Cry1Ac毒素对小菜蛾幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响

为了明确Cry1Ac毒素对小菜蛾Plutella xylostella幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响,利用蛋白酶专性底物测定其中肠各蛋白酶活性在不同缓冲液中的最适pH,并用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后测定该毒素的致死中浓度LC_(50),观察中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的变化,分析Cry1Ac毒素与昆虫中肠酶活性间的关系。结果表明,小菜蛾幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl、KH_2PO_4/NaOH和Glycine/NaOH三种缓冲液中最适pH均为11.0;强碱性胰蛋白酶的最适pH分别为10.0、10.5和10.5;弱碱性胰蛋白酶的最适pH均为8.5;胰凝乳蛋白酶的最适pH分别为8.5、9.0和9.0。Cry1Ac毒素对小菜蛾的致死中浓度LC_(50)为0.343μg/mL。用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后,其中肠各蛋白酶活性均随时间的变化而变化。弱碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性明显升高,且随浓度升高呈上升趋势;在取食36~72 h期间低浓度处理组的羧酸酯酶活性与对照组间无显著差异,而高浓度处理组羧酸酯酶活性显著高于对照组。表明Cry1Ac毒素能够显著影响小菜蛾的中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性。     

藿香精油对朱砂叶螨的触杀毒力及几种保护酶活性的影响

本研究旨在探明藿香精油对朱砂叶螨的触杀毒力及几种保护酶活性的影响。采用喷雾法测定了藿香精油对朱砂叶螨5日龄雌成螨和卵的触杀毒力及雌成螨的产卵抑制作用,分析比较了LC₃₀、LC₅₀和LC₉₀藿香精油喷雾处理雌成螨4、8、12、16、20和24 h后,其体内蛋白酶和3种保护酶活性的变化。结果表明,经藿香精油处理后,雌成螨的死亡率和卵的孵化抑制率与供试浓度呈正相关,LC₅₀和IC50分别为0.60%、0.62%。随着供试浓度的增加,藿香精油的触杀作用增强,对雌成螨的产卵抑制率和产卵抑制指数呈上升趋势,且对雌成螨的触杀作用高于卵。用浓度LC₃₀、LC₅₀和LC₉₀藿香精油处理雌成螨4 h后,蛋白酶和POD活性被激活,SOD活性被抑制,蛋白酶的激活率分别为10.96%、47.70%和62.92%,POD活性分别为对照的2.3、1.5和0.3倍,SOD的抑制率分别为44.52%、23.91%和49.08%。LC₃₀和LC₅₀处理4 h后CAT活性被激活,激活率分别为20.26%和52.22%;LC₉₀处理后CAT活性被抑制,抑制率为62.21%。藿香精油对朱砂叶螨有一定的触杀毒力,能有效抑制雌成螨产卵,可通过扰乱蛋白酶和保护酶的动态平衡来影响其正常生理代谢,从而起到毒害作用。因此,藿香精油在农业防治朱砂叶螨方面有一定的开发潜力。     

亚致死剂量氯虫苯甲酰胺对小菜蛾体内活性酶的影响

为探讨亚致死剂量氯虫苯甲酰胺对小菜蛾 ［Plutella xylostella (L.)］ 体内活性酶的影响,采用叶片药膜法,用氯虫苯甲酰胺LC50和LC25剂量处理小菜蛾3龄幼虫24、48 h后,测定了幼虫体内羧酸酯酶、多功能氧化酶、谷胱甘肽S-转移酶、乙酰胆碱酯酶等4种酶的活性变化。结果表明,亚致死浓度氯虫苯甲酰胺处理除对羧酸酯酶活性影响不显著外,对另3种酶活性均存在一定的抑制作用。谷胱甘肽S-转移酶活性下降最明显,LC25和LC50处理小菜蛾24 h后,与对照相比分别下降92.57%和98.01%。     

球孢白僵菌对葱地种蝇成虫的毒力及繁殖力的影响

本文采用浸虫法测定了4株球孢白僵菌对1日龄葱地种蝇（本文称葱蝇）成虫的毒力,筛选出高致病力的菌株,描述了感染症状,测定了其亚致死剂量LC₂₀和LC₅₀对存活1日龄葱蝇成虫生物学参数和繁殖力的影响,并比较了5.8×10³和5.7×10⁵孢子/mL对1日龄和10日龄葱蝇成虫死亡率和单雌产卵量的差异。结果表明菌株Bb01对葱蝇成虫的致病力最强,其LC₅₀为1.76×10⁶孢子/mL,其次为菌株Bb03和Bb02,其LC₅₀分别为4.05×10⁶和1.86×10⁷孢子/mL。与对照相比,菌株Bb01亚致死剂量处理1日龄成虫后,明显延迟了葱蝇成虫的产卵前期,降低了单雌产卵量,LC₂₀浓度处理时单雌产卵量比对照下降了51.9%,LC₅₀处理下降92.2%,明显缩短了雌成虫寿命,但卵孵化率没有明显影响。虽然菌株Bb01对1日龄成虫造成的死亡率较高,但在5.7×10⁵孢子/mL下,10日龄成虫单雌产卵量比对照下降了82.5%,对种群控制效果仍较强。     

甜菜夜蛾核型多角体病毒青岛分离株SeMNPV-QD的毒力测定

为评价一株新的甜菜夜蛾核型多角体病毒（青岛分离株SeMNPV-QD）在害虫生物防治中的应用潜力，本文以甜菜夜蛾核型多角体病毒青岛株SeMNPV-QD与美国株SeMNPV-US1为材料，分别测定了病毒对甜菜夜蛾细胞系的感染、对甜菜夜蛾幼虫的室内生物活性以及田间防治效果。研究结果表明，SeMNPV-QD与SeMNPV-US1对甜菜夜蛾细胞系Se-3的感染率分别为92.34%和93.65%，平均每个细胞的病毒多角体产量分别为23.97和24.10 PIB，差异均不显著；SeMNPV-QD与SeMNPV-US1对初孵甜菜夜蛾幼虫的LC₅₀分别为4.43×10⁴和4.35×10⁴ PIB/mL，LT₅₀分别为4.12和4.02 d；SeMNPV-QD与SeMNPV-US1对4龄甜菜夜蛾幼虫的LC₅₀分别为9.25×10⁵和4.44×10⁵ PIB/mL，LT₅₀分别为6.20和5.50 d；SeMNPV-QD和SeMNPV-US1对大葱田甜菜夜蛾幼虫具有较好的防治作用，7 d的校正防效分别达到74.99%和79.04%。研究结果将为新病毒株的深入研究开发以及甜菜夜蛾的生物防治提供理论依据。     

Cry8Ga1蛋白对华北大黑鳃金龟幼虫主要酶活性的影响

华北大黑鳃金龟［Holotrichia oblita （Faldermann）］是一种危害严重的地下害虫,Cry8Ga1蛋白对其幼虫具有明显杀虫活性。本文比较了华北大黑鳃金龟幼虫取食Cry8Ga1蛋白后6种酶活性的变化,发现取食高浓度（5×LC50,50767 μg/g土）Cry8Ga1蛋白幼虫的总蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶、乙酰胆碱酯酶（AChE）、谷胱甘肽 S 转移酶（GST）以及氨肽酶（APN）的活性较对照均有不同程度的升高,在大多数处理时段差异显著（P＜0.05）,其中高浓度处理组的GST酶活性在12 h后升高倍数最大,是同时段对照的23.37倍;而取食低浓度（0.5×LC50,5.076 7 μg/g土）Cry8Ga1蛋白时,乙酰胆碱酯酶和氨肽酶活性无明显差异（P≥0.05）。类胰蛋白酶在整个试验中活性变化与对照相比仅有个别处理时段存在差异,由此推断,类胰蛋白酶不是华北大黑鳃金龟幼虫对Cry8Ga1蛋白的主要活化酶。     

三株球孢白僵菌的分离鉴定与其对粘虫的室内毒力

通过黄粉虫虫饵法从河北省采集的土样中分离得到三株昆虫病原真菌,结合形态学特征和rDNA序列分析对菌株进行了鉴定,结果表明：三株均为球孢白僵菌Beauveria bassiana,编号依次为Z-G2-5、M-G4、M-G3。通过生测发现3株球孢白僵菌菌株均能有效感染粘虫幼虫,三株球孢白僵菌对粘虫3龄幼虫的毒力不同：在5×10⁸孢子/mL剂量下,菌株Z-G2-5第6 d时对粘虫的累计校正死亡率达到96.77%,LT₅₀为3.02 d,LC₅₀为4.95×10⁶个孢子/mL。而菌株M-G3、M-G4的累计死亡率分别为66.67%、71.11%;LT₅₀分别为4.89 d、3.97 d;LC₅₀分别为1.18×10⁸个孢子/mL、1.13×10⁷个孢子/mL。上述结果表明,相比其他两株菌,菌株Z-G2-5对粘虫的致病力更强,致死速度更快,具有较大的应用价值,可作为粘虫幼虫生物防治的候选菌株。     

基于转录组测序解析草地贪夜蛾对溴氰虫酰胺的解毒代谢分子机制

为阐明草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda对溴氰虫酰胺的解毒代谢分子机制,通过LC₅₀的溴氰虫酰胺诱导草地贪夜蛾3龄幼虫后,利用酶活测定和转录组测序鉴定解毒代谢相关基因,并采用实时荧光定量PCR技术对细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenase,P450)基因进行验证分析。结果表明,经LC₅₀的溴氰虫酰胺处理后,草地贪夜蛾3龄幼虫体内3种解毒代谢酶活性较对照均有所升高,但仅P450活性较对照显著升高,而谷胱甘肽S-转移酶和羧酸酯酶与对照无显著差异。经LC₅₀的溴氰虫酰胺处理后草地贪夜蛾3龄幼虫转录组中共筛选到1 408个差异表达基因,其中上调表达的基因有935个,下调表达的基因有473个。药物代谢-细胞色素P450通路、药物代谢-其他酶通路及细胞色素P450对异生物质的代谢通路中有超过20个基因存在差异表达。在草地贪夜蛾转录组中筛选鉴定到121个P450基因,其中,属于CYP2、CYP3、CYP4以及Mito家簇的基因分别有9、45、58和9个,而经LC_5...     

中药材对抗贮藏对黄粉虫幼虫酶活性的影响

以中药材丹皮、泽泻及其混合物为饲料,对黄粉虫幼虫体内淀粉酶、蛋白酶和乙酰胆碱酯酶活性的影响进行了研究。结果表明:(1)以丹皮为食的幼虫日均生长量明显低于其余各组,说明丹皮能抑制幼虫的生长发育。(2)随着时间延长,丹皮组幼虫体内的蛋白酶、乙酰胆碱酯酶活性明显低于其余各组,说明丹皮既抑制幼虫水解蛋白质,也可影响幼虫的神经传导,但丹皮对幼虫淀粉酶的活性作用较复杂,幼虫的淀粉酶活性在第20天受到抑制后在第50天叉升高。(3)随着时间延长,混合物组、泽泻组幼虫体内蛋白酶、乙酰胆碱酯酶活性与面粉组差异不显著,但幼虫体内的淀粉酶活性明显高于面粉组,说明以泽泻、丹皮与泽泻混合饲养的幼虫水解淀粉的能力得到增强。     

一株金龟子绿僵菌对茶尺蠖的致病力和胞外酶活性

为明确从茶园腐殖层昆虫尸体上分离的虫生真菌的分类地位及其对茶尺蠖的生防潜力,采用形态学特征观察和rDNA-ITS序列分析方法对该菌株进行鉴定,并测定该菌株对茶尺蠖4龄幼虫的毒力及其胞外酶活性。结果表明,从茶园腐殖层虫尸上分离获得一株金龟子绿僵菌CHMA-005;该菌株侵染茶尺蠖4龄幼虫10 d后,致死率、LC₅₀和LT₅₀分别可达100%、1.84×10⁴ cfu/mL和3.57 d;蛋白酶活性和几丁质酶活性均在第6 d达到最大值,分别为31.43和27.73 U/mL。可见,金龟子绿僵菌CHMA-005对茶尺蠖的致病力强,胞外酶活性高,具有良好的生防潜力和应用前景。     

春尺蠖新病毒株的鉴定及其对春尺蠖核型多角体病毒的增效作用

春尺蠖在我国危害严重，为了挖掘具有开发潜力和应用前景的生防因子，本文分离纯化一株能够感染春尺蠖幼虫的新病毒，生物活性测定了新病毒株的毒力及其对春尺蠖核型多角体病毒（ApciNPV）的增效作用。新病毒株的超微结构观察表明，该病毒多角体多为切面呈六边形的多面体，直径大小为0.32～1.20 μm，病毒粒子呈近球状，具有质型多角体病毒的结构特征，命名为春尺蠖质型多角体病毒（ApciCPV）。生物活性测定结果显示，ApciCPV对春尺蠖3龄幼虫有很强的毒力，半致死浓度（LC₅₀）为1.42×10⁴ OBs/mL。当感染春尺蠖3龄幼虫时，ApciCPV可使ApciNPV半致死时间（LT₅₀）缩短0.50～10.90 d，使ApciNPV对春尺蠖的最终致死率提高6.70%～43.33%。根据最终致死率、LT₅₀以及ST三个值综合决定，当ApciNPV和ApciCPV配比浓度分别为1.0×10⁶和1.0×10⁴ OBs/mL时，对春尺蠖3龄幼虫的感染效率最高。新分离的ApciCPV病毒株是控制春尺蠖虫口密度的理想生物因子。     

对韭菜迟眼蕈蚊高活性的苏云金芽胞杆菌JQD117发酵培养基及摇瓶发酵条件优化

为了提高苏云金芽胞杆菌的芽胞产量，应用响应面设计对苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）JQD117进行发酵培养基和摇瓶发酵条件的优化。本研究在单因素试验基础上，采用响应面试验设计方法优化培养基组分和发酵条件参数。最佳发酵培养基为棉籽饼粉2.00%，大豆饼粉1.00%，酵母粉1.50%，可溶性淀粉2.00%，CaCO₃ 0.30%，MnSO₄ 0.04%，MgSO₄ 0.18%，K₂HPO₄ 0.04%；最佳发酵条件：接种量3%、装液量60 mL、温度30℃、转速150 r/min、初始pH 7.5。在最佳发酵条件下理论活芽胞产量可以达到6.75×10⁹个/mL，试验验证后实际活芽胞产量为5.97×10⁹个/mL。运用响应面法对Bt的发酵条件进行优化，获得了提高芽胞产量的关键参数，为该菌株产业化、规模化应用奠定了基础，为韭菜迟眼蕈蚊的绿色防控和蔬菜的安全生产提供了理论基础。     

一株莱氏绿僵菌的筛选及其对草地贪夜蛾的毒力

开展草地贪夜蛾病原真菌的筛选和毒力测定可为草地贪夜蛾的绿色防控提供新的生物制剂。本研究从广西南宁田间采集的草地贪夜蛾幼虫僵虫上分离获得一株病原真菌,采用形态学和ITS-rDNA序列分析相结合的方法对该菌株进行了鉴定,并采用浸虫法测定了该菌株对草地贪夜蛾的致病力。结果表明新分离的菌株为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi,编号为CDTLJ1;该菌株对草地贪夜蛾幼虫、预蛹、蛹均有致病力,1.20×10⁷孢子/mL浓度下,接菌处理后第6 d,2~5龄幼虫的累积校正死亡率均达100%,6龄幼虫的累积校正死亡率为98.33%,预蛹和蛹的累积校正死亡率分别为28.33%、20.00%,草地贪夜蛾2~6龄幼虫的LT50值从3.91 d升至4.24 d;菌株CDTLJ1对草地贪夜蛾3龄幼虫的致死率随孢子悬浮液浓度的升高而增加,当浓度达1×10⁸孢子/mL时,幼虫的致死LT50为4.10 d,接菌处理后第6 d,3龄幼虫的累积校正死亡率达100%,LC₅₀为1.12×10⁴孢子/mL。结果表明,莱氏绿僵菌CDTLJ1对草地贪夜蛾有良好的生防潜力,具有进一步深入研究和开发利用的前景。     

虫生真菌BB-T02分离鉴定及其对两种蓟马的致病力

榕管蓟马和香蕉花蓟马分别归属于管蓟马科和蓟马科，目前这2种蓟马对寄主为害重且相应的生防菌资源较少。为丰富这2种蓟马的生防菌资源，本研究尝试从受虫生真菌感染死亡的昆虫上分离生防菌株，确定其分类地位，测定其对这2种蓟马的致病力。结果表明，从自然罹病死亡的马尾松毛虫幼虫上分离到1株编号为BB-T02的虫生真菌，经形态观察和分子鉴定确认为球孢白僵菌。针对榕管蓟马和香蕉花蓟马的2龄若虫，菌株BB-T02侵染7 d后的LC₅₀分别为1.89×10⁵孢子/mL和9.90×10⁴孢子/mL，1.00×10⁸孢子/mL处理的累计校正死亡率分别为94.12%和98.81%、LT₅₀分别为3.48 d和3.14 d；针对它们的成虫，侵染8 d后的LC₅₀分别为4.45×10⁵孢子/mL和2.13×10⁵孢子/mL，1.00×10⁸孢子/mL处理的累计校正死亡率分别为87.21%和95.29%、LT₅₀分别为4.20 d和3.69 d。综上，球孢白僵菌BB-T02对这2种蓟马致病力强，生防潜力和应用前景良好。     

四种杀虫剂对七星瓢虫和松毛虫赤眼蜂的负效应

七星瓢虫Coccinella septempunctata Linnaeus和松毛虫赤眼蜂Trichogramma dendrolimi Matsumura作为多种害虫的天敌昆虫，广泛应用于生物防治中。本研究按标准采用药膜法分别测定了37%联苯·噻虫胺悬浮剂、24%溴虫腈·甲维盐悬浮剂、45%吡虫·虫螨腈悬浮剂和20%甲维盐·茚虫威悬浮剂四种杀虫剂对七星瓢虫2龄幼虫和松毛虫赤眼蜂成蜂的急性接触毒性，并进行了安全性评价。结果表明：37%联苯·噻虫胺悬浮剂、24%溴虫腈·甲维盐悬浮剂、45%吡虫·虫螨腈悬浮剂和20%甲维盐·茚虫威悬浮剂对七星瓢虫的LR₅₀分别为0.0327、6.90、5.00和1.25 g a.i./hm²，其中24%溴虫腈·甲维盐悬浮剂对七星瓢虫为高风险性，其余药剂为极高风险；对赤眼蜂的LR₅₀分别为2.35×10^-3、0.0129、6.46×10^-3和0.127 g a.i./hm²，均属极高风险。本研究为杀虫剂对七星瓢虫和松毛虫赤眼蜂的负效应影响研究提供一定数据支持。     

球孢白僵菌与低剂量化学杀虫剂对小菜蛾的协同增效作用

本文联合应用球孢白僵菌Beauveria bassiana HFW-05与低剂量化学杀虫剂,评价其是否对小菜蛾防治具有协同增效作用,为小菜蛾的有效防控提供新的途径。结果表明,低剂量的化学杀虫剂对菌株HFW-05分生孢子的萌发率、菌丝生长和胞外蛋白酶活性没有影响,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺的增效作用最明显。低剂量甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺与HFW-05混用均可明显提高对小菜蛾2龄幼虫的杀虫速度。氯虫苯甲酰胺最低设定浓度10×与HFW-05 3个浓度（1.0×10⁶、1.0×10⁷、4.0×10⁷孢子/mL）混用对小菜蛾的理论LT₅₀均低于1 d,显著低于单独使用HFW-05孢悬液。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐4×与HFW-05 3个浓度（1.0×10⁶、1.0×10⁷、4.0×10⁷孢子/mL）混用对小菜蛾的LT₅₀分别为2.4、2.2和1.2 d,显著低于单独使用HFW-05孢悬液。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺均没有影响HFW-05对小菜蛾的僵虫率。表明白僵菌HFW-05与低剂量甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺联合应用,在保证白僵菌侵染作用的同时,可有效提高对小菜蛾的致病力,是防治小菜蛾的一项新的有效措施。     

双委夜蛾高致病力球孢白僵菌的筛选及在玉米内定殖率的测定

双委夜蛾Athetis dissimilis（Hampson）为近年新发生的农业害虫，具有隐蔽为害的习性。为探索有效可持续的防治方法，实验室内测定了YB8、TB1126、YB12、TB1349和YB15共5株球孢白僵菌菌株对双委夜蛾2龄幼虫的致病力，筛选出高致病力白僵菌菌株，并测定其在玉米植株中的定殖率。结果表明：不同菌株对双委夜蛾的致病力存在较大的差异，LT₅₀分别为1.35、2.16、2.61、1.68和2.16 d，LC₅₀分别为9.09×10⁷、5.00×10⁸、5.54×10⁹、1.41×10¹¹和2.61×10¹²孢子/mL。菌株YB8在26℃下，产孢量1.094×10⁷个/mL，孢子萌发率89.66%，1×10⁹孢子/mL 10 d时双委夜蛾2龄幼虫死亡率达到100%，感染僵死率达到86.67%，在玉米根中定殖率为44.44%，茎中定殖率为51.59%，叶片中定殖率为36.30%。具有较大的开发潜力。