我国近期育成的抗病甜（辣）椒新品种

我国近期育成的抗病甜（辣）椒新品种郭家珍（中国农科院蔬菜花卉所，１０００８１）１甜椒品种１）中椒２号具有复合抗性的早熟保护地品种之一，抗ＴＭＶ（烟草花叶病毒）、耐ＣＭＶ（黄瓜花叶病毒），适于华北、华东、西北、西南等地种植。２）中椒７号抗ＴＭＶ，耐ＣＭ...     

南方菜豆花叶病毒(SBMV)两典型株系特异cDNA和RNA探针的制备及应用

南方菜豆花叶病毒（ＳＢＭＶ）主要有２株系：菜豆株系（ＳＢＭＶ－Ｂ）和豇豆株系（ＳＢＭＶ－Ｃ）,血清学方法不能予以区分。根据已报道的核酸序列设计了２对特异引物,进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆到载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中,序列测定予以证实后利用随机引物法合成放射性ｃＤＮＡ探针,再进行体外转译合成地高辛ＵＴＰ标记的ＲＮＡ探针。２种探针均可分别特异地检测Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ膜上的ＳＢＭＶ－Ｂ和ＳＢＭＶ－Ｃ。ＲＮＡ探针检测ＳＢＭＶ－Ｂ和ＳＢＭＶ－Ｃ灵敏度分别为：０．１μｇ和０．０１μｇ。     

水分胁迫对冬小麦愈伤组织质膜ATP酶和5′—核苷酸酶活性？…

以不同抗旱性冬小麦品种花８４（抗旱）和冀麦２４（不抗旱）幼胚来源的愈伤组织为实验材料,用不同浓度的ＰＥＧ－６０００分别模拟不同强度的水分胁迫（１０％ＰＥＧＷ／Ｖ,－０．８７ＭＰａ;２０％ＰＥＧＷ／Ｖ,－１．９２ＭＰａ）,进行２４ｈ短期液体培养基培养（胁迫）,测定其质膜ＡＴＰ酶和５′－核苷酸酶活性的变化。试验结果表明,在两品种中,两 麦的活性随胁迫强度的增加均呈现“先降后升”的变化,即轻度胁迫时,酶     

应用植病灵、丰产素防治西瓜病毒病

应用植病灵、丰产素防治西瓜病毒病赵庆荣（山东省济宁市任城区甘里铺镇农技站２７２１５３）西瓜病毒病（花叶病），由黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）和甜瓜花叶病毒（ＭＭＶ）及西瓜花叶病毒（ＷＭＶ）侵染所引起。受害株叶片出现黄绿柏间花斑。叶面凹凸不平，新叶畸形，病叶窄...     

黄瓜花叶病毒运动蛋白基因及其缺失突变体在大肠杆菌中的表达和表达产物的纯化

利用ＣＭＶＦｎｙ 株系ＲＮＡ３ 全长ｃＤＮＡ 克隆, 构建了运动蛋白（ＭＰ） 基因５′端缺失突变体和３′端缺失突变体的原核表达载体。ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 分析表明, 经ＩＰＴＧ 诱导, ＭＰ 基因及其２ 种缺失突变体均能在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３） ｐＬｙｓＳ中高效表达。利用分离包含体的方法, 提纯了全长的及Ｃ 端缺失的ＭＰ。光密度扫描分析表明, 提纯产物的纯度达９６ ．６ ％ 。     

应用基因工程创造抗黄矮病毒转基因小麦新种质

应用花粉管通道法和基因枪法将大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系外壳蛋白基因导入小麦栽培品种，获得了抗大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系的转基因小麦株系（文献检索证明世界上无任何其它抗病毒转基因小麦报道）。转基因植株经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，证明ＣＰ基因可稳定遗传到Ｔ３代；经Ｗｅｓｔｅｒｎ测定，证明ＣＰ基因在转基因小麦中已经得到表达；经带毒蚜温室和田间人工接种试验，获得了一些抗病性明显的后代，并得到了ＥＬＩＳＡ验证     

应用基因工程创造抗黄矮病毒转基因小麦新种质

应用花粉管通道法和基因枪法将大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系外壳蛋白基因导入小麦栽培品种，获得了抗大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系的转基因小麦株系（文献检索证明世界上无任何其它抗病毒转基因小麦报道）。转基因植株经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，证明ＣＰ基因可稳定遗传到Ｔ３代；经Ｗｅｓｔｅｒｎ测定，证明ＣＰ基因在转基因小麦中已经得到表达；经带毒蚜温室和田间人工接种试验，获得了一些抗病性明显的后代，并得到了ＥＬＩＳＡ验证     

渗透胁迫对梭梭幼苗体内保护酶活性的影响及其抗旱性研究

分别用浓度为０、－０．５、－１．０、－１．５和－２．０ＭＰａ的ＰＥＧ（６０００）处理梭幼苗１２ｈ，测定体内ＳＯＤ、ＣＡＴ和ＰＯＤ活性，ＭＤＡ和蛋白质含量以及膜透性。结果表明：Ｄ 渗透胁迫小于－１．５ＭＰａ情况下，梭梭幼苗具有较高的ＳＯＤ活性，ＣＡＴ和ＰＯＤ活性随渗透胁迫加强而升高；ＭＤＡ含量和膜透性维持在较低的水平。表明梭纪苗具有较强的抗旱性。     

用于病毒细菌凝集试验的固体免疫剂的研制和应用

用于制备固体免疫剂的液体免疫剂最佳组合：ＴＭＶ,ＣＭＶ和ＴｕＭＶ抗血清的稀释度分别为１／２５６、１／６４和１／１２８,金黄色葡萄球菌菌悬液浓度为１１％、０．０１ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ的ｐＨ值为７．０,甘油浓度为１０％。液体制剂冻干过程的降温方式为二步法。固体制剂贮藏条件的最佳组合：含水量为３．２％,贮藏温度为－１０℃。固体制剂在－１０℃贮藏１年后,采用病毒细菌凝集试验检测ＴＭＶ,ＣＭＶ和ＴｕＭＶ纯病毒     

几种增效剂的增效作用机理研究

以敏感和抗性棉铃虫为试虫,比较测定了ＤＥＦ、ＰＢＯ、ＳＶ１和Ｓ２对氰戊菊酯的增效作用。结果表明,四种增效剂对抗菊酯类药剂的ＫＱＲ棉铃虫具有明显或显著的增效作用,而对于相对敏感的ＨＤＳ棉铃虫,它们的增效作用均比对抗性棉铃虫的弱,甚至没有增效作用。增效作用强度与棉铃虫抗性水平及主导抗性机制有关。生化分析表明,ＰＢＯ和ＳＶ１是通过直接抑制多功能氧化酶系（ＭＦＯ）的某种单加氧酶（如甲氧试卤灵－Ｏ－脱甲基酶     

酵母pac1基因介导对葡萄B病毒的抗性

为明确广谱性抗病毒基因—酵母pac1基因对葡萄B病毒(Grapevine virus B,GVB)的抗性效果,通过农杆菌介导的遗传转化,将pac1基因导入西方烟37B,对转基因植株进行PCR鉴定及Southern blot分析,通过病毒摩擦接种观察症状以及实时荧光定量RT-PCR检测植株体内病毒含量,并对转基因植株抗病性进行初步鉴定。结果表明,目的基因pac1成功导入并整合至西方烟37B基因组,共获得10个转基因株系。不同株系的T1代烟草中阳性植株比例为16.7%~72.7%,表明目的基因可成功遗传到子代。接种病毒后转基因植株普遍延迟发病,但后期症状与非转基因对照相似,其中仅1个转基因株系B6具有不表现典型症状等抗性反应。接种植株病毒含量检测中,所有转基因植株均检测到病毒存在,但表现为抗病的B6株系中病毒含量显著低于非转基因对照,表明该转基因植株虽不能完全抵抗GVB侵染,但对GVB具有耐病性。     

新疆哈密瓜病毒类型及分布

 1981-1984年对新疆主要瓜产区的病毒发生情况进行了调查,可归纳为6个病毒类型。除1类型尚需进一步鉴定外,其他5类型分别属于黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒二号(WMV-2)、南瓜花叶病毒(SqMV)、烟草坏死病毒(TNV)和甜瓜叶脉坏死病毒(MVNV)。在大流行的1983年WMV-2和CMV,WMV-2和SqMV,CMV和SqMV以及WMV-2、SqMV和CMV的混合侵染率比1982年为高。各类型病毒的侵染率在不同地区也有较大的变化。     

西瓜花叶病毒(WMV-2)两株系寄主的病生理研究

 以沈阳农大植保系植物病毒研究室提供的WMV-2两株系WMV-2(1)和WMV-2(2)为试材,它们除寄主范围及在某示植物上有症状反应的差异外,亦导致其寄主的病生理反应不同。如接种到西葫芦叶片后,株系的强弱差别亦能反应到叶片叶绿素含量多少。光合作用强度、电导率及过氧化物同工酶活性等指标上,试验初步观察到WMV-2的两个株系其寄主病生理上,存在某些可以分辨的差异,WMV-2(1)对西葫芦叶片内叶绿素的破坏程度、降低光合强度以及过氧化物酶活性升高的程度等均大于WMV-2(2)。由此,作者等初步认为这些病生理指标可作为区分西瓜花叶病毒株系较好的辅助手段。     

新疆西瓜花叶病毒2号遗传变异的PCR-SSCP分析

新疆地域广阔,各地气候条件差异大.西瓜、甜瓜在新疆种植面积较广,其病毒病的发生和危害较重.西瓜花叶病毒2号(Watermelon mosaic virus 2,WMV-2)是致病的主要毒源之一.前人对WMV-2的研究仅限于病原鉴定以及它对瓜类氨基酸的影响,而对它的遗传变异未做研究.为了深入研究新疆不同地域WMV-2致病性的差异,有必要弄清楚新疆的WMV-2有无遗传变异的发生.PCR-SSCP是一种基于PCR的单链构象多态性(single-stranded conformation polymorphism)分析技术,主要用于DNA已知突变的检测或未知变异的分析[1].     

核基质结合区对马铃薯Y病毒全长非翻译CP基因介导抗病性的影响

 为探索核基质结合区(matrix attachment regions,MARs)对RNA介导的病毒抗性的影响,我们将从烟草中克隆到的核基质结合区TM2构建在包含马铃薯Y病毒全长非翻译CP基因的植物表达载体pRPVYCPN的表达盒的两侧,构建了植物表达载体pRTM2CPNTM2。采用农杆菌介导基因转化法,将表达载体pRPVYCPN和pRTM2CPNTM2转入烟草品种NC89中,分别获得了144株和344株转基因烟草。抗病性检测发现,核基质结合区的存在能明显提高RNA介导抗性的产生效率。在含MARs转基因植株中,抗病植株的比率为15.1%,而不含核基质结合区的转基因植株的抗病比率则为8.3%。这一研究结果对抗病毒植物的分子育种和转基因表达调控有指导意义。     

转基因烟草中PVYN CP基因沉默及其介导的抗病性受温度的调控

 本研究以转不可翻译的马铃薯Y病毒坏死株系外壳蛋白基因(PVY^N CP)烟草的T₃代植株为材料,在获得高度抗病植株并证明转基因植株的抗病性是由RNA沉默介导的基础上,采用Northern杂交及ELISA检测病毒的方法,分析了温度对转基因烟草中RNA沉默以及转基因植株抗病水平的影响。结果表明,低温可以改变转基因植株中已发生的RNA沉默和转基因植株的抗病状态。在15℃低温下生长的转基因植株,转基因产生的RNA沉默被抑制,转基因植株失去了对PVY^N高度抗病的特性,表现感病症状;而在25℃或以上高温(30℃、35℃)下生长的转基因植株,转基因产生的RNA沉默没有发生被抑制的现象,转基因植株对PVY^N病毒的侵染仍保持高度抗病性。     

The partial characterization of melon vein-banding mosaic virus, a newly recognized virus infecting cucurbits in Taiwan

A potyvirus (designated as no. 656) causing mosaic or vein-banding symptoms on melons was isolated and characterized. The virus was mechanically transmitted to 14 herbaceous plant species, and induced mosaic symptoms in most cucurbitaceous plants. Aphis gossypii transmitted the virus non-persistently, and flexuous filamentous virus particles c. 755 nm in length were consistently observed in extracts of the infected pumpkin leaf tissues. Pinwheel and tubular inclusions were observed in the cytoplasm of infected zucchini leaf tissues. The virus was purified from infected pumpkin leaves by isopycnic centrifugation (Cs₂SO₄). The molecular weights of purified capsid and cylindrical inclusion proteins as estimated by SDS-PAGE were 32·5 and 73 KD_a, respectively. In SDS-immunodiffusion tests, antiserum to virus particles from isolate 656 was serologically unrelated to ZYMV, WMV-2, PRV-W and a type W variant of PRV, but antiserum to its cylindrical inclusion protein did produce spur precipitin bands between homologous and WMV-2 antigen wells. However, neither WMV-2 virus particle nor cylindrical inclusion antisera reacted with this virus. Furthermore, this virus was not serologically related to BCMV, BYMV, CYVV, SMV, WMV-M or ZYFV. Based on test results and symptomatology, this virus appears to be a new potyvirus, for which the name melon vein-banding mosaic virus (MVbMV) is proposed.     

正向和反向重复RNA介导的抗马铃薯Y病毒基因工程比较研究

 RNA介导的病毒抗性与RNA沉默现象密切相关。反向重复cDNA序列(IR)的转录产物往往形成双链RNA结构,而双链RNA是诱发RNA沉默的有效因子。据此,本研究通过体外合成马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVY^N-CP)5'端反向重复cDNA序列和正向重复cDNA序列(DR),分别构建植物表达载体pROK-IR和pROK-DR,利用农杆菌介导方法转化烟草NC89,比较这2种转基因烟草在RNA介导抗病性方面的差异。抗病性检测表明,转化IR和DR的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,但转化IR序列可大大提高抗病植株在转基因植株中的比例。分析结果表明所获得的抗病性为RNA介导的抗病性,是RNA沉默的结果。这一研究结果为利用IR策略进行抗病毒遗传育种提供了理论依据,并为讲一步开展RNA介导抗病性的机制研究奠宗了基础。     

Extreme Reduction of Disease in Oats Transformed with the 5' Half of the Barley Yellow Dwarf Virus-PAV Genome

ABSTRACT Barley yellow dwarf viruses (BYDVs) are the most serious and widespread viruses of oats, barley, and wheat worldwide. Natural resistance is inadequate. Toward overcoming this limitation, we engineered virus-derived transgenic resistance in oat. Oat plants were transformed with the 5' half of the BYDV strain PAV genome, which includes the RNA-dependent RNA polymerase gene. In experiments on T2- and T3-generation plants descended from the same transformation event, all BYDV-inoculated plants containing the transgene showed disease symptoms initially, but recovered, flowered, and produced seed. In contrast, all but one of the BYDV-PAV-inoculated nontransgenic segregants died before reaching 25 cm in height. Although all of the recovered transgenic plants looked similar, the amount of virus and viral RNA ranged from substantial to undetectable levels. Thus, the transgene may act either by restricting virus accumulation or by a novel transgenic tolerance phenomenon. This work demonstrates a strategy for genetically stable transgenic resistance to BYDVs that should apply to all hosts of the virus.