CMC糖化力法测定纤维素酶活性条件的研究

对影响CMC(羧甲基纤维素钠)糖化力法测定纤维素酶活性的主要因素进行了研究。研究结果表明,纤维素酶活性适宜的测定波长为540nm,DNS的添加量为1.5ml,沸水浴显色时间为5min,显色后,吸光值在15～90min内保持稳定。适宜的底物(CMC)浓度为10g/l,适宜的酶促反应时间为5min。     

桦剥管菌纤维素和半纤维素降解相关酶性质研究

为了研究桦剥管菌木材纤维素降解机制,试验分别于23℃和28℃培养桦剥管菌,用菌落直径比较生长速度;以白桦木屑、云杉木屑和麦麸为底物诱导培养,以不加木屑的马铃薯液体培养基为对照,测定12 d内桦剥管菌在纤维素外切酶和纤维素内切酶两种纤维素酶活变化;以云杉木屑、白桦木屑、玉米秸秆和麦麸为诱导物,测定15~21 d内木聚糖酶和甘露聚糖酶两种半纤维素酶活变化;检测8种不同金属离子以及金属离子抑制剂EDTA对两种半纤维素酶活性的影响;并对白桦木屑诱导桦剥管菌产半纤维素酶的酶学性质进行了初探。结果表明:桦剥管菌菌丝更适合在28℃培养;纤维素外切酶和纤维素内切酶的最适底物分别为白桦木屑和云杉木屑,木聚糖酶和甘露聚糖酶最适底物分别为麦麸和玉米秸秆;两种半纤维素酶的最适反应温度均为50℃,最适反应pH值分别为5.0和6.0;8种金属离子中,仅Co2+对两种半纤维酶活性均有促进作用,EDTA对两种酶活性均具有较强抑制作用。     

响应面法优化纤维素酶提取黄粱木叶蛋白工艺

试验旨在研究在纤维素酶活性范围内,使用纤维素酶提取黄粱木叶片叶蛋白的最适工艺。试验选用华南农业大学校园内黄粱木新鲜叶片,在不同温度、pH值、纤维素酶浓度处理下,提取叶片中叶蛋白并测定其蛋白含量,运用响应面分析法优化纤维素酶提取黄粱木叶蛋白工艺。结果表明,温度、纤维素酶浓度对叶蛋白提取率无显著影响(P0.05),pH值对叶蛋白提取率影响显著(P0.05),最优提取工艺为纤维素酶浓度为11.93 U/g,温度为50℃,pH值为4,提取率达29.88%。在保证纤维素酶活性的条件下,可通过该工艺最大程度提取黄粱木叶片中的蛋白质。     

饲用纤维素酶活力测定方法的探讨

饲用纤维素酶作为新型饲料添加剂，在饲料工业中应用已相当普及，对其质量检测显得日益重要，但在国家饲料工业标准中，尚未见有纤维素酶活力的测定方法。据研究所知纤维素酶是一种复合酶，按作用底物的能力划分为两部分，一部分是对棉花纤维素能起催化水解作用，一般称为C１酶；一部分是对羧甲基纤维素钠（Na—CMC）水解能力区分，称为Cx酶。针对上述情况，一般采用两种测定方法，一种是CMC法，适用于Cx酶；另一种是滤纸法，则适用于C１酶活力的测定。１CMC（羧甲基纤维素）法１．１饲用纤维素酶由河南省科学院生物研究所提供。１．…     

5种粗纤维饲料底物对瘤胃真菌纤维素酶的影响

本试验通过在体外模拟瘤胃内环境,利用取自崂山奶山羊瘤胃内的混合厌氧真菌为菌种,分别以花生蔓、地瓜蔓、豆荚、玉米叶和滤纸为培养底物,以羧甲基纤维素酶、木聚糖酶、β-葡萄糖苷酶酶活为监测指标,研究不同纤维素含量的发酵底物对混合瘤胃厌氧真菌产纤维素酶的影响。结果表明:木聚糖酶在豆荚底物组培养72 h酶活达到最高,显著高于其他各底物组(P<0.05);羧甲基纤维素酶活性和β-葡萄糖苷酶活性的最高点均出现在培养72 h的花生蔓底物组,酶活比地瓜蔓组分别高25.00%、14.67%(P<0.05);滤纸组3种纤维素酶酶活均显著低于其余4种底物组(P<0.05)。发酵120 h后,花生蔓、地瓜蔓和玉米叶组的干物质消失率均达到37%,显著高于豆荚底物组和滤纸底物组(P<0.05)。综上,底物中木质素含量对木聚糖酶、纤维素含量对羧甲基纤维素酶和β-葡萄糖苷酶均有一定诱导作用;选择豆荚做发酵底物可产生较高活性的木聚糖酶,选择花生蔓则可以产生较高活性的羧甲基纤维素酶和β-葡萄糖苷酶;底物干物质消失率对3种酶的活性高低影响不大。     

体外法研究银杏叶提取物对山羊瘤胃纤维降解的影响

以3只安装永久性瘤胃瘘管的山羊为试验动物,以纯淀粉、纤维素和酪蛋白为底物,银杏叶提取物在瘤胃培养液底物的浓度设为0(对照组)、0.3%、0.6%、0.9%、1.2%5个水平,利用人工瘤胃体外培养法,通过对瘤胃液pH值、微生物蛋白、纤维素降解率及与纤维素降解相关的酶等指标的测定,探讨银杏叶提取物对纤维素降解的影响.结果表明:银杏叶提取物增加了微生物蛋白的产量,提高了纤维素的降解率,增加了滤纸纤维素酶、羧甲基纤维素酶和木聚糖酶的活性.     

6种金属离子对灵芝纤维素酶活性的研究

研究了Cu2 、Mn2 、Fe2 、Mg2 、Zn2 及K 6种金属离子对灵芝纤维素酶活性的影响,测定底物中分别添加6种金属离子及不同离子浓度梯度下,灵芝纤维素酶的CMC酶活.结果表明,Cu2 、Mn2 和Fe2 对灵芝纤维素酶有抑制作用,Cu2 和Mn2 在离子浓度较低时就具有很强的抑制作用,Fe2 浓度增加至1.2 mg/mL时,其对纤维素酶的抑制作用明显增大;Mg2 、Zn2 和K 对纤维素酶酶活都有促进作用,Mg2 和Zn2 在低浓度时就有较强的促进作用,K 在试验范围内的离子梯度下,促进作用不是很明显.从试验比较分析可知,金属离子可能对来源于不同菌种的纤维素酶有较大的影响.在这项试验范围内,Cu2 、Mn2 和Fe2 是灵芝纤维素酶的抑制剂,Mg2 和Zn2 是灵芝纤维素酶的激活剂.     

不同氮源对瘤胃真菌产纤维素酶活性的影响

本试验通过体外模拟瘤胃内环境,利用取自崂山奶山羊瘤胃内的混合厌氧真菌为菌种,以花生蔓为发酵底物,通过添加等量不同氮源(菌糠、酵母膏、尿素、氯化铵、硫酸铵),并以羧甲基纤维素酶、木聚糖酶、β-葡萄糖苷酶的酶活性和发酵液p H值为监测指标,研究不同氮源对混合瘤胃厌氧真菌产纤维素酶活性的影响。结果表明,添加氮源试验组的纤维素酶活性明显高于不加氮源的对照组(P0.05)。以氯化铵做氮源时3种纤维素酶活性均为最高,其木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶最高酶活性显著高于其他试验组(P0.05),羧甲基纤维素酶活性与硫酸铵组相比差异不显著(P0.05),但显著高于另外3种氮源组(P0.05)。各组p H值随着时间增长而逐渐下降,5种氮源组120 h的p H值下降值与对照组相比差异显著(P0.05),其中以菌糠组下降最快。从试验结果可以看出,添加不同氮源对瘤胃厌氧真菌产纤维素酶活性及p H值有影响,以氯化铵做氮源时产酶活性最高。     

日粮碳水化合物结构对山羊瘤胃内环境参数及微生物组成的影响

试验以3头安装永久性瘤胃瘘管的山羊为试验动物,以纯淀粉和纤维素为底物,利用人工瘤胃体外培养法,通过产气量、纤维素的降解率、瘤胃液氨氮浓度,瘤胃液pH值,微生物蛋白含量这5个指标的测定,评价日粮碳水化合物结构(NSC/SC,淀粉∶纤维素)为100∶0、70∶30、50∶50、30∶70、0∶100的5种组合对瘤胃发酵及微生物蛋白产量的影响。结果表明:随着体外培养时间的延长,培养底物中的碳水化合物随着NSC水平的降低,累积产气量不断降低,瘤胃液pH值不断提高,原虫占瘤胃微生物的比重不断升高。在NSC/SC值为30∶70时,纤维素的降解率和微生物蛋白产量达最高。瘤胃液氨氮浓度随着底物中NSC水平的降低变化不显著,但在培养后2h各组的氨氮浓度都达到最大值,随后便随着培养时间的延长而逐渐降低。     

秸秆液态发酵中纤维素酶活的研究

采用摇床液体发酵试验方法,利用产纤维素酶菌株对秸秆进行混合发酵并进行滤纸酶活性、羧甲基纤维素酶活性测定,从而确定该混合菌株的最优产酶条件。结果表明,最优培养基组成中秸秆和麸皮的混合比例为5∶1,硫酸铵添加量为1．4％,白腐真菌、康宁木霉接种量均为3％,接种时间间隔为48h,pH为7．0,摇床培养温度28℃。     

一株高产内切纤维素酶贝莱斯芽孢杆菌的产酶条件优化及酶学性质分析

试验旨在对一株杜仲树皮内生菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)的内切纤维素酶(CMCase)进行产酶条件优化及酶学性质分析,为探究贝莱斯芽孢杆菌CMCase的相关特性提供参考依据。采用单因子试验设计,分别优化pH、接种量、温度、时间、碳源和氮源等发酵条件,并探讨温度、pH、底物专一性、金属离子及表面活性剂对CMCase的影响。结果表明,以玉米秸秆为碳源(30 g/L)、豆粕为氮源(30 g/L)、3%接菌量、pH 7.0的条件下37℃培养48 h,贝莱斯芽孢杆菌157的CMCase最高可达(5.14±0.18) U/mL。经CMCase酶学性质分析发现,贝莱斯芽孢杆菌157的最适酶反应温度为60℃,最适pH为5.0;温度稳定性试验发现,在40和50℃时,相对剩余酶活力均高于80%,随着温度的升高,酶活力逐渐降低,当温度高于55℃,相对剩余酶活力约为50%;pH稳定性试验发现,在pH 5.0～10.0之间耐受性良好,相对剩余酶活力均高于90%,随作用时间的延长,相对剩余酶活力变化不大。贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase属于典型内切型纤维素酶。Na^+、Mg²⁺、Ca²⁺可促进贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase酶活力,而Co²⁺、Hg²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺和SDS抑制CMCase酶活力;表面活性剂Tween-80、Tween-20、Triton X-100对贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase无影响。本试验通过对贝莱斯芽孢杆菌157进行产酶条件优化及CMCase酶学性质分析发现,贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase具有产酶量高,耐受pH范围广的特点,在饲料添加剂、洗涤剂和造纸领域中具有一定的应用价值。     

康氏木霉固态发酵纤维素酶的初步研究

该研究以麸皮和玉米芯为主要原料，采用康氏木霉固态发酵法生产纤维素酶，研究了碳源和表面活性剂对康氏木霉产纤维素酶活力的影响。该研究结果表明：(1)碳源以麸皮：玉米芯为3：2时最合适；(2)表面活性剂以“奇强”洗洁精对提高纤维素酶活力作用最显著，用量为0．5％时酶活力比对照提高12．4％。     

Development of enzyme-linked immunosorbent assays for the detection of Fusobacterium necrophorum antibody in animal sera

Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) for the detection of Fusobacterium necrophorum antibody in the sera of rabbits, cattle, and sheep were developed, using a ribosome-rich extract (RRE) from F necrophorum as the antigen. Test character, including optimal antigen dilution and substrate incubation periods, was established, using rabbit, bovine, and ovine antisera produced against RRE from isolates of F necrophorum. Rabbit antisera produced against 7 other species of bacteria were used to test the specificity of the F necrophorum RRE antigen. Cross-reactivity was not detected. Sera from 50 feedlot cattle were examined with the bovine ELISA. Of the 50 samples, 43 (88%) were positive for F necrophorum antibody. The ELISA developed in this study were sensitive and specific and appear to be readily adaptable to serologic investigations of F necrophorum.     

添加乳酸菌和酶制剂对水葫芦茎叶青贮发酵品质的影响

采用3×3二因子随机试验设计,研究乳酸菌和酶制剂对水葫芦茎叶青贮料发酵品质的影响。乳酸菌和酶制剂的添加水平分别为0、1×106、1×108CFU/kg原料和0、3000、6000IU/kgDM。结果表明:青贮料的NDF含量随着乳酸菌和酶制剂添加量的增加而降低(P<0.05),其中加菌组比未加菌组降低3.9%～5.7%,加酶组比未加酶组降低2.7%～3.4%;青贮料的氨态氮占总氮的比例随着乳酸菌添加量的增加而降低(P<0.05)。当酶制剂添加6000IU/kgDM时青贮料的氨态氮占总氮的比例与未加酶组存在显著的差异(P<0.05);乳酸菌和酶制剂的添加对于青贮料的pH值、乳酸和丁酸有显著的互作效应(P<0.05),青贮料的乳酸和丁酸含量的变化呈相反趋势,随着乳酸菌和酶制剂添加量的增加显著升高或降低(P<0.05),当二者的添加量都达到最大时,青贮料的pH值显著降低至4.30,乳酸含量最高。在本试验条件下,同时添加1×108 CFU/kg原料的乳酸菌和6 000 IU/kgDM的酶制剂青贮水葫芦茎叶效果最好。     

Relationships between the addition rates of cellulase or glucose and silage fermentation at different temperatures

The influence of the application rates of cellulase preparation and glucose on silage fermentation at different temperatures was studied with the straw of naked barley (Hordeum vulgare L. emand Lam) and guineagrass (Panicum maximum Jacq.). Addition rate of cellulase and glucose, temperature and their interaction had significant effects on pH value, lactic acid content, butyric acid content and propionic acid content of naked barley straw silage and significant effects on all the parameters of guineagrass silage (P < 0.01). Temperature and interaction had significant effect on acetic acid content (P < 0.05) and no significant effect on NH₃‐N content of naked barley straw silage (P > 0.05). Under all the temperatures, the pH values of barley straw and guineagrass silages were reduced by cellulase and glucose addition even at the lowest rate (P < 0.05), compared with their corresponding control. Lactic acid contents of silages were the highest within the same temperature and same additive when glucose and cellulase were added at the highest rates, whereas the effect of cellulase and glucose addition on butyric acid production varied with their application rates and silage storage temperature. The addition rate of restricting butyric acid fermentation was lower at 20°C than that at 30°C, and it was the lowest at 40°C where cellulase and glucose addition restricted butyric acid fermentation even at 0.1 g/kg and 10 g/kg, respectively, when compared to the control. While the addition rate was lower than the above level, cellulase and glucose addition also promoted butyric acid fermentation.     

响应面优化转透明颤菌血红蛋白基因里氏木霉液体发酵产纤维素酶的培养条件

研究采用响应面法并以滤纸酶活力（filter paper activity,FPA）作为响应值对转透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉（Trichoderma reesei）Tu6-VHb菌株液体发酵产纤维素酶的发酵条件进行优化。根据单因素试验结果设计P-B试验,筛选出影响Tu6-VHb菌株发酵产酶的3个显著因素：吐温-80含量、发酵液体积（250 mL三角瓶发酵）、氮源浓度。用最陡爬坡路径法逼近最大响应值区域,运用响应面B-B试验设计确定3个显著因素之间的交互作用和最佳发酵条件。结果显示,Tu6-VHb产纤维素酶的最佳发酵条件是：吐温-80含量0.39%,发酵液体积61.32 mL（250 mL三角瓶发酵）,氮源浓度0.87%。经优化后,Tu6-VHb菌株发酵产纤维素酶酶活力达51.72 U/mL,与模型预测值51.94 U/mL相近,较优化前该菌株酶活力（39.984 U/mL）提高了29.35%,是未转入透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉（Trichoderma reesei）Tu6菌株酶活力（35.904 U/mL）的1.44倍。     

Evaluation of the critical parameters of a sensitive ELISA test using purified infectious bovine rhinotracheitis virus antigens

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the survey or titration of bovine sera for the presence of IgG antibodies against infectious bovine rhinotracheitis (IBR) virus was developed. The optimal conditions of serum dilution, antigen concentration, conjugate dilution, substrate concentrations, and reaction time were established using the signal/ noise (S/N) ratio as the determining criterion. Equilibrium density gradient purified IBR virus was used as antigen at an optimal concentration of 0.60 μg/cuvette. The use of purified antigen allowed the testing of sera at a 1 : 10 dilution without nonspecific reaction.The conditions of conjugate dilution, substrate concentration and reaction time were shown to have significant effects on the ELISA test. Results from 35 sera showed this optimized ELISA procedure to be as much as 1000-fold more sensitive than the serum neutralization plaque reduction assay. Numerous sera showing no neutralizing titer to IBR virus were found to be positive when examined by this ELISA method.     

2个枯草芽孢杆菌源纤维素酶基因的克隆、融合表达及其酶学性质分析

本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,设计一段柔性接头(GSGGGS),通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框(ORF)内,插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明:本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku,粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL,葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0,温度在30~70℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性,pH在4.0~9.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性,除Mn~(2+)外的其他金属离子对纤维素酶的活性均具有一定的抑制作用,其中Hg~(2+)和Cu~(2+)对的抑制作用较明显。由此可见,本试验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了融合纤维素酶Cel42-Cel22,且该酶具有一定的活性,可适应较宽广的温度和pH范围,对金属离子敏感。     

鸡肠内菌发酵党参转化多糖实验研究

用最小二乘法模拟制作了肠内混合菌C8GF20、双歧杆菌C4BF12、乳杆菌C4M50F8在含药培养基中的生长数学模型,以单因子14水平拟合并验证了数学模型的准确性,通过发酵液粗多糖水平变化评估3种菌发酵党参转化多糖的活性作用。当培养基中药物添加量在12.5%-15%时,细菌增长最佳;3种菌实验数学模型经拟合验证,对应的RSD分别为5.45%、4.17%和4.19%;党参发酵液中粗多糖增量在驯化7代后趋于稳定并达最高值,C4M50F8的最高值为124.68%、C4BF12的最高值为114.29%、C8GF20的最高值为119.36%。结果提示,党参加入浓度为12.5%时效果最佳,实验菌发酵党参后多糖增加量均在100%以上,其中乳杆菌C4M50F8效果最优。     

纳米二氧化钛对纤维素酶活力的影响

作者主要研究不同浓度纳米二氧化钛在不同作用时间、不同温度及不同光照处理条件下对纤维素酶酶活力的影响，以探讨纳米二氧化钛在生物大分子水平上的作用及其作用机理。结果表明：纳米二氧化钛在可见光与紫外光照射条件下均可使纤维素酶失活。而且随着与纤维素酶作用时间的延长、纳米二氧化钛浓度增加和作用温度的升高，其对纤维素酶活力的影响也随之增大。