HSP27和HSP90在猫不同发育时期子宫的表达规律研究

为了探讨热休克蛋白(HSP) 27和HSP90在不同发育时期猫子宫中的表达情况,试验采用免疫组织化学技术分别检测HSP27和HSP90蛋白在5月龄、10月龄、1岁龄、1. 5岁龄、1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中的分布与表达情况。结果表明:HSP27在5月龄和10月龄猫子宫中不表达,在1岁龄、1. 5岁龄和1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中表达,不同强度阳性区域出现在腔上皮、腺上皮、固有层、血管内皮和子宫肌层中,妊娠期尿囊绒毛膜弱表达; HSP90在10月龄、1岁龄和1. 5岁龄子宫中未见表达,在5月龄和1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中表达,5月龄猫子宫腔上皮和腺上皮呈弱表达,1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫腔上皮呈强表达,浅层腺上皮中等表达,深层腺上皮和尿囊绒毛膜弱表达,在子宫固有层、肌层和血管内皮未见表达。说明HSP27和HSP90蛋白在猫不同发育时期子宫中的表达具有差异性,提示两种热休克蛋白参与子宫重塑过程中子宫细胞凋亡和细胞增殖等过程。     

Ube2s在小鼠卵泡发育和黄体形成过程中的表达研究

本研究旨在通过原位杂交、免疫组织化学和实时荧光定量PCR检测在小鼠性成熟、孕马血清促性腺激素(PMSG)诱导的卵泡发育、人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的排卵以及黄体形成过程中,卵巢组织中泛素结合酶E2 S(Ube2s)的表达变化。结果表明:在不同日龄小鼠卵巢中,Ube2s在原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞中表达强,在次级卵泡和有腔卵泡的卵母细胞中表达减弱;Ube2s在原始卵泡的颗粒细胞中有表达,在初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞中表达增强,在有腔卵泡的颗粒细胞表达减弱。给21日龄雌性小鼠注射PMSG诱导卵泡发育模型,并利用hCG诱导排卵模型,结果显示Ube2s的表达与不同日龄小鼠卵巢中Ube2s的表达规律一致,提示Ube2s可能与卵泡发育有关。在小鼠黄体形成与退化过程中,Ube2s在新生黄体中呈强表达,在退化黄体中表达减弱,提示Ube2s可能与黄体的形成与退化有关。综上,Ube2s可能在小鼠卵泡发育和黄体形成过程中发挥作用。     

BDNF和TrkB蛋白在5月龄和10月龄雌猫子宫和卵巢表达的研究

为探讨脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在幼龄和初情期猫子宫和卵巢的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF和TrkB在5月龄、10月龄雌猫子宫和卵巢上的表达差异。结果表明:BDNF和TrkB在原始卵泡和各级卵泡中均有表达,BDNF在窦状卵泡的颗粒细胞、膜细胞和卵母细胞中表达明显,10月龄蛋白表达强度强于5月龄,颗粒细胞的蛋白表达增强明显;TrkB表达部位与BDNF基本一致,但卵泡液和卵母细胞表面出现强表达,10月龄表达强度与5月龄基本一致。此外在猫卵巢发现含有多个卵母细胞的卵泡。BDNF在子宫内膜、腺体和小血管均有表达,10月龄子宫的蛋白表达强度高于5月龄,BDNF在10月龄子宫肌层有表达、5月龄无表达;TrkB在10月龄子宫内膜、腺体、肌层弱表达,小血管强表达,TrkB蛋白除了在5月龄子宫的小血管强表达外其他部位几乎无表达。     

二花脸猪卵巢卵泡形成与早期发育

为了研究二花脸猪卵泡的形成和发育特点,取胎儿期50、70和90(日龄)、新生1日龄及生后期20、70和120(日龄)7个阶段猪的卵巢组织样品进行组织学观察。结果表明,生殖细胞在早期卵巢中以卵母细胞巢状结构存在,原始卵泡最早出现在胎70日龄卵巢中,黄体出现在生后120日龄;以Stat3为生殖细胞的标记蛋白,进行免疫组织化学试验,统计出生前期各日龄阶段卵母细胞巢和卵泡的比例。结果表明,从胎70日龄到胎90日龄,卵母细胞巢状结构比例显著降低,单个卵泡比例显著增高,生后70日龄卵巢中出现有腔卵泡,未见黄体出现,生后120日龄卵巢中出现黄体;以PCNA作为细胞增殖的指标,进行卵巢组织的免疫组织化学定位,结果显示,在猪的卵泡形成和早期发育阶段以卵母细胞的快速增殖为主。说明二花脸猪的卵巢原始卵泡开始形成的时间在胎猪70日龄左右,初情期在生后70~120日龄,卵泡激活前以卵母细胞的生长为主。     

母猪性早熟卵巢的组织学及其PCNA和Caspase-3表达特性

为研究性早熟对母猪卵巢功能的影响,随机选取江苏某猪场同一批洋三元育肥断奶小母猪8头,在60日龄屠宰取卵巢和子宫,根据屠宰结果分成卵巢发育正常组和性早熟组,进行组织学观察和免疫组织化学分析。结果表明:60日龄卵巢发育正常组与性早熟组卵巢重差异极显著(P0.01),子宫重差异显著(P0.05)。通过HE染色观察,60日龄卵巢发育正常组以原始卵泡、初级卵泡为主兼少量次级卵泡,60日龄性早熟组卵巢出现多个三级卵泡,这些三级卵泡发育正常。免疫组化结果显示,增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-3在原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡颗粒细胞中都有广泛的表达。在性早熟组卵巢三级卵泡中,PCNA在颗粒细胞中较强表达而在闭锁卵泡中不表达。而Caspase-3表达不变但在闭锁卵泡中也不表达。结果提示:洋三元育肥断奶小母猪普遍存在卵巢过早发育现象,需进行有效管理。     

雷州黑鸭早期卵巢卵泡发育规律及减数分裂基因表达研究

为了揭示雷州黑鸭早期卵巢发育规律及开产期早的特性,试验采用H.E.染色法对雷州黑鸭0～120日龄卵巢组织形态学进行观察,并通过荧光定量PCR对0～28日龄卵巢组织中减数分裂相关基因Str8、Sycp3、Spo11、Dmc1的表达量进行测定分析。结果表明:雷州黑鸭0～28日龄卵巢发育与前人对鸡卵巢研究结果基本一致,但在雷州黑鸭21日龄时有卵泡闭锁现象,推测14～21日龄由初级卵泡向次级卵泡发育中存在卵泡选择过程。Sycp3、Dmc1和Spo11基因在0日龄表达量最高且在0～28日龄呈下降趋势;Str8基因表达呈现一个波动,在7日龄时表达量最高,推测该基因参与诱导原始卵泡的发育和启动初级卵泡的减数分裂。说明雷州黑鸭开产期早的原因可能是在14～21日龄的卵泡选择过程中使28日龄后的次级卵泡发育速度快于其他品种;此外,Str8可能通过调控原始卵泡和初级卵泡的分裂时间影响雷州黑鸭开产期。     

运输应激对山羊心的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90表达的影响

运用HE染色法、透射电镜技术、免疫组织化学、免疫印迹和ELISA等方法,探讨不同运输时间对山羊(Capra hircus)心的病理损伤及对热休克蛋白表达的影响,分析公路运输应激2、6 h条件下山羊心的显微结构、超微结构及HSP27、HSP70、HSP90的定位和表达量的变化情况。结果表明运输应激组山羊心肌纤维有程度不一的弥漫性颗粒变性,细胞内线粒体肿胀、破裂,间质水肿、出血、炎性细胞浸润,毛细血管扩张、充血,运输6 h组的病变更严重。HSP27、HSP70、HSP90主要在心肌细胞的细胞质中表达,HSP27和HSP90在细胞核中也有表达,三种蛋白在不同区域的心肌纤维和心肌细胞中分布不均。与对照组相比,运输应激2 h组山羊心HSP27蛋白表达量显著升高,运输应激6 h组HSP27表达量下降;与对照组相比,运输应激2和6 h组HSP70、HSP90蛋白表达量均显著或极显著升高。总之,运输应激山羊心组织细胞发生了病理损伤,心肌细胞急性变性十分明显,运输应激6 h组心肌细胞变性更严重,运输后HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达量发生了明显变化,与心的应激损伤存在一定的关联。     

猪卵巢发育的组织学特点及糖组织化学

运用组织学常规石蜡切片-HE染色和过碘酸-雪夫染色(PAS)方法,分别对3日龄及165日龄育成猪卵巢组织结构、各级卵泡的发育变化特点及其黏多糖分布情况进行了研究。结果显示,3日龄的猪卵巢皮质、髓质界限模糊,皮质部分由外向内依次分布着密集的卵原细胞和卵原细胞巢、共质体样的卵原细胞群,皮质深层与髓质相邻处分布着合胞体样的卵母细胞簇状结构和卵泡。育成猪卵巢中,皮、髓质界限明显,能观察到原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及近成熟卵泡,但是很少能见到黄体的结构。PAS染色结果表明,3日龄的猪卵巢中PAS阳性反应主要分布于卵原细胞周围的基质、卵原细胞巢和合胞体的外膜上,以及原始卵泡周围的基质、初级卵泡的卵泡膜及刚形成的透明带上,此外卵巢的白膜、髓质的结缔组织、血管壁及卵巢网周围也可见到广泛的阳性着色。育成猪卵巢中,PAS阳性反应主要分布于基质、生长卵泡的卵泡膜、卵泡的透明带、次级卵泡的卵泡液、黄体被膜及髓质的结缔组织和血管壁。     

不同生理阶段边鸡卵巢转录谱的构建及卵泡发育相关基因的分析

本研究通过分析不同生理阶段边鸡卵巢转录表达谱,旨在找出与卵泡发育相关的基因并进行验证,以揭示边鸡就巢性强的遗传机制.构建代表不同生理期即70日龄(70 d,卵巢发育期)、165日龄(165 d,开产期)、220日龄(220 d,产蛋高峰期)和330日龄(330 d,就巢期)的边鸡卵巢基因表达谱,用转录组表达定量(RSE...     

猪卵巢发育的组织学特点及糖组织化学

运用组织学常规石蜡切片-HE染色和过碘酸-雪夫染色（PAs）方法,分别对3日龄及165日龄育成猪卵巢组织结构、各级卵泡的发育变化特点及其黏多糖分布情况进行了研究。结果显示,3日龄的猪卵巢皮质、髓质界限模糊,皮质部分由外向内依次分布着密集的卵原细胞和卵原细胞巢、共质体样的卵原细胞群,皮质深层与髓质相邻处分布着合胞体样的卵母细胞簇状结构和卵泡。育成猪卵巢中,皮、髓质界限明显,能观察到原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及近成熟卵泡,但是很少能见到黄体的结构。PAS染色结果表明,3日龄的猪卵巢中PAS阳性反应主要分布于卵原细胞周围的基质、卵原细胞巢和合胞体的外膜上,以及原始卵泡周围的基质、初级卵泡的卵泡膜及刚形成的透明带上,此外卵巢的白膜、髓质的结缔组织、血管壁及卵巢网周围也可见到广泛的阳性着色。育成猪卵巢中,PAS阳性反应主要分布于基质、生长卵泡的卵泡膜、卵泡的透明带、次级卵泡的卵泡液、黄体被膜及髓质的结缔组织和血管壁。     

母犬出生后生殖器官发育的显微结构研究

为了研究母犬出生后生殖器官发育的组织学变化,试验采集了从初生至18月龄Beagle母犬的卵巢、输卵管和子宫,并采用石蜡切片、光学显微镜方法检查。结果表明:初生犬卵巢皮质部含有大量原始卵泡,且扁平卵泡细胞排列在卵母细胞周围,3月龄出现初级卵泡,6月龄出现次级卵泡,9月龄出现成熟卵泡和黄体。犬卵巢中有多卵卵泡,数量随年龄增长呈下降趋势。初生时,子宫腺体体积小、数量少,以后不断发育增生,腺体周围的基质也逐渐密集。初生至9月龄的输卵管黏膜仅有初级皱襞,12月龄后开始出现较多次级皱襞。     

运输应激对山羊血清和空肠中HSP27、HSP70和HSP90含量的影响

为探讨运输应激对山羊血清和空肠中HSP27、HSP70和HSP90 3种热休克蛋白含量的影响,试验选取12只赣西山羊,随机分为对照组、运输应激2 h组和运输应激6 h组,应用双抗体夹心ELISA法测定山羊血清和空肠中3种热休克蛋白浓度。结果表明:与对照组相比,运输2 h山羊血清中HSP70和HSP90极显著升高(P<0.01),空肠中HSP70和HSP90显著升高(P<0.05),血清和空肠中HSP27有升高趋势(P>0.05);与对照组相比,运输6 h后血清中HSP70和HSP90分别极显著和显著升高(P<0.05和P<0.01),血清中HSP27含量以及空肠中3种蛋白含量均无显著变化(P>0.05);与运输2 h相比,运输6 h后3种蛋白含量都极显著降低(P<0.01)。结果显示,山羊对运输应激在细胞水平的适应性调节与血清中HSP70和HSP90蛋白水平升高有密切联系,运输2 h山羊通过上调HSP70和HSP90对应激导致的空肠损伤发挥细胞保护作用。     

猪的繁殖障碍及防治措施

一、卵巢疾患1.卵泡发育障碍(卵巢机能不全)这种母猪断奶2周后仍不发情,子宫颈轻度肿胀和硬化。通过直检可区分为:(1)卵巢发育不全:卵巢小,无卵泡发育,不表现发情。(2)卵巢静止:卵巢有一定大小(2—3.5厘米),有的能看到1—2个卵泡,但无黄体存在。(3)卵巢蒌缩:卵巢小无弹性,既无卵泡也无黄体。上述卵泡发育障碍多因饲养管理不当所引起,因此,应当在妊娠后期和泌乳期给予适宜饲料,在断奶时不致减重或消瘦。离乳     

猪卵巢发育的组织学变化及卵泡闭锁规律研究

旨在对不同日龄猪卵巢组织结构以及卵巢发育过程中卵泡闭锁规律进行研究。取3、40、50、60、72、86、95及165日龄猪卵巢各3例,采用常规石蜡切片、HE染色和TUNEL技术检测卵巢组织结构及卵泡闭锁规律,结果表明,猪卵巢发育从组织学上可分为卵原细胞增殖期、卵泡缓慢生长期及卵泡快速生长期3个阶段。卵原细胞增殖期主要以卵原细胞的增殖分裂为特点;在卵泡缓慢生长期,原始卵泡的数量随日龄增加逐渐减少,初级卵泡数量及体积则明显增加;至卵泡快速生长期,生长卵泡的数量及体积继续增大,其数量在86日龄达到最大值;72日龄卵巢中出现三级卵泡,至95日龄卵巢中出现近成熟卵泡。在各时期的卵巢组织,均可观察到卵原细胞及卵泡的闭锁现象,以原始卵泡的退化最为显著。TUNEL检测表明,在卵原细胞增殖期,可见大量原始卵泡及初级卵泡的闭锁,其闭锁主要源自卵泡卵母细胞的凋亡。在卵泡缓慢生长期,各级生长卵泡均可出现闭锁,初级卵泡的闭锁主要由卵母细胞的凋亡引起,也有部分是同时伴有卵母细胞和卵泡细胞凋亡的;次级卵泡的闭锁则主要由于颗粒层细胞的凋亡所致。在卵泡快速生长期,随着卵泡的快速生长,各级卵泡的闭锁也变得更加明显,次级卵泡及三级卵泡的闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起。     

家蚕热激蛋白HSP90的鉴定、进化与表达模式

热激蛋白90是一类广泛分布与各类生物体中、高度保守的分子伴侣。HSP90s具有帮助受损蛋白的转运、折叠,防止聚集并恢复其正常构象等功能。昆虫HSP90s与生长发育、滞育和杀虫剂抗性等均相关。本研究在全基因组水平对家蚕HSP90s进行了鉴定,共分析获得3个基因(BGIBMGA004612、BGIBMGA012753和BGIBMGA001241)。根据系统发生分析,对家蚕HSP90s分别命名为Bm HSP90A1、Bm HSP90B1和Bm Trap1,它们分属于3个亚家族。家蚕与黑腹果蝇HSP90s直系同源基因的蛋白序列一致性均在60%以上。与其他物种HSP90s一样,家蚕HSP90s含有N-端ATPase结构域,4个特征性序列。基于组织和发育时期芯片及表达序列标签,发现家蚕HSP90s基因均有表达。基于芯片数据,Bm HSP90A1在雌雄间具有非常相似的表达模式,而Bm Trap1在5龄幼虫精巢中的信号值高达16 082.5,暗示着该基因可能与精巢发育相关。HSP90s作为一类功能广泛的分子伴侣,本研究将为其功能研究奠定基础。     

家蚕热激蛋白HSP90的鉴定、进化与表达模式

热激蛋白90是一类广泛分布与各类生物体中、高度保守的分子伴侣。HSP90s具有帮助受损蛋白的转运、折叠,防止聚集并恢复其正常构象等功能。昆虫HSP90s与生长发育、滞育和杀虫剂抗性等均相关。本研究在全基因组水平对家蚕HSP90s进行了鉴定,共分析获得3个基因(BGIBMGA004612、BGIBMGA012753和BGIBMGA001241)。根据系统发生分析,对家蚕HSP90s分别命名为Bm HSP90A1、Bm HSP90B1和Bm Trap1,它们分属于3个亚家族。家蚕与黑腹果蝇HSP90s直系同源基因的蛋白序列一致性均在60%以上。与其他物种HSP90s一样,家蚕HSP90s含有N-端ATPase结构域,4个特征性序列。基于组织和发育时期芯片及表达序列标签,发现家蚕HSP90s基因均有表达。基于芯片数据,Bm HSP90A1在雌雄间具有非常相似的表达模式,而Bm Trap1在5龄幼虫精巢中的信号值高达16 082.5,暗示着该基因可能与精巢发育相关。HSP90s作为一类功能广泛的分子伴侣,本研究将为其功能研究奠定基础。     

鸡马立克病肝组织肿瘤病变与热休克蛋白转录、表达的相关性研究

研究马立克病毒引发肿瘤的发生、发展过程中,热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)转录表达水平、组织细胞内定位与肝病理组织学损伤之间的相关性,为进一步阐述HSPs的生物学作用奠定基础。通过人工感染建立鸡MD肿瘤模型,定期剖杀试验鸡,采集肝组织,利用组织学、免疫组织化学、荧光定量RT-PCR及ELISA方法,检测肝病理组织学损伤、HSPs组织细胞内定位以及HSPs转录、表达水平的动态变化。结果:在MDV感染14d后,感染组鸡肝组织可见大小不等的淋巴样瘤细胞浸润和局灶性生长;HSP90、HSP60在淋巴瘤细胞的细胞质内强表达,而HSP27、HSP70主要分布于肿瘤细胞外的肝细胞的细胞质内;感染组HSP70和HSP90mRNA转录水平始终极显著高于空白对照组和疫苗免疫对照组;感染组HSP90的表达量始终极显著高于空白对照组,HSP70表达量在14和21日龄时,极显著高于空白对照组,在28和35日龄时显著高于空白对照组,42日龄后与空白对照组和疫苗免疫对照组相比差异不显著。在MDV引发鸡肿瘤发生、发展过程中,HSP60、HSP90与HSP70、HSP27之间在肝组织细胞内定位截然不同,且HSP70与HSP90在肝组织内表达量变化趋势差异明显,说明不同HSPs在MD肿瘤发生、发展过程中的生物学作用存在差异。     

母猪的生殖生理因素

1母猪的性发育与繁殖生理 1.1生殖器官发育 1.1.1卵巢发育 主要在胚胎期进行,从胚胎的50 d正式开始到出生后1月龄左右(断奶).这样的卵母细胞和原始卵泡细胞发育是不需要类固醇激素的激活的. 1.1.2卵泡、子宫、生殖道发育 主要在出生后70- 140日龄,这时需要雌激素激活. 1.2繁殖生理过程的激素调控 1.2.1发情 当卵巢大量卵泡发育成熟时,这些卵泡的雌二醇分泌增加,延长了下丘脑促性腺激素释激素的释放,GnRH促进卵巢促黄体素的分泌;在此过程中,雌二醇同时促进发情行为和生殖器官形态改变,即有了发情的外观特征,以静立反射为发情是否开始的识别.     

不同水平玉米赤霉烯酮对断奶仔猪卵巢发育的影响

为了研究不同水平玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对断奶仔猪卵巢发育的影响,选择40头健康三元杂交(杜×长×大)断奶雌性仔猪,体质量(14.01±0.86)kg,随机分为4组,每组10头。对照组饲喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮基础上添加0.5(ZEA0.5)、1.0(ZEA1.0)和1.5(ZEA1.5)mg/kg的ZEA。预试期10d,正试期35d。组织学观察发现,添加ZEA后仔猪卵巢组织结构发生改变,各处理组原始卵泡明显减少,生长卵泡明显增多,ZEA1.5组生长卵泡多发生闭锁。免疫组化、RT-PCR和Western blot检测结果显示,添加不同水平ZEA后卵巢中PCNA、Bax及Bcl-2表达出现明显的异常;PCNA和Bax表达量显著上调,且ZEA1.0组高于ZEA0.5组,其次是ZEA1.5组;而Bcl-2的表达量呈剂量依赖性减少,ZEA1.0和1.5组与对照组相比差异极显著(P0.01)。结果表明:饲粮添加0.5～1.5mg/kg ZEA可引起断奶仔猪卵巢的卵泡提前发育甚至闭锁,主要途径是诱导PCNA、Bcl-2及Bax基因异常表达,引起卵巢卵泡异常发育。     

断奶日龄对仔猪肾脏热休克蛋白基因表达的影响

为研究不同断奶日龄对仔猪肾脏热休克蛋白70(HSP70 mRNA)、热休克蛋白90(HSP90 mRNA)和热休克蛋白27(HSP27 mRNA)基因表达的影响,将24头体重相近的健康的杜长大仔猪按断奶日龄随机分为4组,依次于14日龄、21日龄、28日龄和35日龄断奶,所有试验仔猪于42日龄处死,取样,通过RT-PCR方法检测肾脏中上述三种热休克蛋白基因的相对表达水平。结果表明:14日龄和21日龄断奶组仔猪肾脏HSP70 mRNA的相对表达量显著高于35日龄断奶组(P0.05);14,21日龄断奶组HSP90 mRNA相对表达量显著高于28日龄和35日龄断奶组(P0.05),21日龄断奶组显著低于14日龄断奶组(P0.05);35日龄断奶组HSP27 mRNA相对表达量低于其他日龄断奶组,但差异不显著(P0.05)。说明断奶日龄显著影响仔猪肾脏热休克蛋白mRNA的表达,且随着断奶日龄的推迟肾脏中的HSPs mRNA的相对表达量呈下降趋势。