重组酶聚合酶扩增技术及其在病毒性猪病快速检测中的应用

重组酶聚合酶扩增(RPA)技术是近年来建立起来的一种新的核酸恒温扩增技术,具有操作简单、灵敏度高、特异性强、在短时间内快速扩增出目的片段等优点,在动物疾病早期诊断、现地检测、进出口快速检疫等方面具有良好的应用前景。文章综述了RPA技术及其在病毒性猪病快速检测中的最新应用研究进展,以期为更好地防控猪病提供参考。     

环介导等温扩增技术及其在猪病病原检测中的应用研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性强、灵敏度高、快速、准确和操作简便和成本低等特点,越来越受到兽医相关工作者的关注.目前,该方法己被广泛应用各种猪病病原的检测.通过综述LAMP技术在猪传染病检测中的应用研究进展情况,以期为今后猪病的诊断和防控工作提供参考.     

重组酶聚合酶扩增技术及其在猪病毒性腹泻病原基层现场检测中的应用

猪病毒性腹泻是对养猪业危害严重的一类疾病,导致仔猪大量死亡,损失惨重。重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是一种核酸恒温扩增技术,恒温条件下,短时间内实现靶基因大量扩增,可实现病原的现场快速检测,具有广阔的应用前景。文章综述了RPA技术的原理、产物检测方式及在猪病毒性腹泻病原检测中的应用,旨在为猪病毒性腹泻病原的基层现场检测提供参考。     

环介导等温扩增技术在病原检测中的应用

文章介绍了环介导等温扩增技术的的基本原理、特点及其在传染性疾病中检测和诊断的应用。环介导等温扩增技术具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。环介导等温扩增技术已经被用来快速诊断动物的传染病。目前可检测圆环病毒2型、鹅细小病毒、伪狂犬病病毒、高致病性禽流感病毒、新城疫病毒、副猪嗜血杆菌、单核细胞增生性李斯特氏菌、猪肺炎支原体及弓形虫基因等。     

环介导等温扩增(LAMP)技术及其在猪繁殖障碍性疾病病原检测中的应用

环介导等温扩增(LAMP)技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性强、灵敏度高、快速、准确、操作简便和成本低等特点,越来越受到兽医相关工作者的关注。目前,该方法己被广泛应用于各种猪病病原的检测。本文对LAMP技术及其在猪繁殖障碍性疾病病原检测中的应用研究进展进行综述,以期为今后猪繁殖障碍性疾病的诊断和防控工作提供参考。     

多重PCR技术在猪病检测中的应用

多重PCR技术是一种实用的分子诊断技术,该技术能在同一反应体系中同步扩增多个目的片段,具有高效、快捷、敏感、特异等优势,适用于对大量临床样本的快速检测。本文就多重PCR的技术原理、在猪病检测中的技术类型(常规技术、分型技术、创新技术)等进行了叙述。     

重组酶聚合及其在禽病原酶扩增技术检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术是2006年由英国科学家研发的一种核酸恒温扩增技术,它不同于传统的PCR扩增,恒温条件下短时间内实现靶基因大量扩增,具有恒温、快速、便携、灵敏度高、特异性强和操作简单等优点,具有广阔的应用前景。本文综述了RPA技术的原理、反应条件优化、产物检测方式、与其他恒温技术相比的优势及在禽病病原检测中应用,旨在为禽病病原检测新技术、新方法的研制提供参考。     

NASBA技术及其在畜禽病毒检测中的应用

NASBA即核酸序列依赖扩增技术,主要用于扩增RNA,是由一对特异性的引物介导的、连续均一的、体外核酸序列等温扩增反应过程.该技术具有操作简便,特异性强,敏感性高,快速,高通量等优点,目前已经广泛应用于人类与动物的多种病毒性疾病的检测,具有良好的应用前景.在禽流感病毒、新城疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、口蹄疫病毒等的检测...     

应用环介导等温扩增技术(LAMP)检测猪弓形虫病

为了解延边地区猪弓形虫病的流行情况,本试验在建立猪弓形虫病LAMP检测方法的基础上,对采自延边地区的264份猪血液样本进行了猪弓形虫病的检测。结果显示,建立的猪弓形虫病LAMP方法,在样本DNA稀释3×105倍后仍可检出,该方法扩增不出新孢子虫、瑟氏泰勒虫及猪附红细胞体等病原体DNA,表明建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于猪弓形虫病的检测。通过对延边地区的264份猪血液样本的检测结果显示,延边地区是猪弓形虫病的流行地区,尤其家养散户型感染率高,而且仔猪的感染率高于育肥猪。     

副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用

为了解副猪嗜血杆菌病在贵州对猪群的危害和流行规律、进一步开展副猪嗜血杆菌病的防治研究提供参考依据,特进行副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用研究。根据副猪嗜血杆菌（HPS）16S rRNA基因序列设计1对引物,通过优化组合试验,对贵州省分离的HPS进行PCR扩增,扩增出长为650bp的目的基因片段,而大肠埃希氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、葡萄球菌等扩增结果为阴性。采用该方法对贵州发病猪群中350头疑似病例进行PCR检测,检出率为8％～49％。该方法检测副猪嗜血杆菌敏感性高、特异性好,可用于副猪嗜血杆菌的快速诊断。     

浅谈猪病检测中多重PCR技术的运用

多重PCR技术具体指的是一种分子诊断技术,通过该技术的应用可以在同一个反应体系中在同一时间内进行多个目的片段的扩增,具备有特异,敏感,快捷等众多优势,非常适合在大量的临床样本中展开快速检测.本文讲述了多重PCR技术的一些技术原理,以及进猪病检测中多重PCR技术的具体应用进行了分析.     

一种食品中猪源性成分的快速检测技术

建立一种基于PCR技术的食品中猪源性成分快速检测技术。根据猪线粒体cytb基因设计引物,进行PCR扩增。该方法对猪DNA检测的灵敏度达到100pg;该方法仅对猪DNA检测呈阳性,与其他物种DNA无交叉反应;同时可用于商业样本及复杂食物样本的检测。本研究的猪源性成分特异PCR检测技术具有快速、准确的特点,且具有较高的特异性和敏感性,可作为肉制品中猪源性成分快速检测的手段。     

LAMP技术在猪传染病检测中的应用

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)技术是利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA的新技术。该技术在1h内能扩增出109个靶序列拷贝,扩增产物是一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰菜样结构的DNA片段的混合物。LAMP技术以其特异性强、灵敏度高、快速、准确和操作简便等优点在核酸的科学研究、疾病的检测与预防以及动物胚胎的性别鉴定等领域得到了日益广泛的应用。本文主要综述了LAMP技术在猪传染病检测中的作用,使之能为该技术的深入研究和应用提供参考。     

乙型脑炎病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用

为了建立一种快速的乙型脑炎病毒(JEV)病原检测方法,根据GenBank上登录的JEV基因组序列,设计合成内外2对引物,优化PCR反应条件,建立了检测JEV的套式RT-PCR方法。结果:该方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 pg,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。研究表明建立的套式RT-PCR方法具有良好的特异性、敏感性,可以准确快速检测出极低含量的JEV,将为JEV感染的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查等提供一种高效、快速、特异、灵敏的检测方法。     

美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立

设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及应用

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性和重复性;对阳性标准品的检测结果表明,所建立的PCR-DHPLC法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。对16份疑似病料分别应用本试验所建立的PCR-DHPLC法与SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法、病毒培养法进行检测,发现有15份荧光定量PCR阳性,15份PCR-DHPLC阳性,12份PCR-凝胶电泳阳性。结果表明,建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。     

猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用

正近些年,猪病发生的几率越来越高,且病症也越来越严重,这使得养猪业的发展也受到极大的影响。在猪病的诊断与防治中,最重要的就是精确快速地找到导致猪病发生的病原菌,这样才能根据病原菌的种类,采取有针对性的措施来加以应对。故开发一种能够迅速对猪病进行诊断的技术就变得十分重要,而应用PCR技术则能很好地满足这一要求。1 PCR技术概况在猪病诊断与防治中,PCR技术主要有三个优点:一是操作简便,二是具有高速度的扩增效果,三是     

猪病轻简化实用快速诊断技术与应用

诊断是有效控制和消灭疫情的基础,准确的诊断结果是制定动物疫病防控措施的科学依据,动物疫病诊断技术是反映动物防疫整体水平的重要指标。免疫层析试纸快速检测技术具有操作简便、快捷、无需特殊仪器设备、检测结果清楚直观、试剂稳定和便于保存等特点,适用于动物疫病现场快速检测,对猪病诊断、指导免疫和建立适宜的免疫程序等有重要作用。国家生猪产业技术体系自启动以来,以实现猪病检测技术的快速、灵敏、特异、简便化为目标,疫病控制研究室围绕重要猪病病原,重点开展了免疫层析试纸技术研究,成功研制了一批具有自主知识产权的抗体快速检测技术产品,获得国家二类新兽药证书2项,河南省科技进步一等奖1项,每年向国家生猪产业技术体系综合试验站,基层兽医站以及不同类养猪企业免费提供猪病快速检测试纸4万条以上,为防控生猪疫情提供了技术支撑。     

猪A群轮状病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与初步应用

为建立一种快速检测猪A群轮状病毒的检测方法,基于猪A群轮状病毒NSP4基因序列利用Premier 5.0软件设计并合成了一对特异性引物,建立了猪A群轮状病毒一步法RT-PCR检测方法,通过反复试验确定了引物的最佳退火温度为56℃,通过灵敏性试验确定了最低的检测浓度为13.17 pg/μL,通过特异性与稳定性试验表明该方法具有良好的特异性与稳定性,同时应用该方法对临床病料进行了检测,并选取扩增阳性样品进行了序列测定与分析,样品阳性率为90%(27/30),与Gen Bank中其他猪A群轮状病毒NSP4基因序列同源性均在98%以上。结果表明:该方法具有良好的灵敏性、特异性与稳定性,可以为猪A群轮状病毒病的快速检测和流行病学调查提供有效的技术手段。     

环介导等温扩增技术在常见猪病诊断上的应用

近年来,猪病的流行对养猪业造成了越来越严重的危害,许多疫病呈现非典型性和多种病毒混合感染的趋势,由于病猪并没有表现出标志性的临床症状使得临床上确诊困难,快速准确地判断出感染的病原体以便采取相应的防治措施是猪病防治中的重点。文章通过阐述环介导等温扩增(LAMP)技术的原理和特性,并综述了该技术在临床上对猪瘟病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒等的检测应用,以期为猪病毒病的诊断提供更多的支持。