猪卵巢发育的组织学变化及卵泡闭锁规律研究

旨在对不同日龄猪卵巢组织结构以及卵巢发育过程中卵泡闭锁规律进行研究。取3、40、50、60、72、86、95及165日龄猪卵巢各3例,采用常规石蜡切片、HE染色和TUNEL技术检测卵巢组织结构及卵泡闭锁规律,结果表明,猪卵巢发育从组织学上可分为卵原细胞增殖期、卵泡缓慢生长期及卵泡快速生长期3个阶段。卵原细胞增殖期主要以卵原细胞的增殖分裂为特点;在卵泡缓慢生长期,原始卵泡的数量随日龄增加逐渐减少,初级卵泡数量及体积则明显增加;至卵泡快速生长期,生长卵泡的数量及体积继续增大,其数量在86日龄达到最大值;72日龄卵巢中出现三级卵泡,至95日龄卵巢中出现近成熟卵泡。在各时期的卵巢组织,均可观察到卵原细胞及卵泡的闭锁现象,以原始卵泡的退化最为显著。TUNEL检测表明,在卵原细胞增殖期,可见大量原始卵泡及初级卵泡的闭锁,其闭锁主要源自卵泡卵母细胞的凋亡。在卵泡缓慢生长期,各级生长卵泡均可出现闭锁,初级卵泡的闭锁主要由卵母细胞的凋亡引起,也有部分是同时伴有卵母细胞和卵泡细胞凋亡的;次级卵泡的闭锁则主要由于颗粒层细胞的凋亡所致。在卵泡快速生长期,随着卵泡的快速生长,各级卵泡的闭锁也变得更加明显,次级卵泡及三级卵泡的闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起。     

雷州黑鸭早期卵巢卵泡发育规律及减数分裂基因表达研究

为了揭示雷州黑鸭早期卵巢发育规律及开产期早的特性,试验采用H.E.染色法对雷州黑鸭0～120日龄卵巢组织形态学进行观察,并通过荧光定量PCR对0～28日龄卵巢组织中减数分裂相关基因Str8、Sycp3、Spo11、Dmc1的表达量进行测定分析。结果表明:雷州黑鸭0～28日龄卵巢发育与前人对鸡卵巢研究结果基本一致,但在雷州黑鸭21日龄时有卵泡闭锁现象,推测14～21日龄由初级卵泡向次级卵泡发育中存在卵泡选择过程。Sycp3、Dmc1和Spo11基因在0日龄表达量最高且在0～28日龄呈下降趋势;Str8基因表达呈现一个波动,在7日龄时表达量最高,推测该基因参与诱导原始卵泡的发育和启动初级卵泡的减数分裂。说明雷州黑鸭开产期早的原因可能是在14～21日龄的卵泡选择过程中使28日龄后的次级卵泡发育速度快于其他品种;此外,Str8可能通过调控原始卵泡和初级卵泡的分裂时间影响雷州黑鸭开产期。     

Ube2s在小鼠卵泡发育和黄体形成过程中的表达研究

本研究旨在通过原位杂交、免疫组织化学和实时荧光定量PCR检测在小鼠性成熟、孕马血清促性腺激素(PMSG)诱导的卵泡发育、人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的排卵以及黄体形成过程中,卵巢组织中泛素结合酶E2 S(Ube2s)的表达变化。结果表明:在不同日龄小鼠卵巢中,Ube2s在原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞中表达强,在次级卵泡和有腔卵泡的卵母细胞中表达减弱;Ube2s在原始卵泡的颗粒细胞中有表达,在初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞中表达增强,在有腔卵泡的颗粒细胞表达减弱。给21日龄雌性小鼠注射PMSG诱导卵泡发育模型,并利用hCG诱导排卵模型,结果显示Ube2s的表达与不同日龄小鼠卵巢中Ube2s的表达规律一致,提示Ube2s可能与卵泡发育有关。在小鼠黄体形成与退化过程中,Ube2s在新生黄体中呈强表达,在退化黄体中表达减弱,提示Ube2s可能与黄体的形成与退化有关。综上,Ube2s可能在小鼠卵泡发育和黄体形成过程中发挥作用。     

猪卵巢颗粒细胞和黄体细胞凋亡的调控机制研究进展

母猪卵巢皮质上存在大量卵泡，卵泡由原始卵泡向初级卵泡、次级卵泡逐步发育为排卵前的成熟卵泡时，伴随着卵泡闭锁的发生。目前认为颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的主要因素，并且已经证实。卵泡成熟后会破裂排卵，如果卵子未受精，则黄体会发生萎缩并退化，形成称作白体的结缔组织，最终被组织吸收。细胞凋亡受到多基因严格控制，随着分子生物学技术的发展，已经证明存在多个信号通路。本文以猪卵巢为模型，综述了卵泡闭锁期间颗粒细胞凋亡和黄体退化过程中黄体细胞凋亡的调控机制，以期为深入研究卵巢细胞凋亡提供理论基础。     

FOXL2基因与蛋鸡卵巢发育的相关性研究

试验采集120、160、220、330、480日龄海兰褐蛋鸡的卵巢,通过石蜡切片观察卵泡发育情况,采用荧光定量PCR检测FOXL2基因在卵巢的表达情况。结果显示:120~480日龄,卵巢重量呈现先增加后减少的趋势,220日龄达到最大;卵巢的初级卵泡数逐渐减少,而次级卵泡数先增加后减少,160日龄次级卵泡数最多;蛋鸡卵泡萎缩率增加,闭锁卵泡数逐渐增多;FOXL2基因的m RNA水平在120~480日龄呈下降趋势,暗示其可能与蛋鸡卵巢和卵泡的发育存在相关性。     

柠檬酸对小鼠卵泡组织形态的影响

通过观察小鼠卵泡形态结构的变化,研究柠檬酸对雌性小鼠卵泡发育的影响。将60只20~22g昆明小鼠随机分为生理盐水对照组和柠檬酸低、中、高剂量处理组,各组小鼠每天每只依次分别腹腔注射0.2mL的0.9%生理盐水、7.5mg/mL、15mg/mL及30mg/mL的柠檬酸。第21天在乙醚麻醉条件下,每组随机取10只小鼠断颈处死,摘取卵巢浸泡于4%的甲醛溶液中固定24h,制作常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜进行组织切片观察。结果表明:对照组小鼠各级卵泡的形态正常,7.5mg/mL、15mg/mL柠檬酸处理组可观察到正常形态的原始卵泡、初级卵泡,30 mg/mL柠檬酸处理组因原始卵泡、初级卵泡退化,使原始卵泡、初级卵泡的数量显著减少;15mg/mL柠檬酸处理组主要使次级卵泡发育受阻,某些小的有腔卵泡部分颗粒细胞凋亡,卵泡膜细胞分化障碍,大的有腔卵泡的卵母细胞和卵泡内膜细胞退化,以及卵泡膜层血管数量减少或消失;30mg/mL柠檬酸处理组卵母细胞发育周期阻滞或退化、消失,导致原始卵泡和初级卵泡数量显著减少,以及次级卵泡、有腔卵泡的闭锁。结果提示:低、中剂量的柠檬酸对原始卵泡、初级卵泡的发育无影响;中剂量柠檬酸使次级卵泡发育受阻,有腔卵泡退化;高剂量柠檬酸对各级卵泡的发育均有显著影响,造成卵泡的闭锁。     

猪人工授精和繁殖疾患的防治(续一)

第二讲母猪的生殖生理第一节母猪的内生殖器官母猪的生殖器官主要有内生殖器官(卵巢和生殖道—输卵管、子宫和阴道)和外生殖器官(包括尿生殖前庭、阴唇、阴蒂),还有副性腺体(位于子宫颈以及阴道的一些腺体)共同构成母猪的生殖器官。一、卵巢在卵巢表面皮质部有一层生殖上皮,其中发育着卵泡。卵泡由原始卵泡开始经初级卵泡发育为次级卵泡,再继续发育形成卵泡细胞,再和卵丘上的卵泡壁相连,发育为三级卵泡,最后发育为成熟卵泡。发情期卵泡体积增大,卵泡中通常只有一个卵母细胞。未成熟的卵泡退化为闭锁卵泡。发情前夕,卵泡不断增长,卵泡液增多,…     

玉米赤霉烯酮对断奶小母猪卵巢指数及孕激素受体分布和表达的影响

本试验旨在研究不同水平玉米赤霉烯酮(ZEA)污染饲粮对断奶小母猪卵巢指数及孕激素受体的阳性分布和mRNA相对表达量的影响。选择40头35~38日龄健康三元杂交(杜×长×大)断奶小母猪,按平均体重[(14.01±0.86)kg]随机分为4个组,采用单笼饲养。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.5、1.0和1.5 mg/kg的ZEA,4个组ZEA的测定值分别为0、(0.52±0.07)mg/kg、(1.04±0.03)mg/kg和(1.51±0.13)mg/kg。试验期35 d。结果表明:随着饲粮ZEA水平的升高,断奶小母猪卵巢指数呈一次线性升高(P0.01);1.0 mg/kg ZEA组的卵巢指数显著高于1.5 mg/kg ZEA组(P0.05),1.5 mg/kg ZEA组的卵巢指数显著高于0.5 mg/kg ZEA组和对照组(P0.05)。随着饲粮ZEA水平的升高,断奶小母猪卵巢孕激素受体累积光密度(IOD)和mRNA相对表达量均呈一次线性升高(P0.01);1.5 mg/kg ZEA组的孕激素受体IOD和mRNA相对表达量显著高于1.0 mg/kg ZEA组(P0.05),1.0 mg/kg ZEA组又显著高于0.5 mg/kg ZEA组和对照组(P0.05)。免疫组化结果显示断奶小母猪卵巢中孕激素受体免疫阳性物质主要分布于原始卵泡和生长卵泡的卵母细胞及颗粒细胞、卵泡膜细胞及血管壁细胞。随着饲粮ZEA水平的升高和卵泡闭锁程度的增加,免疫阳性反应明显增强,但卵巢内孕激素受体免疫阳性物质的分布位置没有因ZEA的水平发生明显改变。由此可见,ZEA(1.0~1.5 mg/kg)可以通过调控断奶小母猪卵巢中孕激素受体的高水平表达,使孕激素受体的水平超出正向调节卵泡生长的限值,从而促使卵泡闭锁,降低卵巢指数,改变卵巢发育,进而影响断奶小母猪生殖系统的健康。     

鸭异体卵巢移植后生殖激素水平变化及卵泡颗粒细胞凋亡的研究

选取健康麻鸭进行同种异体卵巢移植，移植后测定45日龄、75日龄、105日龄、开产日龄、开产后30日龄和开产后60日龄时血浆促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌二醇㈤水平；并且在产蛋期内不同的时间获取各个级别卵泡的颗粒细胞，检测其凋亡率。结果显示，移植后FSH、LH、E2的分泌均高于对照组，在开产30日龄时差异显著，表明移植成功并且卵巢发育良好，卵巢功能正常；移植后各级卵巢颗粒细胞凋亡率显著低于对照组，并且随着卵泡直径的增加，颗粒细胞的凋亡率呈现下降的趋势，表明卵巢移植可以降低卵泡颗粒细胞凋亡率。结论：同种异体卵巢移植卵巢发育良好，具用正常的分泌功能，可以降低卵泡颗粒细胞的凋亡率。     

水牛腔前卵泡的分布及形态学研究

用常规石蜡切片法研究水牛卵泡在卵巢中的分布规律与结构特征。结果表明各级卵泡的分布具有明显的区域性;原始卵泡位于卵巢皮质的最外层,形成原始卵泡层,初级卵泡位于皮质的中层,次级卵泡位于富含血管的皮质最内层;原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡的直径分别为(36.9±7.7)μm、(48.7±8.9)μm和(91.9±27.3)μm,与之对应卵母细胞的直径分别为(19.6±6.0)μm、(27.3±7.1)μm和(49.1±17.4)μm;原始卵泡和初级卵泡的颗粒细胞数为(10.8±2.3)个和(18.1±3.1)个;次级卵泡含有2~6层颗粒细胞,2~4层的颗粒细胞分布不均。     

不同水平玉米赤霉烯酮对断奶仔猪卵巢发育的影响

为了研究不同水平玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对断奶仔猪卵巢发育的影响,选择40头健康三元杂交(杜×长×大)断奶雌性仔猪,体质量(14.01±0.86)kg,随机分为4组,每组10头。对照组饲喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮基础上添加0.5(ZEA0.5)、1.0(ZEA1.0)和1.5(ZEA1.5)mg/kg的ZEA。预试期10d,正试期35d。组织学观察发现,添加ZEA后仔猪卵巢组织结构发生改变,各处理组原始卵泡明显减少,生长卵泡明显增多,ZEA1.5组生长卵泡多发生闭锁。免疫组化、RT-PCR和Western blot检测结果显示,添加不同水平ZEA后卵巢中PCNA、Bax及Bcl-2表达出现明显的异常;PCNA和Bax表达量显著上调,且ZEA1.0组高于ZEA0.5组,其次是ZEA1.5组;而Bcl-2的表达量呈剂量依赖性减少,ZEA1.0和1.5组与对照组相比差异极显著(P0.01)。结果表明:饲粮添加0.5～1.5mg/kg ZEA可引起断奶仔猪卵巢的卵泡提前发育甚至闭锁,主要途径是诱导PCNA、Bcl-2及Bax基因异常表达,引起卵巢卵泡异常发育。     

休情期银黑狐卵巢形态和卵泡发育的显微结构观察

研究休情期银黑狐卵巢形态和卵泡的显微结构,以揭示银黑狐卵巢发育的一般规律。本试验于2012年12月份采集5只健康一岁龄银黑狐卵巢10枚,用游标卡尺测量其长、宽、厚,用电子天平测量其重量,并对其表面可见卵泡数量进行统计,然后利用光学显微镜对各级卵泡分别观察1~3个,共计原始卵泡30个,初级卵泡20个,次级卵泡15个,三级卵泡12个,成熟卵泡10个,并进行拍照。结果表明:随银黑狐卵巢体积不断增大,其中80%的卵巢重量也随之增大;可见卵泡数量与卵巢体积及重量没有相关性;卵巢由被膜、皮质和髓质构成,髓质位于卵巢内层,分布着较多血管,皮质位于卵巢外层,内有不同发育阶段的卵泡;原始卵泡由卵母细胞和颗粒细胞构成,初级卵泡开始出现透明带物质,到次级卵泡阶段发育完整,三级卵泡出现卵泡腔,卵泡及卵母细胞直径在有腔卵泡阶段比腔前卵泡阶段增长速度快,成熟卵泡的直径及透明带厚度达到最大,各级卵泡均有闭锁现象。     

不同日龄北京黑猪卵巢发育的研究

对30～180日龄北京黑猪母猪卵巢形态学和组织学的研究结果表明,在60日龄以前卵巢体积缓慢增长,60日龄以后直到120日龄迅速增长,150～180日龄之间增长速度减慢。90日龄卵巢切片上,首先观察到有腔卵泡。卵泡总数随日龄增加而减少,闭锁率增高。一半180日龄母猪卵巢上有成熟黄体。根据实验结果,提出北京黑猪母猪初情期在170日龄左右。     

母犬出生后生殖器官发育的显微结构研究

为了研究母犬出生后生殖器官发育的组织学变化,试验采集了从初生至18月龄Beagle母犬的卵巢、输卵管和子宫,并采用石蜡切片、光学显微镜方法检查。结果表明:初生犬卵巢皮质部含有大量原始卵泡,且扁平卵泡细胞排列在卵母细胞周围,3月龄出现初级卵泡,6月龄出现次级卵泡,9月龄出现成熟卵泡和黄体。犬卵巢中有多卵卵泡,数量随年龄增长呈下降趋势。初生时,子宫腺体体积小、数量少,以后不断发育增生,腺体周围的基质也逐渐密集。初生至9月龄的输卵管黏膜仅有初级皱襞,12月龄后开始出现较多次级皱襞。     

东北梅花鹿卵泡发育的显微结构

为揭示雌性东北梅花鹿的生殖机理提供组织依据,利用光学显微镜观察7只成年东北梅花鹿卵巢的组织结构和卵泡的发育过程,同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对60个原始卵泡、60个初级卵泡、25个次级卵泡、34个三级卵泡和3个成熟卵泡及透明带厚度进行测量和拍照。结果表明,东北梅花鹿卵巢组织也是由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成;皮质部在卵巢的外周,但间质腺不发达;髓质位于皮质深层,分布有较多的血管。卵泡在发育过程中,各级卵母细胞和卵泡的直径差异较大,卵泡和卵母细胞的生长呈双向生长;透明带物质出现于3~4层卵泡细胞包围卵母细胞时;卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期,主要表现为卵母细胞和卵泡细胞的形态变化,有两种形式;三级卵泡的闭锁过程分为早期、中期和后期3个阶段。     

玉米赤霉烯酮和雌二醇对断奶仔猪生长性能、养分利用率和卵巢形态的影响

本试验旨在研究玉米赤霉烯酮(ZEA)和雌二醇(E2)对断奶仔猪生长性能、养分利用率和卵巢形态的影响。选取28～32日龄、体重为(13.57±0.41) kg的"杜×长×大"断奶小母猪30头,随机分为3组,每组10头。对照组饲喂基础饲粮,ZEA组在基础饲粮中添加1.0 mg/kg的ZEA,E2组每隔3 d肌肉注射苯甲酸雌二醇0.75 mL(相当于1.5 mg/头E2)。试验预试期7 d,正试期35 d。结果表明:1)与对照组相比,ZEA组和E2组断奶仔猪生长性能均无显著差异(P0.05)。2)与对照组相比,ZEA组和E2组断奶仔猪蛋白质表观代谢率(蛋白质生物学价值和净蛋白质利用率)、血清碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性及卵巢指数均显著提高(P0.05),ZEA和E2刺激卵巢皮质内卵泡发育并可见闭锁卵泡。3)与ZEA组相比,E2组断奶仔猪粗脂肪表观消化率、蛋白质表观代谢率和血清LDH活性显著提高(P0.05),卵巢指数则显著降低(P0.05),E2刺激卵巢皮质内出现大量闭锁的初级卵泡。由此可见,本试验条件下,ZEA和E2均能提高断奶仔猪对蛋白质的利用效率,扰乱血清酶活性,促进卵巢发育并诱导卵泡发生闭锁。     

HSP90、HSP70、HSP27在不同发育时期猫卵巢的表达规律研究

为了探究HSP90、HSP70、HSP27在不同发育时期猫卵巢的表达规律,试验运用免疫组织化学方法检测了5月龄、10月龄、1岁龄、1.5岁龄(未妊娠)和1.5岁龄(妊娠20 d)猫卵巢的HSP90、HSP70、HSP27蛋白表达情况。结果表明:HSP90在5月龄猫卵巢上为强表达,在10月龄猫成熟卵泡、1岁龄猫初级卵泡、1.5岁龄(未妊娠)猫初级卵泡、1.5岁龄(妊娠20 d)猫黄体与原始卵泡、初级卵泡上弱表达,在1岁龄猫原始卵泡表达较强;HSP70在5月龄、10月龄、1岁龄猫的卵巢各级卵泡和1.5岁龄猫的黄体强表达;HSP27在10月龄猫卵巢中未见表达,在5月龄猫卵巢中各级卵泡呈弱表达,在1岁龄、1.5岁龄(未妊娠)、1.5岁龄(妊娠20 d)猫卵巢中强表达。说明HSP90、HSP70、HSP27在猫卵巢不同发育时期都有不同程度的表达,提示其在卵巢卵泡发育、卵母细胞成熟、黄体形成和退化等过程发挥重要作用。     

兔超数排卵效果及早期胚胎体外发育的研究

实验分30、40、50和60 IU PMSG和150 IU hCG 4组超数排卵处理,对卵巢进行组织学观察,获得胚胎进行体外培养,研究其发育形态学变化。结果表明:注射30 IU PMSG超排效果较好,平均回收卵(18.4±11.1)枚,回收率89.7%;4种剂量显著(P<0.05)影响充血卵泡中颗粒细胞层数和直径,对原始卵泡没有显著影响(P>0.05),对次级卵泡的颗粒细胞层厚、颗粒细胞层数和颗粒细胞直径有极影响显著(P<0.01);30 IU组初级卵泡中颗粒细胞直径显著(P<0.05)小于40 IU和60 IU组;实验所采用的培养体系可以使胚胎正常发育至孵化囊胚,胚胎发育速度与在体内相近,受精后62～74 h开始进入囊胚期,受精后86～98 h囊胚开始孵化,15 h所有存活胚胎全部进入孵化胚阶段,囊胚发育率85.4%,孵化率70.7%。     

骨形态发生蛋白基因mRNA在牛卵巢组织中的表达研究

骨形态发生蛋白(BMP15)基因主要在哺乳动物卵巢中表达,对卵泡的发育和分化起重要作用.研究根据其他物种BMP15基因的保守序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术,从牛卵巢中提取总RNA,扩增出BMP15 cDNA序列;将此片段克隆到pGM-T载体中,经PCR鉴定和DNA序列测定分析验证,符合BMP家族基因结构特征,然后根据此序列构建cRNA探针,利用原位杂交技术检测牛卵巢BMP15基因 mRNA的表达情况.原位杂交结果显示,牛BMP15基因,在初级卵泡和次级卵泡早期表达,在初级和次级卵泡的颗粒细胞中也表达,在次级卵泡晚期也有表达,同时BMP15基因在透明带周围表达,这可能是透明带周围细胞中的BMP15基因渗透到透明带中.     

猪卵巢发育的组织学特点及糖组织化学

运用组织学常规石蜡切片-HE染色和过碘酸-雪夫染色(PAS)方法,分别对3日龄及165日龄育成猪卵巢组织结构、各级卵泡的发育变化特点及其黏多糖分布情况进行了研究。结果显示,3日龄的猪卵巢皮质、髓质界限模糊,皮质部分由外向内依次分布着密集的卵原细胞和卵原细胞巢、共质体样的卵原细胞群,皮质深层与髓质相邻处分布着合胞体样的卵母细胞簇状结构和卵泡。育成猪卵巢中,皮、髓质界限明显,能观察到原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及近成熟卵泡,但是很少能见到黄体的结构。PAS染色结果表明,3日龄的猪卵巢中PAS阳性反应主要分布于卵原细胞周围的基质、卵原细胞巢和合胞体的外膜上,以及原始卵泡周围的基质、初级卵泡的卵泡膜及刚形成的透明带上,此外卵巢的白膜、髓质的结缔组织、血管壁及卵巢网周围也可见到广泛的阳性着色。育成猪卵巢中,PAS阳性反应主要分布于基质、生长卵泡的卵泡膜、卵泡的透明带、次级卵泡的卵泡液、黄体被膜及髓质的结缔组织和血管壁。