荧光显微镜技术在家蚕变态期细胞凋亡研究中的应用

家蚕在变态发育过程中组织器官发生着激烈的新旧替换,旧组织在消溶过程中存在着细胞凋亡。通过剖取家蚕变态发育期的各种组织(中肠等)的组织块,利用DAPI、Hoechst33342、AO等荧光素直接对活体组织进行荧光显色显微观察,实验证明,利用荧光显微技术可以简单方便地观察到家蚕变态发育过程中组织细胞的形态变化,是研究家蚕变态发育中细胞凋亡的理想方法。     

黑马河草原8种植物叶的解剖结构研究

为进一步研究植物形态与其生存环境的适应关系,利用常规石蜡切片的方法对黑马河草原8种植物叶的解剖结构进行了观察比较。结果表明:这8种植物叶的基本结构具有相似性,均由表皮、叶肉、叶脉组成;叶有背腹型叶和等面叶两种类型;其共有的特征是:叶肉中栅栏组织层数多,其与海绵组织的比值较高,细胞排列疏松,具有发达的通气组织;叶脉发达,脉间区小。不同之处在于叶片与叶肉组织的厚度及其细胞间隙的大小等方面均有不同的变异幅度。以海绵组织厚度的变异程度最大,其次为叶肉细胞间隙和栅栏组织/海绵组织的比值;中脉、栅栏组织、叶片厚度变异程度较小。从解剖结构来看,这8种植物叶的结构具有中生、旱生乃至湿生植物的部分特点的独特结构。说明生长在同一地区的不同植物对环境的适应有多种方式,这是植物对高寒地区低氧、低温、强辐射等自然条件长期适应的结果。     

PEG胁迫对2种冰草叶片显微和超微结构的影响

为了研究PEG渗透胁迫对冰草叶片细胞结构的影响,试验以两种抗旱性不同的冰草叶片为材料,采用石蜡切片法和电镜样品制片方法,进行叶片显微和超微结构特征的观察和比较研究,以进一步探讨干旱对冰草的显微结构和超微结构的影响。结果表明:PEG胁迫对2种冰草叶片厚度、上表皮厚度和下表皮厚度、主叶脉直径、主脉导管直径和肋状突起高度产生不同的影响;叶片细胞出现严重的变形,对叶绿体超微结构产生严重的影响,造成叶绿体被膜褶皱,基粒片层扭曲变形,叶绿体基质中的淀粉粒和质体小球明显减少。     

复合重金属胁迫下5种植物微观结构的变化

为探明植物在复合重金属胁迫下微观结构的变化,采用徒手切片法,对矿渣堆放地和自然地两种生境中的5种植物:蓖麻、刺苋、鬼针草、空心莲子草和紫茎泽兰的茎叶解剖结构进行观察,并测量其叶片厚度、气孔长度和宽度、叶脉厚度、叶脉突起度、茎表皮细胞长度和宽度、茎皮层厚度等指标.结果表明:5种植物的气孔宽度、叶脉厚度和叶脉突起度在两种生境中无显著差异;除刺苋外,矿渣地生境中的其他4种植物的气孔长度均明显大于自然地生境中的植物,其中鬼针草的气孔长度变化最为明显;与自然地植物相比,矿渣地5种植物以较为细长的气孔器、较厚的茎皮层组织等特征来适应重金属环境.矿渣地生境对紫茎泽兰的影响较小.     

3种高检出农药在柑橘检测样品中的稳定性研究

为明确柑橘果实贮藏过程中农药含量的变化趋势，本研究利用气相色谱 (GC) 、气相色谱-质谱联用 (GC-MS) 和超高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 结合QuEChERS前处理技术，测定了柑橘中三类常见高检出农药：以水胺硫磷为代表的有机磷类、以甲氰菊酯为代表的菊酯类、以克百威为代表的氨基甲酸酯类在柑橘基质中的贮藏稳定性。研究了不同柑橘基质、贮藏条件、初始浓度和时间间隔对样品基质中农药含量变化的影响。结果表明，农药种类对贮藏稳定性影响较大，其次是贮藏温度，样品浓度、基质种类。 (1) 三种农药的降解速率由快到慢依次为克百威、甲氰菊酯和水胺硫磷； (2) 冷冻贮藏可以显著减慢农药降解速率； (3)水胺硫磷、甲氰菊酯在低浓度条件下比在高浓度降解快； (4) 甲氰菊酯和克百威在果肉基质中降解速率比全果和果皮中快； (5) 常温下水胺硫磷稳定期在7d，甲氰菊酯1d，克百威小于1d。由此可见，为了防止农药降解，样品采集后应尽快处理，或者短期贮藏。     

家蚕四角形质型多角体病毒的研究

运用生物实验、组织切片、电镜显微技术研究了家蚕六角形野生株(GCPVh)和四角形变异株(GCPVt)质型多角体病毒对家蚕的致病力、感染组织细胞病变、多角体超薄结构。初步表明:GCPVt比GCPVh对蚕致病力强、感染后的中肠细胞病变有差异,同时观察到多角体超微结构在病毒粒子的包埋状态、多角体蛋白的电子密度等方面也存在着一定的差异。     

三种提取单头柑橘木虱体内黄龙病菌DNA方法的比较研究

对饲养在温室内的感染柑橘黄龙病甜橙树上的柑橘木虱采用三种方法进行单头核酸提取，通过超微量核酸蛋白分析仪和细菌通用引物27F1492R常规PCR检测核酸质量，利用柑橘黄龙病菌特异性引物OI1/OI2c常规PCR和以r-rplLAs/f-rplLAs引物进行荧光定量qPCR检测。研究结果表明，三种方法均可以成功提取到单头柑橘木虱总核酸且均能检测到黄龙病菌，李菁方法时间短，步骤简便，提取的核酸浓度较高，但核酸质量较低；氯仿-异戊醇抽提方法步骤较多、历时长，提取核酸浓度较低，但核酸质量较高；试剂盒方法简便快速，提取的核酸浓度高，核酸质量一般，成本较高。三种方法各有优缺点，可根据后续分子实验具体要求选择合适的提取方法。本文为有效的检测柑橘木虱体内黄龙病菌提供了技术基础，也可以推广到其他微小昆虫的内生细菌等相关基因研究领域。     

短命植物三种旱麦草形态学研究—营养器官的解剖构造

本研究采用石蜡切片法，对三种旱麦的营养器官进行解剖，观察到不同种旱麦草的根，茎，叶的构造不同，表皮毛的长短及数量不同，通过对它们的机械组织，泡状细胞维管束的数量分析比较差异，并通过撕表皮补充比较，观察到旱麦草植物具有适应特殊环境的结构特点。     

草地早熟禾的石蜡切片制作技术的优化

以草地早熟禾为材料,在传统石蜡切片方法的基础上,结合草地早熟禾组织结构特点,对脱水、透明、染色等重要制片环节进行改良。结果显示:脱水过程中,将乙醇逐级梯度脱水时间增加,有利于后续浸蜡,避免石蜡切片上的植物材料脱落;透明过程中,将纯二甲苯增加更换频率,同时减少每次处理时间,其透明更彻底;有效的番红固绿染色时间组合处理,使草地早熟禾解剖形态更为清晰。一系列针对草地早熟禾石蜡切片的优化,使得解剖图像染色均匀、图像清晰,不易出现植物材料脱落及组织结构不完整的情况,是观察草地早熟禾形态结构的有效方法。     

冻害损伤柑橘、龙眼木质部结构阻断茎内水分运输

为探明冻害对柑橘、龙眼枝梢内部水分运输功能的影响，以‘福眼’（Dimocarpus longgana L.）和‘玫瑰橙’（Citrus sinesis O.）枝梢（‘福眼’为老熟春梢；‘玫瑰橙’为完成自剪的春梢）为试材，采用常规石蜡切片法和甲醇脱色法，就模拟冻害（T ≤ -5℃）处理对枝梢维管组织结构变化与水分输导功能的影响进行研究。结果表明，冻害处理导致枝梢木薄壁细胞内部结构异常，木质部组织结构完整性丧失，阻断‘玫瑰橙’和‘福眼’茎内木质部导管水分运输。     

几种用于光学显微镜观测的桑叶表皮整体制片方法比较

为了简便而快速制作适用于光学显微镜观测的桑叶表皮标本,采用不同方法分别对桑叶表皮进行整体制片后于光学显微镜下观察其形态特征,比较制片效果。结果表明:用直接剥离法、煮沸剥离法和离析法制作的桑叶表皮标本在光学显微镜下均呈现出清晰结构,桑叶表皮气孔器开张的纵径和横径基本一致,其中离析法制作标本的桑叶表皮的气孔呈阔椭圆形,气孔器面积显著大于直接剥离法和煮沸剥离法制作标本的检测数据,最接近桑树成熟叶片气孔器充分开张时的面积值。因此认为,离析法最适用于桑叶表皮整体制片,该方法定位性能强,操作简便且效率高。     

一种新型丝素支架材料的体内降解试验

将制备的冷冻致孔新型丝素支架材料植入兔耳皮下进行体内降解试验,评价丝素支架材料的降解规律以及生物相容性。对植入丝素支架材料的兔耳进行肉眼外观观察、组织切片观察和扫描电子显微镜观察。肉眼外观观察发现植入丝素支架材料部位的皮肤无明显红肿,经过28周左右皮下材料植入部位的突起逐渐消失;组织切片观察发现该丝素支架材料引起的组织反应较弱;扫描电子显微镜在28周时只观察到将近消失的丝素支架材料种植腔,表明材料已基本降解。相比之下28周时丝素膜仍完好,无明显降解。研究结果表明,冷冻致孔新型丝素支架材料有望开发为一种生物相容性优良的可降解吸收性组织工程支架材料。     

不同采卵方式对绵羊卵母细胞质量、体外成熟及体外受精的影响

随着胚胎工程及胚胎相关技术的发展,绵羊卵母细胞和绵羊胚胎的需求量日益增加.获得尽可能多的结合型卵母细胞是体外受精的关键环节.本试验通过剖切法和抽吸法两种不同采卵方式获取卵母细胞并进行体外成熟培养.剖切法获得的卵母细胞数量高于抽吸法,所用时间相差不大.A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法(P＜0.05),抽吸法所采集的C级卵母细胞显著高于剖切法(P＜0.05);剖切法中卵丘扩散率和第一极体排出率要显著高于抽吸法(P＜0.05),受精后不同时期胚胎的发育率差异不显著(P＞0.05).表明剖切法是采集绵羊卵母细胞的理想方法.     

Demonstration of Rabies Antigen in Salivary Glands of Rabies Suspected Animals

Submaxillary salivary glands from 129 rabies suspected animals were studied by the following methods: a) microscopic examination of frozen sections stained by the Fluorescent antibody technique (FAT), and b) mouse infectivity test (MIT). Flourescent antibody staining of frozen sections from the salivary glands of rabid animals proved to be a satisfactory method for demonstrating rabies antigen, when compared with the mouse infectivity test.     

宁南山区不同造林整地方式对草地植物群落特征的影响

以固定样地的群落样方调查数据为依据,对宁南山区不同整地方式下退化草地植物群落恢复过程中的动态特征进行了对比研究。结果表明：在一定时间尺度上,生境的异质性对鱼鳞坑整地植物群落的结构影响较大,整地方式对植物群落结构特征的影响不明显。植物群落物种多样性由高到底的顺序为：鱼鳞坑整地＞“88542”水平沟整地＞天然封育草地。对于封育5年的草地,鱼鳞坑与水平沟的整地方式对草地植物群落特征的影响不明显,自然生态因子对草地植物群落特征的影响比人为整地方式影响强。     

性别控制胚胎玻璃化一步法稀释冷冻保存技术的研究

为了创立在用户庭院就能应用的玻璃化保存性别控制胚胎的冷冻剂稀释处理方法，采用细管内3种不同液体层构成（A、B、C）法，对新鲜分割胚一步法稀释后的存活能力进行了研究；其次用特定细管最小容量冷却法与上述3种不同液体层构成中效果较好的B法对玻璃化冷冻溶解的新鲜分割胚、体外受精分割胚及冷冻溶解的体外受精分割胚进行一步法稀释后的存活能力予以对比。结果，3种不同液体层构成间胚胎的存活能力无显著差异，B法较高；应用特定细管最小容量冷却法在冷冻溶解的新鲜分割胚、体外受精分割胚及冷冻溶解的体外受精分割胚一步法稀释后的存活能力均显著高于B法。结果表明，特定细管最小容量冷却法是更有效的保存方法。     

动物细胞大规模培养中细胞凋亡检测方法的研究

为了探讨动物细胞大规模培养中细胞凋亡的检测方法,以不同浓度氯化铵诱导BHK-21细胞凋亡,每隔12 h收集细胞,采用台盼兰形态学排染法、吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法、FITC-Annexin V/PI双染色荧光显微镜观察法、原位缺口末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳、流式细胞术(FCM)法进行细胞凋亡的检测。通过比较发现,不同方法检测结果都存在着显著性差异,但吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法是一种简单、易行、准确、全面定性细胞凋亡的较为可靠的方法,而FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞仪能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞,是较为理想的凋亡定量检测方法。这2种方法的联合运用更适应于动物细胞大规模培养过程中细胞凋亡的检测。     

猪溶血性链球菌的分离鉴定及溶血素基因的PCR检测

为了建立简便、快捷、准确的猪溶血性链球菌实验室诊断方法,试验采用无菌操作技术将疑似猪链球菌病的猪组织接种于血平板上培养,对染色、镜检为链球菌的菌落进行分离纯化,然后进行生化鉴定、动物致病性试验、药敏试验。根据GenBank发布的猪链球菌溶血素基因(sly)全序列,设计1对特异性引物,然后抽提分离菌DNA扩增出大小为568 bp的目的片段。结果表明:使用此鉴定方法可简便、快捷、准确地检测出猪溶血性链球菌溶血素基因。     

Comparison of visual microscopic and computer-automated fluorescence detection of rabies virus neutralizing antibodies.

The rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT) and the fluorescent antibody virus neutralization test (FAVNT) are both diagnostic tests for determining levels of rabies neutralizing antibodies. An automated method for determining fluorescence has been implemented to reduce the work time required for fluorescent visual microscopic observations. The automated method offers several advantages over conventional visual observation, such as the ability to rapidly test many samples. The antibody titers obtained with automated techniques were similar to those obtained with both the RFFIT (n = 165, r = 0.93, P < 0.001) and the FAVNT (n = 52, r = 0.99, P < 0.001).     

Spontaneous vacuolar degeneration of the thyroid follicular epithelium in cynomolgus monkeys

Vacuolar degeneration of the thyroid follicular epithelium was observed in two untreated female cynomolgus monkeys assigned to control groups. In light microscopy, large vacuoles containing a homogenous substance occupied the basal region of the epithelium, and the nuclei had shifted toward the apical region. The vacuoles showed negative reactions to PAS and thyroglobulin. Electron microscopic observation revealed dilatation of the rough endoplasmic reticulum corresponding to the vacuoles. The plasma TSH, T3 and T4 levels determined for the samples kept frozen were within the normal ranges, suggesting that the thyroid function was kept intact.