臭椿抗烟草花叶病毒活性物质的提取及其初步分离

以烟草花叶病毒为供试病毒,采用生物活性跟踪的方法对臭椿抗病毒活性物质进行了提取与初步分离。结果表明,臭椿乙醇提取物、甲醇提取物和丙酮提取物均有较好的抗烟草花叶病毒作用;通过系统溶剂提取、硅胶柱层析分离和活性筛选,从臭椿乙醇提取物的氯仿极性部位获得两个抗烟草花叶病毒活性组分Fr3与Fr6;经硅胶柱层析进一步分离,氯仿/甲醇梯度洗脱,得到4种相对较纯的活性成分C1、C2、C3、C4。生测结果显示,4种活性成分对烟草花叶病毒具有一定程度的抑制作用,但效果均低于原乙醇提取物,在活体条件下对烟草花叶病毒系统侵染的防治作用不明显。     

江西甘蔗花叶病病原的分子鉴定

 Sugarcane mosaic disease, caused by Sugarcane mosaic virus (SCMV), Sorghum mosaic virus (SrMV), Maize dwarf mosaic virus (MDMV) or Johnsongrass mosaic virus (JGMV) in Potyvirus, is one of the most important viral diseases of sugarcane. In the study, four primer pairs specific to SCMV, SrMV, MDMV and JGMV, respectively, were designed and used to detect 29 sugarcane leaf mosaic samples collected from 9 locations in Jiangxi province. The representative RT-PCR products were sequenced. The results showed that 22 samples were infected by SCMV, three by SrMV, and four were mix-infected by SCMV and SrMV. MDMV or JGMV were not identified in all samples. The result indicates that SCMV is the major pathogen of sugarcane mosaic disease in Jiangxi province, and SrMV is also a pathogen for the disease.     

臭椿酮对植物种子萌发及相关生理生化指标的影响

臭椿酮是一种分布于臭椿中的苦木苦味素类化合物，具有广谱的除草活性。本研究测定了臭椿酮对多种植物种子萌发的抑制作用，及对活性氧（ROS）释放、超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT) 及过氧化物酶 (POD) 等相关生理生化指标及植物细胞有丝分裂的影响，以期为进一步研究臭椿酮的除草作用机制提供参考。结果表明:臭椿酮对油菜Brassica napus、稗草Echinochloa crusgalli、苘麻Abutilon theophrasti、狗尾草Setaria viridis和马唐Digitaria sanguinalis种子萌发具有较强的抑制作用，其IC₅₀值分别为3.74、9.86、9.71、3.87和3.76 μg/mL；臭椿酮对种子吸水能力无明显影响；在1.00 μg/mL质量浓度下，臭椿酮对植物根尖分裂有较强的抑制作用，有丝分裂指数为0.48% (清水对照组为5.85%)，并可引起细胞分裂畸形；SOD、CAT与POD酶活性测定结果表明，臭椿酮可以提高植物的抗氧化能力；活性氧染色结果证明，0.10 μg/mL的臭椿酮就可以诱导活性氧的爆发；细胞死亡率测定结果表明，臭椿酮的存在可导致一定比例的细胞失去活性。本研究表明，臭椿酮可通过多种方式抑制植物种子生长，既能有效抑制植物细胞分裂，又可诱导植物体内活性氧的积累。     

北京地区辣椒病毒病毒原种类及黄瓜花叶病毒株系鉴定

近十年来,经鉴定,明确了北京地区辣椒病毒病毒原有7种,即黄瓜花叶病毒(CMV)占病株样品的55％,烟草花叶病毒(TMV)占26％,马铃薯Y病毒(PXY)占13.2％,烟草蚀纹病毒(TEV)占11.8％,马铃薯X病毒(PVX)占10.4％,苜蓿花叶病毒(AMV)占2％,及蚕豆萎蔫病毒(BBWV)占1.4％。其中CMV可划分为4个株系,即重花叶株系,坏死株系,轻花叶株系和带状株系。     

北京地区辣椒病毒病毒原种类及黄瓜花叶病毒株系鉴定

近十年来,经鉴定,明确了北京地区辣椒病毒病毒原有7种,即黄瓜花叶病毒(CMV)占病株样品的55％,烟草花叶病毒(TMV)占26％,马铃薯Y病毒(PXY)占13.2％,烟草蚀纹病毒(TEV)占11.8％,马铃薯X病毒(PVX)占10.4％,苜蓿花叶病毒(AMV)占2％,及蚕豆萎蔫病毒(BBWV)占1.4％。其中CMV可划分为4个株系,即重花叶株系,坏死株系,轻花叶株系和带状株系。     

云南、福建、湖南烟区烟草花叶病主要病毒种类检测及黄瓜花叶病毒亚组鉴定

 采用抗原直接包被和双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)对采自云南、福建、湖南烟区烟草花叶病样品进行了病毒种类检测,利用三抗体夹心ELISA对黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的亚组类型进行了鉴定。在云南采集的520个花叶病样品中,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、CMV和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)总检出率分别为71.74%、55.01%和6.35%;在福建采集的150个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为94%、24.66%和8.00%;在湖南采集的74个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为58.11%、51.35%和2.70%。部分样品为2种以上病毒复合侵染。云南、福建和湖南采集的64个CMV阳性样品中,属亚组Ⅰ的样品为57个,占89.1%;属亚组Ⅱ的样品为10个,占15.6%;其中3个样品为亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的复合侵染。     

浙江省马铃薯病毒病检测分析

马铃薯病毒病是影响马铃薯产量和品质的主要因素之一,其症状表现为花叶、黄化和卷曲等。2019年4月-5月,在浙江省湖州、杭州、绍兴、宁波、金华、台州和丽水等7个地市的主要马铃薯产区采集了具有典型病毒病症状的马铃薯样品,采用转录组测序和RT-PCR验证的方法进行病毒检测,共筛查并验证出6种马铃薯病毒,包括马铃薯X病毒Potato virus X(PVX)、马铃薯Y病毒Potato virus Y(PVY)、马铃薯S病毒Potato virus S(PVS)、马铃薯H病毒Potato virus H(PVH)、马铃薯M病毒Potato virus M(PVM)以及马铃薯奥古巴花叶病毒Potato aucuba mosaic virus(PAMV)。检测结果表明,在调查的这7个地市中每个地市都具有2种以上的病毒发生,其中PVH作为一种新鉴定的麝香石竹潜隐病毒属成员在除宁波以外的各地区都有发生;此外杭州市、湖州市以及绍兴市均检测出了PAMV。对检测到的PVS、PVH、PVM和PAMV外壳蛋白(coat protein,CP)序列进行系统发育分析表明,这些病毒均存在地域差异性。本研究为浙江省马铃薯病毒的防控奠定了重要基础。     

引起番茄植株坏死病的病毒研究

 2004~2005年,在上海郊区夏番茄上连续发生严重的植株坏死病。表现为番茄植株矮化、顶端坏死、果实畸形和整株枯萎症状,并在叶柄和茎干上出现不规则坏死条斑,具有典型的病毒病特征。通过采集典型病叶、病果,进行病毒分离、dsRNA分析、寄主生物学研究、病毒纯化、病毒蛋白分析、组织病理学与形态学观察和ELISA检测,初步确定是由番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)侵染。经5次心叶烟单斑分离,获得N5分离物,对CP基因克隆测序的结果确定该分离物为ToMV。寄主反应测定显示,N5的寄主反应与常规ToMV株系存在明显区别,主要表现为常规番茄品种上出现严重坏死。进一步接种GCR品系番茄鉴定N5与ToMV-1株系相似。因此,作者认为,在上海地区番茄上流行并引起坏死病的主要病原可能是ToMV-1株系的1个变异株。     

甘肃省南瓜及西葫芦小西葫芦黄花叶病毒病鉴定

利用双抗夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)的方法对甘肃出入境南瓜、西葫芦种子及采自河西地区显症病株叶片进行检测,在种子及病叶组织中均检测到ZYMV病毒,其中南瓜种子带毒批次占12.5%,西葫芦种子带毒批次占11.8%。根据已报道的小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus)基因组核苷酸序列,设计引物扩增其外壳蛋白(CP)基因,以ELISA阳性种子或病叶组织总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,对预期大小的扩增产物进行测序,结果表明扩增获得的核苷酸序列与世界各地的ZYMV分离物CP基因具有高度一致性,综合ELISA检测和RT-PCR的结果,确定南瓜、西葫芦种子可携带ZYMV,且ZYMV是侵染甘肃瓜类作物的重要病毒种类。     

蚜虫传播芜菁花叶病毒和黄瓜花叶病毒 2.以病毒混合物传播

芜菁花叶病毒(TuMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)容易由几种蚜虫以口针携时和非持久性方式传播。我们曾描述过TuMV或CMV在桃蚜、棉蚜、甘兰蚜和萝卜蚜上的传播效率和保持期。观察结果表明TuMV由桃蚜和棉蚜传毒效率很高,CMV的棉蚜传播效率高,但很少由桃蚜传播。本文进一步报道蚜虫从TuMV和CMV双重浸染的植株     

天然抗病毒组合制剂对柿椒病毒病防效试验

经过筛选从苦丁茶、板兰根、酸膜叶蓼、椿叶、摩萝、香菇菌丝体和亚麻油渣中获得几种具抗病毒活性的生物材料。将上述材料抽提物经抗病毒效果及对病毒的作用方式试验,初步明确这些材料具有抗病毒侵染能力。把不同作用点的抗病毒材料经复配得到复配剂G,以烟草花叶病毒为防治对象,田间试验结果证明,复配制剂G可以控制病毒的侵染,对柿椒病毒病防治效果达81.12％,比单独使用各抗病毒材料制剂效果增加16％～58％。     

青蒿中番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒的分子鉴定及相关序列分析

番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)是2种重要的植物病原病毒, 对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年, 在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩以及无症状的青蒿Artemisia caruifolia样品共计14份, 利用免疫金标速测卡和RT-PCR对其病原病毒进行检测。利用免疫金标速测卡检测结果显示, 在所检样品中有9份样品检测出TSWV, 检出率为64.28%, 有3份样品检测出TMV, 检出率为21.43%, 2种病毒复合侵染的检出率同样为21.43%;利用RT-PCR对复合侵染的3份样品进行分子检测, 结果显示, 在3份复合侵染青蒿样品中获得3条TSWV N基因序列、3条TMV cp基因序列和2条TMV RdRp部分序列。TSWV青蒿分离物与分离自云南的TSWV-2分离物相似性最高, 为99.6%;TMV青蒿分离物与分离自辽宁的TMV-Shenyang分离物和分离自云南的TMV-Yongren-1相似性最高, 均大于99.4%。这是首次发现TSWV和TMV 2种不同属病毒复合侵染青蒿。     

不同药用植物提取液对大豆孢囊线虫的控制作用

为寻找新型植物源杀线虫活性物质,研究了8种植物甲醇和无菌水提取液对大豆孢囊线虫2龄幼虫(J2)的室内杀虫活性和对孢囊的田间抑制效果。结果表明,薄荷、苦楝、臭椿、水蓼、商陆、青蒿等6种植物甲醇提取液处理48h后大豆孢囊线虫J2的校正死亡率在75%以上,无菌水提取液处理48h后J2的校正死亡率在55%以上,对大豆孢囊线虫具有较强的毒杀活性。温室盆栽试验表明,臭椿、水蓼的甲醇提取液处理后,大豆孢囊线虫的孢囊减退率分别为40.6%、52.0%,显著高于其他提取液的防治效果,表明臭椿、水蓼可用于大豆孢囊线虫的防治。研究结果将为大豆孢囊线虫生物防治提供新的途径。     

一种侵染桃树的烟草花叶病毒(TMV)的分离鉴定

 从北京地区具有红叶及叶片侧脉失绿等综合症状的桃病株上分离到一种杆状病毒分离物P-1,初步鉴定为一TMV株系;制备抗血清微量沉淀法测定效价为1:1024,并应用于田间样品检测;提纯P-1分离物回接毛桃实生苗后,在上部叶片出现脉间失绿症状,用P-1抗血清作ELISA检测为阳性,肯定了TMV对桃的侵染及致病作用。     

6种植物乙醇提取物对桔小实蝇成虫的毒杀和产卵驱避作用的初步研究

为筛选出对桔小实蝇成虫有效毒杀和产卵驱避的植物乙醇提取物,采用超声提取法制备了紫茎泽兰、臭椿、菖蒲、青蒿、臭牡丹、樟树等6种植物提取物,并测定提取物对桔小实蝇成虫的毒杀和产卵驱避活性。结果表明:紫茎泽兰、青蒿、臭椿和菖蒲的乙醇提取物均对桔小实蝇成虫有较强的毒杀作用,当浓度为100 mg/mL时,校正死亡率均为100%。臭牡丹和樟树的乙醇提取物对桔小实蝇成虫表现出较弱的毒杀性。6种植物乙醇提取物随着浓度的增加,对桔小实蝇成虫的毒杀作用表现增强。产卵驱避活性测定试验中,6种植物提取物均对桔小实蝇有一定的产卵驱避活性,且随着提取物的浓度增大,产卵驱避率增高。当浓度为100 mg/mL时,紫茎泽兰和臭椿的乙醇提取物的效果较好,产卵驱避率分别为84.35%和81.46%,其次是菖蒲的提取物,产卵驱避率为65.15%,青蒿、臭牡丹和樟树的提取物也表现出一定的产卵驱避效果,产卵驱避率分别为52.71%、59.22%和51.02%。     

烟草花叶病毒丁香分离物的分离与鉴定

 从表现花叶症状的丁香病株上获得一病毒分离物,其在电镜下为约300 nm×18nm的杆状粒子;电泳分析表明感病组织中ds RNA大约为6.4kbp,而其外壳蛋白分子量约为17.6k Da。以上实验结果初步将该病毒分离物鉴定为烟草花叶病毒属(Tobamovirus)。根据该属病毒复制酶基因序列设计通用引物,进行RT-PCR检测,扩增出约1000 bp的预期特异片段(Gen Bank AY566703)。将PCR产物克隆后测序,序列分析表明,与从蚕豆中分离的TMV-B株系序列(Gen Bank AJ011933.1)同源性为99.90%。根据烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的RNA CP基因序列设计引物,进行RT-PCR,扩增出约800 bp的预期特异片段(Gen Bank AY56672),序列分析表明,与TMV-B株系序列(Gen Bank AJ011933.1)同源性达99%,上述实验结果表明,该病毒分离物为TMV。由于该分离物与TMV-B在指示植物上的症状存在明显差异,所以,作者把该分离物暂命名为TMV-S。     

河南省地黄病毒病初步鉴定

 利用血清学、RT-PCR并结合核苷酸序列测定等方法,对河南省地黄病毒病进行了初步鉴定。结果表明,烟草花叶病毒(TMV)为侵染地黄的主要病毒;对TMV地黄分离物(TMV-RH) CP基因的序列分析结果表明,TMV-RH与TMV-U1株系CP基因的核苷酸同源性为86.5%,氨基酸同源性为94.3%;与已发表的TMV其它株系CP基因的核苷酸同源性在76.3%~88.5%之间,氨基酸同源性在79.3%~95.0%之间,同源性较低。根据不同株系CP的氨基酸序列进化树分析,推测该分离物可能为TMV的一个新株系。     

侵染广西甜椒的西瓜银斑驳病毒分子鉴定

During a survey in 2019, sweet pepper plants (GXTJ) showing symptoms of ring spots and chlorotic on leaves and fruits were collected in Wuming district of Guangxi province. Serological tests by DAS-ELISA demonstrated that the GXTJ was reacted positively against to antisera of watermelon silver mottle virus (WSMoV), but negatively against to antisera of the tomato spotted wilt virus (TSWV), cucumber mosaic virus (CMV) and tobacco mosaic virus (TMV). Total RNA was extracted and 2 pairs specific primers were designed to amplify the WSMoV N gene sequence by RT-PCR. Two expected fragments (769 bp and 654 bp) were obtained from GXTJ, The results of sequence analysis showed that the sequence of N gene was 828 nt and sharing 100% identity with WSMoV isolates from Taiwan (X78556, U78734). Base on the phylogenetic analysis, the N gene sequence of WSMoV-GXTJ was grouped in the same clades as WSMoV isolates from Taiwan. These results indicate that the virus isolate from sweet pepper in Guangxi is an isolate of WSMoV.     

侵染扶桑的烟草花叶病毒分离物鉴定

从表现叶斑驳症状的扶桑病株上获得一病毒分离物,电镜下可见约300 nm×18 nm的杆状粒子,其与烟草花叶病毒抗血清呈明显的阳性反应,dsRNA约为6.4 kbp。根据烟草花叶病毒(tobacco.mosaic virus,TMV)的RNA序列设计引物,进行RT-PCR检测,扩增出约800 bp的预期特异片段。将PCR产物连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片段的重组子。序列分析表明,与周雪平等报道的序列(GenBank AJ011933.1)同源性达99％。通过生物学、病毒粒子观察、血清学以及分子生物学实验结果,确定该病毒分离物为TMV。