重组酶聚合酶扩增技术(RPA)快速检测玉米褪绿斑驳病毒

玉米褪绿斑驳病毒(maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国颁布的一种禁止进境的检疫性有害生物,自然寄主有玉米、小麦、黍、大麦等。自然情况下,MCMV常与甘蔗花叶病毒(sugarcane mosaic virus,SCMV)、玉米矮花叶病毒(maize dwarf mosaic virus,MDMV)、小麦线条花叶病毒(wheat streak mosaic virus,WSMV)共同侵染玉米,可造成玉米产量损失高达10%~90%(Hilker et al.,2017)。     

小麦线条花叶病毒研究进展

小麦线条花叶病毒是一种重要的检疫性有害生物,能危害许多单子叶粮食作物,造成巨大的经济损失。该病毒在世界范围内分布广泛,欧洲、北美洲、大洋洲等多国均有报道发生;而在中国,2000年后鲜有相关报道。近几年,伴随麦类、玉米等粮食的大量进口,小麦线条花叶病毒随之传入的风险剧增。本文从生物学特性、发病特点、检测技术及CP蛋白功能研究进展等方面对小麦线条花叶病毒进行了系统性的概述,旨在为相关部门的检疫与监管提供科学依据。     

进境美国小麦中小麦线条花叶病毒检疫鉴定

小麦线条花叶病毒(WSMV)是我国进境植物检疫性有害生物。2016年11月天津出入境检验检疫局通过反转录PCR(RT-PCR)和双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)方法,从美国小麦中检出WSMV。利用实时荧光PCR(Realtime RT-PCR)、免疫捕获RT-PCR(IC-RT-PCR)和序列比对分析等方法进行了验证。这是我国在进境小麦中截获WSMV的首次报道。     

大麦条纹花叶病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

大麦条纹花叶病毒Barley stripe mosaic virus（BSMV）是我国进境植物检疫性有害生物。为提高大麦条纹花叶病毒检测的灵敏度和特异性,缩短检测周期,根据该病毒不同分离株外壳蛋白（coat protein, CP）基因的保守序列设计特异性的引物和探针,建立了BSMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,本检测方法特异性强,对南方菜豆花叶病毒Southern bean mosaic virus（SBMV）、小麦线条花叶病毒Wheat streak mosaic virus（WSMV）、玉米褪绿斑驳病毒Maize chlorotic mottle virus（MCMV）、烟草环斑病毒Tobacco ringspot virus（TRSV）、菜豆荚斑驳病毒Bean pod mottle virus（BPMV）和番茄环斑病毒Tomato ringspot virus（ToRSV）6种病毒均无交叉扩增;且检测方法灵敏度高,对RNA模板的最低检测限达到5×10-4 ng/μL,与双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）和普通RT-PCR相比,本方法的灵敏度分别提高了10倍和100倍。此外,我们利用该方法对12批进口大麦进行检测,发现6批大麦中检出大麦条纹花叶病毒,占比约50%。总之,本研究建立的荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强等优点,适合于BSMV的快速检测。     

广东局从进境菠菜种子中截获检疫性有害生物——藜草花叶病毒

2012年2月广东出入境检验检疫局从意大利和丹麦进境的2批菠菜种子中检疫截获藜草花叶病毒(Sowbane mosaic Sobemovirus,SoMV)。这是近几年来我国首次截获该病毒。DAS-ELISA和免疫捕捉RT-PCR检测结果均证实这2批样品感染有我国禁止进境的检疫性有害生物—藜草花叶病毒(SoMV)。     

福建口岸首次截获玉米褪绿斑驳病毒和玉米矮花叶病毒

2011年4月,福建出入境检验检疫局技术中心植物检疫实验室采用DAS-ELISA、RT-PCR及序列测定验证的方法,从一批阿根廷进境玉米种子上同时检出玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)和玉米矮花叶病毒(Maize dwarfmosaic virus,MDMV)。这是福建口岸首次检出上述2种病毒。     

四种中国检疫性玉米病毒的研究进展

玉米是我国重要的粮食作物、饲料和工业原材料。随着我国粮食贸易量增加,病原物入侵的风险也随之加大。该文对4种主要的检疫性玉米病毒——玉米褪绿斑驳病毒 Maize chlorotic mottle machlomovirus、玉米矮花叶病毒 Maize dwarf mosaic potyvirus、小麦线条花叶病毒 Wheat streakmosaic tritimovirus和玉米褪绿矮缩病毒 Maize chlorotic dwarf waikavirus的生物学特性及其危害与分布情况进行归纳总结,同时对这些病毒致病与寄主抗病的相关机制以及检测方法的研究进展进行介绍,并针对检疫性玉米病毒的防控,在快速检测体系的建立与抗病毒种质的创制方面提出展望。     

加拿大进口大麦中小麦线条花叶病毒检疫鉴定

小麦线条花叶病毒(WSMV)是我国进境植物检疫性有害生物。2018年5月秦皇岛海关利用反转录PCR(RT-PCR)和双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA), 从加拿大进口的大麦中检出WSMV。同时利用实时荧光定量PCR (Real time RT-qPCR)和序列比对分析方法进行了验证。这是我国首次在进境加拿大大麦中截获WSMV。     

天津口岸首次从美国小麦中截获检疫性有害生物——小麦线条花叶病毒

正2016年11月,天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心在进口的美国小麦中,检出检疫性有害生物小麦线条花叶病毒(wheat streak mosaic virus,WSMV),送至中国检验检疫科学研究院,经病毒专家张永江复核后,确认为WSMV,这是系统内首次在美国小麦中截获该病毒。小麦线条花叶病毒最早的报道见于美国,可引起小麦严重花叶和矮化症状,整个病田植株松散,外     

大麦条纹花叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

大麦条纹花叶病毒为禾本科作物上一种重要的病原,可造成严重的经济损失。该病毒的主要传播方式为种传,因此对种子进行检疫监管是控制病害传播的一种有效途径。本文依据病毒保守序列RNA2beta C蛋白设计引物,研发了一种实时荧光RT-PCR检测方法。经特异性与灵敏度评价,仅对大麦条纹花叶病毒有效,无法对小麦线条花叶病毒、甘蔗花叶病毒及玉米褪绿斑驳病毒的阳性样品进行鉴定;且扩增灵敏度与普通RT-PCR相当,处于0.02 ng/μL水平。该方法相较于已有的检测方法,操作更简便快速,不易污染,灵敏度高,特异性优。此外,本研究结合实时荧光RT-PCR与普通RT-PCR两种检测方法,对未知谷物粉进行大麦条纹花叶病毒的检测鉴定,证实了新方法的可行性。     

基于CLIMEX和MaxEnt的小麦线条花叶病毒在我国适生性分析

小麦线条花叶病毒是世界广泛分布的为害小麦、玉米等大宗粮谷的病毒,给粮谷产业带来严重经济损失,是我国重要检疫性有害生物。本研究以该病毒的基础生物学数据和国内外分布数据为基础,利用CLIMEX和MaxEnt模型分别预测其在中国潜在适生区。两种预测结果均表明其在我国适生范围非常广泛,高风险区在我国中部地区,根据预测结果,提出了防控该病毒的管理措施建议。     

新疆小麦线条花叶病毒(WSMV)的研究

 在新疆五家渠分离到一株病毒,鉴定为小麦线条花叶病毒WSMV,致死温度55~60℃,体外存活期3~7天,稀释限点500~1000倍。病毒颗粒长度700×18毫微米,在感病的小麦叶细胞质中观察到风轮状包含体。其病原由螨(Aceria tulipae)传播,人工接种可侵染大麦(Hordeum vulgare L.)小麦、(Triticum acestivum L.)、黑麦(Secale Cereale L.)、燕麦(Avenae sativa L.)、高粱(Sorghum valgare L.)、黍(Panicum miliaceum L.)、苋色藜(Chenopodium amaranitcolor Cost et Reyn)表现系统花叶病状,可通过介体感染玉米。
该病毒与玉米矮花叶病毒,大麦条纹花叶病毒,马铃薯Y病毒的血清反应为阴性。该病毒在我区的发生量约占小麦上总病毒数量的80%以上。     

玉米褪绿斑驳病毒实时荧光RT-PCR检测方法研究

玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国对外公布的检疫性有害生物。本研究根据该病毒外壳蛋白基因的保守序列,设计得到特异性引物及Taqman荧光探针,建立了MCMV的实时荧光RT-PCR方法,并对其灵敏度与特异性进行了研究。该方法针对2个不同来源的毒株均能得到典型扩增曲线,而没有从小麦线条花叶病毒、玉米粗缩病毒和玉米矮花叶病毒的RNA得到扩增曲线,表明引物与荧光探针具有良好的特异性。针对玉米褪绿斑驳病毒RNA不同稀释度样品,实时荧光RT-PCR检测低限达到10-5稀释度,检测灵敏度要比普通RT-PCR高出100倍。因此,本研究建立的MCMV实时荧光方法具有特异性强、灵敏度高和快速有效的优点。     

进境菜豆种子中南方菜豆花叶病毒的检疫鉴定

南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)是我国禁止进境的检疫性有害生物。应用RT-PCR和实时荧光RT-PCR方法,从西班牙进境的菜豆种子中检疫鉴定出该病毒,这是我国首次在西班牙进境菜豆种子中截获该病毒。     

小麦线条花叶病毒检测及病毒在燕麦种子内的分布研究

小麦线条花叶病毒(wheat streak mosaic virus,WSMV)是禾本科粮食作物上重要的检疫性有害生物,能引起严重花叶、矮化和坏死。本文报道从美国进境的种用燕麦种子中检出WSMV,并研究了该病毒在种子内部的分布。挑选表面带有花纹的种子,利用两对不同的引物进行RT-PCR检测,结果均从样品中扩增出特异性条带。PCR产物测序分析结果表明为WSMV多聚蛋白部分序列。通过对幼苗及种子不同部位的检测,发现WSMV主要存在于种子稃皮及种皮内,而胚及胚乳中则未检出病毒,这一结果有助于提高WSMV的检出效率。     

宁波海关全国邮检首次截获黄瓜绿斑驳花叶病毒

<正>2019年5月,宁波邮局海关从来自德国的邮件中截获非法进境植物种子共计19批, 87袋, 1.13 kg,经实验室检疫鉴定发现,其中1袋种子携带检疫性有害生物——黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV),是全国首次从非法邮寄进境的植物种子中截获该病毒。黄瓜绿斑驳花叶病毒是严重危害葫芦科(Cucurbitaceae)作物生产的重要病毒之一,且传播途径多样化,病毒稳定性强,在世界范围内广泛分布,如欧洲、南美洲、亚洲等,中国局部地区也有报道。随着农产品对外贸易和科研     

北京局从荷兰进境花卉中检出南芥菜花叶病毒

2007年4月，北京检验检疫局植物检验检疫中心对一批来自荷兰花卉种苗进行检验，利用DAS-ELIS和RT-PCR检测方法，并由中国检验检疫科学研究院动植物检疫所复核，结果从样品老鹳草（Geranium hybrid）和一串红（Salvia nemerosa）种苗中检出我国进境植物检疫性有害生物一南芥菜花叶病毒（Arabismosaic virus，ArMV）。这也是我国口岸首次从这两种寄主中检出该病毒。     

小麦丛矮病研究之二关于小麦丛矮病的病原病毒问题

在田间的小麦丛矮病非典型病株申常常分离到北方禾谷花叶病毒(NCMV)及玉米粗缩病毒(MRDV)两种病原物。单独用前者接种,仅表现小麦丛矮症,单独用后者接种,仅表现小麦蓝矮症,即植株矮化、暗绿、分蘖减少,叶坚挺。两者混合侵染时,往往表现两者的混合症状,但以何种病毒占优势而倾向于优势病毒的症状。典型丛矮症植株中电镜检出弹状病毒粒体,40—70×270—400nm尺度与日本报导的稍异。典型丛矮病株中不存在玉米粗缩病毒的粒体。小麦丛矮病毒很可能是北方禾谷花叶病毒的一种地方性株系。     

玉米褪绿斑驳病毒入侵损失指标体系及直接经济损失评估

玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus)是我国进境检疫性病毒,严重危害玉米的生长,给玉米生产带来巨大经济损失。文中根据科学性、系统优化、通用可比及实用性原则,结合玉米褪绿斑驳病毒特点,系统构建了玉米褪绿斑驳病毒损失评判指标体系,共1个一级指标、3个二级指标、11个三级指标。并对其在我国可能造成的直接经济损失作出初步评估,经估算,玉米褪绿斑驳病毒对我国造成的潜在直接经济损失达140.95亿人民币。     

细菌磁颗粒实时荧光RT-PCR检测菜豆荚斑驳病毒

菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)属豇豆花叶病毒科Comoviridae豇豆花叶病毒属Co-movirus成员,主要侵染大豆、菜豆等豆科植物,可通过种子远距离传播,造成大豆产量和品质下降。目前,该病毒主要分布于美国、巴西等国家,在我国属禁止进境的检疫性有害生物。因此,建立一种简便、快捷、灵敏的植物病毒检测方法,对于提高口岸检疫工作效率具有十分重要的意义。