克抗独特型抗体（Ａｂ２）。经ＥＬＩＳＡ抑制试验检测表明，提取的兔抗独特型抗体（Ａｂ２）对Ａｂｌ与ＶＳＧ的结合反应可产生明显的抑制效应，能识别Ａｂｌ的抗原结合部位，其配位的空间构型与ＶＳＧ表位具有相似性。     

绿脓杆菌外毒素A的纯化

用绿脓杆菌ＰＡ１０３株接种于ＴＳＡ甘油培养基３２℃培养，产生绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ），经流水透析除盐、ＤＥ－５２纤维素阶段洗脱、硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５除盐、ＤＥ－５２纤维素梯度洗脱、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析，纯化了绿脓杆菌外毒素Ａ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，纯化后的毒素为单一蛋白带，分子量约６６０００；对普通小鼠ＬＤ５０为０．２４μｇ蛋白。用ＰＥＡ抗血清作免疫印迹分析，进一步证实纯化的蛋白为ＰＥＡ，毒素约纯化了５００倍，总蛋白回收率约０．０２４％，毒素回收率约１１％。     

免瘟病毒的提取及结构蛋白鉴定

将已确诊为免瘟的送检病死兔，通过人工感染增殖，采取死亡兔的肝磨碎，并反复冻融后，分别经氯仿抽提、聚乙二醇（ＰＥＧ，ＭＷ６０００）沉淀浓缩、高速离心、ＤＥＡＥ５２离子交换层新析提取和纯化兔瘟病毒，通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析，结果只出现一条病毒结构蛋白带，证明用ＤＥＡＥ５２层析方法得到的病毒较纯。     

含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化

将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达７５％,在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化,获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４,纯度达９５．８％,得率为２４．５％。     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究：Ⅰ.伊氏锥虫变异表面糖蛋白的提…

采用ＤＥ－５２纤维素离子交换层析从实验感染大白鼠血液中提纯伊氏锥虫，－２０℃反复冻融，超声波裂解和超速离心制成可溶性抗原，经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０脱盐后进行ＤＥ－５２纤维素氯化钠梯度离子交换层析从中纯化变异表面糖蛋白。经鉴定是一种分子量为３０ＫＤ，富含碱性氨基酸的蛋白质，具有较高的纯度。免疫原性试验证实是伊氏锥虫广西骡株的保护性抗原。     

高纯度鸡IgA的制备与鉴定

本试验应用乙醇（ＰＥＧ）粗提后，ＤＥＡＥ纤维素离子交换，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ凝胶过滤层析方法，从鸡胆汁分离提取ＩｇＡ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明可达电泳纯。     

抗新城疫病毒糖蛋白单克隆抗体的研制及其特异性分析

应用纯化的新城疫病毒Ｆ４８Ｅ９株免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｐ骨髓瘤细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法检测筛选到４２株分泌抗ＨＤＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并对各株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类，血凝抑制效价，溶血抑制效应ＥＬＩＳＡ效价及中和效价加 测定，结合单克隆抗体的Ｗｅｓｔｅｒｂ ｂｌｏｔ反应结果出抗ＮＤＶ ＨＮ蛋白１１株，抗Ｆ蛋白２０株。     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究──EDS_（76）—NE_（4）株病毒的培养与鉴

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚（ＣＥ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＣＥＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１∶２０４８０─１∶３２７６８０倍。     

应用一步亲和层析法纯化转基因山羊乳腺定位表达的组织型纤维蛋 …

对转基因山羊乳腺定位表达的羊奶中组织型纤维蛋白溶酶原激活剂（ｔＰＡ）的分离纯化方法作了研究，摸索出一种简单可行的纯化方法。羊奶中ｔＰＡ先经冰乙酸和丙酮沉淀后，再通过Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ柱一步亲和层析，纯化倍数达６７１４．３倍，比活性１８８０００Ｕ／ｍｇ，活性回收率２６％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ还原电泳分析，ｔＰＡ纯度大于９５％，其中低分子双链蛋白占９０％以上；Ｗｅｓｔｅｒｎ－     

甲状腺激素受体βΔ的P-box氨基酸序列与转录激活作用关系的研究

研究新发现的甲状腺激素受体(TR)TRβΔ的P-box氨基酸序列能否结合甲状腺激素反应元件(TRE)后增强靶基因转录,揭示P-box序列的保守性与TRβΔ转录激活作用的关系,验证TRβΔ的功能性和活性。构建pcDNA3.1-TRβΔ真核表达载体质粒和含有回文序列TRE的pGL3-Promoter/TRE报告基因载体。突变TRβΔ的P-box氨基酸序列对应的DNA序列,分别构建pcDNA3.1-TRβΔmut1、pcDNA3.1-TRβΔmut2突变质粒。以上质粒分组瞬时共转染至COS-7细胞中,分别用含有T3和不含T3的培养基处理后,检测各组荧光素酶的活性。以上载体经PCR、双酶切和质粒测序证实均构建成功。与TRβ1相比,TRβΔ的P-box序列仅在最后一位不同,但基本保证了完整性。在加入T3后,TRβΔ正常与TRE结合,激活报告基因表达,荧光素酶活性显著增加(P0.01)。将P-box序列突变为与TRβ1一致的pcDNA3.1-TRβΔmut1,在T3调节下也能显著提高荧光素酶的表达(P0.01)。但完全破坏P-box序列的pcDNA3.1-TRβΔmut2与TRβΔ相比,其荧光素酶的表达显著降低(P0.01)。结果证明,TRβΔ只有通过完整保守的P-box氨基酸序列,在T3的调节下才能与TRE正常结合,产生转录激活作用。TRβΔ是有转录因子性质的功能性TR。     

Osteoclast progenitors from cats with and without tooth resorption respond differently to 1,25-dihydroxyvitamin D and interleukin-6

Both vitamin D and inflammatory cytokines can stimulate osteoclast formation and activity. We studied the effect of 1,25-dihydroxycholecalciferol (1,25(OH)(2)D), and interleukin-6 (IL-6), on the formation and activity of feline osteoclasts, using peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from cats with and without tooth resorption (TR(+) and TR(-)) as a source of osteoclast precursors. The formation of osteoclast-like cells (defined as multinucleated, tartrate-resistant acid phosphatase-positive cells) was assessed at 7 and 14 days. In the presence of M-CSF and RANKL, with and without IL-6, more osteoclasts were formed from TR(-) PBMCs than from TR(+) PBMCs on plastic. More osteoclasts were formed from TR(+) PBMCs on bone slices in the presence of M-CSF/RANKL with 1,25(OH)(2)D. This opposite effect may be due to a higher expression of the vitamin D receptor (VDR) in TR(+) osteoclasts and precursors on bone. Formation of resorption pits was analyzed and confirmed with scanning electron microscopy. In conclusion, we propose that TR(+) PBMCs when cultured on bone are sensitive to 1,25(OH)(2)D, whereas the differentiation of TR(-) PMBCs on bone seem more sensitive to IL-6, suggesting that osteoclast precursors from cats with and without tooth resorption respond differently to osteoclast stimulating factors.     

鸡免疫球蛋白G Fc(IgG Fc)片段的分离纯化及其抗血清的制备 Ⅱ.豚鼠抗鸡IgG Fc片段血清的制备

经硫酸铵盐析、DEAE 32-纤维素和Sephadex G 200柱色谱法分离得到纯化的鸡血清IgG。然后用木瓜蛋白酶水解IgG,再经DEAE 32-纤维素柱色谱纯化制得IgG Fc片段,并以IgG Fc片段免疫豚鼠制备豚鼠抗鸡IgG Fc血清。     

Tooth resorption and vitamin D3 status in cats fed premium dry diets

It has been suggested that tooth resorption (TR) in cats is associated with vitamin D3 status. The purpose of this study was to evaluate any correlation between serum 25-OH-D concentrations and the prevalence of TR. The healthy adult domestic cats (n=64) of this study had been fed similar premium dry-expanded foods throughout their lives. Serum 25-OH-D was measured, and cats received a single, complete periodontal examination, with periodontal probing of each tooth and exploration of the tooth surface using a dental explorer A complete set of 10 dental radiographs was taken for each cat. There were 168 TRs diagnosed in 40 of 64 cats (85 were Type 1 TR and 83 were Type 2). The mean serum 25-OH-D concentration was 187.7 +/- 87.3 nmol/L. The mean serum 25-OH-D in cats with one or more TR was 164.2 +/- 78.8 nmol/L, compared with 226.8 +/- 88.2 nmol/L for those without TR (p = 0.14). The mean serum 25-OH-D in the 13 cats with >5 TR was 131.2 +/- 49.5 nmol/L, which was significantly less than in cats with no TR (p < 0.05). There was no relationship between TR type and serum 25-OH-D. There was no effect of age or sex on serum 25-OH-D. On the contrary, variations in serum 25-OH-D were observed according to the studied breeds. There was no relationship between TR type and serum 25-OH-D. TR prevalence was greater in cats with lower serum 25-OH-D concentrations. In conclusion, the hypothesis that higher serum 25-OH-D concentrations are associated with a higher prevalence of TR is not supported by this study.     

人组织蛋白酶K在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定

在动物和人的骨代谢疾病中,组织蛋白酶K是木瓜蛋白酶家族中的一种半胱氨酸蛋白酶,是负责骨吸收过程中溶骨的主要关键酶,是新药物的分子作用靶点。通过毕赤酵母表达系统表达出重组组织蛋白酶K,进一步用离子交换和分子筛系统进行纯化得到高纯度有活性的重组组织蛋白酶K。运用FluStar荧光酶标仪测定390 nm(激发光)和460 nm(发射光)波长下荧光强度的变化并计算出组织蛋白酶K的酶活力为119.6 U,为进一步筛选骨质疏松等骨代谢疾病的新药提供参考。     

四种药物治疗人工感染鸡卡氏住白细胞虫病的试验

通过实验室人工攻虫治疗试验,比较验证血虫净、克球粉、泰灭净和痢特灵四种药物对鸡卡氏住白细胞虫病的治疗效果.结果,血虫净和泰灭净治疗效果最好,治愈率皆为100%,且血虫净不影响蛋鸡的产蛋,但泰灭净则影响产蛋,因此,泰灭净应慎用.用血虫净治疗临床上确诊为鸡卡氏住白细胞虫病的病鸡,跟踪观察,结果临床治愈率达99%以上,因此,血虫净是治疗该病的首选药.     

猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化

将猪链球菌2型(Streptococcus suis type2)江苏分离株HA9801接种于THB培养基中培养，得到含溶血素的培养液，其溶血价为128，再经50％饱和硫酸铵沉淀，脱盐，得到溶血素粗提物，溶血价为2048。粗提物用阴离子交换柱层析及凝胶过滤层析，所得活性峰收集液溶血价分别为4096、1024。通过以上三步的纯化，溶血素的比活提高200倍。纯化蛋白在SDS-PAGE中呈现一条带，达电泳级纯度。     

桑叶中抗凝血活性成分的初步分离与纯化

采用乙醇分级沉淀和Sephadex G100凝胶层析的方法,结合凝血指标检测,对桑叶中的抗凝血活性成分进行了分离纯化。结果表明:桑叶的抗凝血活性主要集中在桑叶的水提取液中,能够显著延长人体血浆的活化部分凝血活酶时间(APTT)值。桑叶水提取液经30%乙醇沉淀、凝胶层析和醋酸纤维素薄膜电泳表明其抗凝血活性成分是一种多糖组分。试验还表明,高浓度乙醇处理对桑叶多糖的抗凝血活性没有影响。     

兔出血症病毒提纯和多肽的比较研究

我们采用了甘油－酒石酸钿梯度离心、琼脂糖４Ｂ层析和ＤＥＡＥ３２离子交换层析等三种方法提纯兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）进行比较，其结果发现ＤＥＡＥ３２离子交换层析效果最好，获得的病毒纯度最高，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗ－Ｂｌｏｔ试验表明，ＲＨＤＶ只有一条蛋白多肽分子量为６１ＫＤ，截然不同于以往国内研究报道的ＲＨＤＶ具有３－６条结构多肽等结果，在国内属首次报道。