防治大豆孢囊线虫的生防放线菌初步筛选

大豆孢囊线虫是我国大豆主产区的主要病害之一,已造成严重产量损失,而且防治困难,目前人们试图利用生物防治来控制线虫病害,以达到农业可持续发展的目的。本试验采用稀释分离法,从东北和华北等地区采集土样分离获得400株放线菌,通过筛选获得6株对大豆孢囊线虫有强烈抑制作用的菌株,分别是C49、C44、C25-3、C58、H-2和H-4。其中C49和C44菌株的菌悬液对大豆孢囊线虫J2有较强的杀死作用,C25-3、H-2、C49、H-4和C44菌株的发酵液代谢物对大豆孢囊线虫孢囊孵化和J2活性均有不同程度的抑制作用。C49菌悬液处理48h后大豆孢囊线虫J2的校正死亡率达到77.78%;C25-3发酵液4×稀释浓度下,处理24 h后J2校正死亡率达到94.84%;C49、C25-3、C58对孢囊的孵化相对抑制率分别达89.50%、89.50%、88.80%,均与对照差异显著。     

白僵菌及其伴生菌发酵液对线虫的毒力研究

采用发酵液浸没法,以4种线虫作为靶标,对6株白僵菌、7株伴生菌菌株进行了杀线虫活性筛选,以期获得新的、高效的杀线虫生防菌资源。其中:处理24 h对南方根结线虫Meloidogyne incognita 2龄幼虫及大豆胞囊线虫Heterodera glycines 2龄幼虫校正死亡率均达80%以上的菌株仅有白僵菌Snef2598及伴生菌Snef5;供试菌株对水稻干尖线虫Aphelenchoides besseyi的毒力均较低,其中仅有1株白僵菌校正死亡率达到40%以上。处理48 h对南方根结线虫2龄幼虫校正死亡率达90%以上的菌株有白僵菌4株和伴生菌5株;对大豆胞囊线虫2龄幼虫校正死亡率超过90%的菌株有白僵菌3株和伴生菌1株;供试菌株对水稻干尖线虫毒力均较低,校正死亡率达60%以上的菌株有白僵菌3株和伴生菌2株;几乎所有供试菌株,对小杆线虫Caenorhabditis sp.的毒力均很高,处理24 h及48 h的校正死亡率均达97%以上,且被杀死的小杆线虫体壁以及虫体内部物质均被不同程度地消解。研究表明,球孢白僵菌菌株Snef2598及其伴生菌菌株Snef5对4种靶标线虫的毒力均较好,具有进一步研究的价值。     

几种除草剂对大豆孢囊线虫存活和孵化的影响

在实验室内寄主体外测定了8种大豆田常用除草剂对大豆孢囊线虫（SCN）(Heterodera glycines Ichinohe)2龄幼虫（J2）存活率及卵孵化的影响,同时测定了乙草胺和2,4滴丁酯+异丙草胺对温室和田间SCN繁殖的影响。结果表明,所有供试除草剂对大豆孢囊线虫J2均有不同程度的致死作用,其中以乙草胺、2,4滴丁酯+异丙草胺和嗪草酸甲酯处理效果最好,24 h死亡率分别达99.33%、99.33%和89.33%;乙草胺、2,4滴丁酯+异丙草胺、嗪草酸甲酯和精噁唑禾草灵处理7 d,J2的死亡率均达100%,精喹禾灵、精吡氟氯禾草灵和三氟羧草醚处理的死亡率分别为91.33%、81.33%和79.33%;所有除草剂对孢囊孵化都有较强的抑制作用,其中2,4滴丁酯+异丙草胺的抑制作用最强,孢囊孵化率仅为1.25%;乙草胺和2,4滴丁酯+异丙草胺对温室和田间SCN的繁殖均有较强的抑制作用,对大豆根系生长均无不良影响。不同除草剂对大豆种子萌发有一定影响。     

36种中草药提取物杀松材线虫活性研究

为了从中草药中寻找高效杀线虫活性物质,本文测定了36种中草药提取物对松材线虫及其卵的毒杀活性。结果表明,牡丹皮、黄连和大黄3种中药的乙醇提取物杀线虫活性较强,以提取物浓度为10 g/L处理松材线虫72 h后,校正死亡率均为100%。3种中药提取物处理松材线虫72 h后半致死浓度（LC50）分别为1.81、0.2638和1.07 g/L。杀卵活性结果表明,3种中药提取物处理72 h后,线虫卵的孵化率均低于20%,虫卵的校正死亡率均高于60%。利用乙酸乙酯和水作溶剂对3种中草药进行初步的杀线活性成分分离的结果表明,牡丹皮的杀线活性物质存在于乙酸乙酯萃取物中,黄连和大黄的杀线活性物质存在于水萃取物中。3种中药的不同萃取物处理松材线虫72 h后的LC50分别为0.712、2.370和0.067 g/L。     

菌株S01324对燕麦孢囊线虫的杀线活性及其种类鉴定

 燕麦孢囊线虫是我国小麦孢囊线虫病的重要病原之一,为寻找适宜的生防菌株,本研究通过室内生测、室内杯栽试验以及田间管栽试验对菌株S01324的菌体和发酵滤液进行了杀线虫活性测定。室内生测结果发现,菌株S01324对孢囊的寄生率达到100.0%;处理8 d后,菌株发酵滤液原液对卵孵化的抑制率为98.8%,发酵滤液稀释16倍对卵孵化的抑制率仍能达到42.0%;处理24 h后发酵滤液原液对二龄幼虫(J2)的校正死亡率达到100.0%,而处理6 d后发酵滤液8倍稀释液也能杀死全部J2。杯栽试验发现,发酵滤液原液和麦粒培养物处理后,孢囊减少率分别为50.6%和62.1%。管栽试验发现,发酵滤液原液和麦粒培养物处理后,孢囊减少率分别为60.8%和58.9%。通过形态学和序列分析,菌株S01324鉴定为绳状青霉(Penicillium funiculosum)。这是关于绳状青霉杀线活性的首次报道。     

茶籽醇提物对松材线虫及根结线虫室内活性测定分析

为筛选具杀线虫活性的植物材料,测定了茶等5种植物95%乙醇粗提物对松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus,PWN）等的离体活性,并对活性材料的粗粉进行了室外盆栽防效试验。结果表明,茶、银杏和喜树的果实部分95%乙醇粗提物在10.0mg/mL浓度处理线虫60h后,引起PWN校正死亡率分别为100.00%、88.40%、85.77%,呈极强杀线活性;茶籽粗提物对PWN的LC50值为0.0119mg/mL,表现出的最强毒力;另活性材料对南方根结线虫2龄幼虫（Meloidogyne incognita,J2）和水稻潜根线虫（Hischmanmella oryzae）有明显的选择活性。防效试验结果表明茶、喜树和银杏果实粗粉按1.5g/100g土混入盆栽土,与对照相比辣椒的根结病级数分别下降53.33%、46.67%、40.00%,对根结形成控制效果明显。     

放线菌Snea253的鉴定及对大豆胞囊线虫的抑制作用

从土壤中分离筛选到一株具有杀线虫活性的放线菌菌株Snea253,该菌株对多种线虫有毒杀活性。通过形态学特征,生理生化特征及16S rDNA分析,初步鉴定为委内瑞拉链霉菌Streptomyces venezuelae。研究了Snea253菌株代谢物不同倍数稀释液对大豆胞囊线虫卵孵化及二龄幼虫活性的影响,结果表明：发酵原液对大豆胞囊线虫卵孵化的相对抑制率为88．73％;10倍稀释液浓度下,相对抑制率是70．49％,均与无菌水对照差异显著。处理24h后,发酵原液对二龄幼虫的校正死亡率是92．13％,各稀释浓度处理均与无菌水对照差异显著。     

10种植物提取物对南方根结线虫毒杀活性研究

采用触杀法研究了10种植物干材料无水乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物对南方根结线虫2龄幼虫的毒杀活性。结果表明,这10种植物材料的3种有机溶剂提取物对根结线虫都有不同程度的毒杀活性。其中,牡丹皮、丁香、八角茴香、何首乌和地肤子的无水乙醇和乙酸乙酯提取物的毒杀活性最强,48 h校正死亡率均大于90%;八角茴香石油醚提取物也表现出较高毒杀活性,48 h校正死亡率也达到了80%以上。     

几种化学药剂和微生物菌剂对腐烂茎线虫的室内触杀活性

本研究比较了5种化学药剂和4种微生物菌剂对腐烂茎线虫的室内触杀活性,并在此基础上进一步探究了化学药剂与微生物菌剂复合使用的效果。结果表明,在5种供试化学药剂推荐浓度条件下,70%噁霉灵可湿性粉剂26.92 g/L对腐烂茎线虫的触杀效果最好,72 h的校正死亡率可达87.32%,20%噻唑膦水乳剂6.06 g/L与41.70%氟吡菌酰胺悬浮剂5.21 g/L对腐烂茎线虫的触杀活性次之;用以上3种化学药剂100倍稀释液处理腐烂茎线虫,72 h后20%噻唑膦水乳剂2.00 g/L与70%噁霉灵可湿性粉剂7.00 g/L的效果最好,腐烂茎线虫的校正死亡率分别为84.61%和81.68%。在供试的4种微生物菌剂中,推荐用量条件下,有效活菌数≥200.0亿/g抗根结线虫菌剂粉剂500 g/L对腐烂茎线虫的触杀效果最好,72 h的校正死亡率达76.48%,其次为10亿活芽胞/g枯草芽胞杆菌可湿性粉剂66.6 g/L。有效活菌数≥200.0亿/g抗根结线虫菌剂粉剂在推荐用量基础上增加25%用量可提高对腐烂茎线虫的触杀效果,72 h校正死亡率达到85.58%。同时,化学药剂与微生物菌剂在一定浓度条件下复合使用可以显著提高对腐烂茎线虫的触杀效果,其中有效活菌数≥200.0亿/g抗根结线虫菌剂粉剂与70%噁霉灵可湿性粉剂复合处理的效果最好,腐烂茎线虫在48 h的校正死亡率达到93.30%;其次为有效活菌数≥200.0亿/g抗根结线虫菌剂粉剂与20%噻唑膦水乳剂的组合,48 h的校正死亡率达到81.68%。本研究为腐烂茎线虫的有效防控提供了新的思路和方法。     

日本曲霉ZW1发酵滤液的杀线虫活性和发酵条件优化

根结线虫是一类严重为害作物的寄生线虫，分布于世界各地，且寄主范围广。前期试验表明，日本曲霉Aspergillus japonicus ZW1发酵滤液对南方根结线虫Meloidogyne incognita 2龄幼虫（J2）具有毒杀作用，发酵过程中产生表面光滑球形菌丝体和表面辐射状球形菌丝体，且两种菌丝体发酵滤液的杀线虫效果具有显著差异。表面光滑球形菌丝体的发酵滤液处理南方根结线虫J2的校正死亡率在24 h达100%，显著高于表面辐射状球形菌丝体发酵滤液处理的死亡率（12.7%）。本研究通过对菌株ZW1发酵的温度、转速、培养基、光照和黑暗等条件优化表明，菌株ZW1的最优培养温度25℃和转速150 r/min，以Czapek培养基为基础培养基的最优碳源为蔗糖30 g/L和氮源KNO₃3 g/L，光照和黑暗条件下培养不影响菌株ZW1杀线虫活性；评价煮沸和4℃保存发酵滤液的杀虫效果结果表明，发酵液杀线虫活性随着贮藏时间发生变化，发酵液煮沸对菌株ZW1发酵液的杀线虫活性无影响，4℃保存1年的发酵滤液处理J2的校正死亡率仍保持87.8%。菌株ZW1代谢产物对南方根结线虫J2具有良好的毒杀作用，值得进一步研究和开发利用。     

23种植物甲醇提取物对菜青虫的生物活性

在室内研究了23种植物甲醇提取物对菜青虫的生物活性。结果表明,在供试的23种植物中以曼陀罗的生物活性最强,药后24h菜青虫3龄幼虫死亡率达83．33％,其次为鸢尾,药后48h死亡率为80．00％;再次为爵床和玉簪,药后72h死亡率分别为81．85％和79．26％;其它依次为白骨钉、博落茴、羊踯躅、灯台莲,药后72h死亡率均在62．00％以上。药后72h死亡率在40．00％以上的植物还有养耳菊、江南山梗菜、土荆芥、菖蒲、莽草、万年青、金钱吊乌龟等7种,对菜青虫3龄幼虫生物活性不十分明显的植物有清风藤等8种。     

水蓼杀虫活性成分的提取与活性

采用回流提取、萃取等方法,以菜青虫5龄幼虫为试虫,经生物活性测定表明,水蓼95%乙醇粗提物的不同溶剂萃取物对菜青虫具有很强的拒食活性和一定的触杀作用。其中,乙醚萃取物的拒食活性和触杀作用最强。     

Velvetbean (Mucuna pruriens) extracts: impact on Meloidogyne incognita survival and on Lycopersicon esculentum and Lactuca sativa germination and growth

Velvetbean (Mucuna spp.) is a summer annual that has been used as a cover crop to reduce erosion, fix nitrogen and suppress weeds and plant-parasitic nematodes. Crude aqueous extracts (1:15 dry weight plant/volume water) were made from velvetbean plant parts, and various concentrations of the extracts were evaluated in vitro for toxicities to different stages of Meloidogyne incognita (Kofoid and White) Chitwood and for suppression of hypocotyl and root growth and inhibition of germination of tomato (Lycopersicon esculentum L.) and lettuce (Lactuca sativa L.). Germination was only affected by the full-strength extract from leaf blades. Lettuce root growth was the most sensitive indicator of allelopathic activity of the plant part extracts. Lettuce and tomato root growth was more sensitive to the extract from main roots than to extracts of other plant parts, with lethal concentration (LC50) values of 1.2 and 1.1% respectively. Meloidogyne incognita egg hatch was less sensitive to extracts from velvetbean than the juvenile (J2) stage. There was no difference among LC50 values of the extracts from different plant parts against the egg stage. Based on LC50 values, the extract from fine roots was the least toxic to J2 (LC50 39.9%), and the extract from vines the most toxic (LC50 7.8%). The effects of the extracts were nematicidal because LC50 values did not change when the extracts were removed and replaced with water.     

几种植物提取物对萝卜蚜的光活化杀虫活性

采用索氏提取和水蒸馏法,分别获得黄皮种子甲醇、石油醚提取物,万寿菊根甲醇提取物和猪毛蒿精油。以不同的浓度并结合紫外光光照处理,发现黄皮种子甲醇提取物在浓度1～5 mg/mL的浓度范围内,对萝卜蚜的死亡率为60%～90%,光照与非光照处理,其死亡率不存在显著差异;其石油醚提取物浓度5 mg/mL时,则显示出光活化效应,光照与非光照的死亡率分别为34.77%和19.29%。猪毛蒿精油浓度0.5 mg/mL和5 mg/mL时,不显示出光活化效应,但在1 mg/mL时则表现出显著的光活化效果,光照与非光照的死亡率分别为83.65%和24.15%。万寿菊根甲醇提取物浓度5 mg/mL时,光照与非光照的死亡率分别为23.91%和9.74%,表现出光活化效应。     

Larvicidal activity against Plutella xylostella of cordycepin from the fruiting body of Cordyceps militaris

The insecticidal activities of methanol extracts of Cordyceps militaris Link (Ascomycotina: Clavicipitaceae) cultured on fresh pupae of Bombyx mori L against 3rd-instar larvae of Plutella xylostella L were examined using direct contact application. The larvicidal activity was more pronounced in an extract of C militaris fruiting body than in an extract of the pupae separated from the culture. The biologically active constituent of the Cordyceps fruiting body was characterized as cordycepin (3'-deoxyadenosine) by spectroscopic analysis. Responses varied according to dose, exposure time and application method. In a leaf-dipping test, cordycepin at 500 mg litre-1 caused no mortality at 1 DAT (day after treatment) but 78 and 100% mortality at 2 and 4 DAT, respectively, whereas 34 and 88% mortality at 3 and 5 DAT, respectively was observed at 300 mg litre-1. Cordycepin caused body colour change from pale green to dark brown and eventually body lysis. These results suggested that the larvicidal action may be attributable to a direct effect rather than an inhibitory action on chitin synthesis. There was a significant difference in insecticidal activity of cordycepin between leaf dipping (500 mg litre-1) with 100% mortality and topical application (10 micrograms per larva) with 0% mortality, suggesting that cordycepin has stomach action. Cordycepin merits further study as a potential P xylostella control agent or as a lead compound.     

臭椿抗烟草花叶病毒活性物质的提取及其初步分离

以烟草花叶病毒为供试病毒,采用生物活性跟踪的方法对臭椿抗病毒活性物质进行了提取与初步分离。结果表明,臭椿乙醇提取物、甲醇提取物和丙酮提取物均有较好的抗烟草花叶病毒作用;通过系统溶剂提取、硅胶柱层析分离和活性筛选,从臭椿乙醇提取物的氯仿极性部位获得两个抗烟草花叶病毒活性组分Fr3与Fr6;经硅胶柱层析进一步分离,氯仿/甲醇梯度洗脱,得到4种相对较纯的活性成分C1、C2、C3、C4。生测结果显示,4种活性成分对烟草花叶病毒具有一定程度的抑制作用,但效果均低于原乙醇提取物,在活体条件下对烟草花叶病毒系统侵染的防治作用不明显。     

3种植物提取物及其组合对稻田天敌群落的影响

应用生物多样性指数,评价了3种植物乙醇提取物及其组合对稻田主要天敌群落多样性的影响.结果表明,薇甘菊Mikania micrantha Kunth乙醇提取物2.0g·l00mL-1以下及其组合、香泽兰Chromolaena odorata (L.)King & Robinson乙醇提取物2.0g·100mL-1以下及其组合,蜘蛛、捕食性天敌昆虫和寄生性天敌昆虫的多样性指数(H')与均匀度指数(E)较清水对照均有不同程度的提高;薇甘菊乙醇提取物2.0g·100mL-1以上对捕食性天敌昆虫、香泽兰乙醇提取物2.0g·100mL-1以上对蜘蛛和寄生性天敌昆虫均有一定的毒杀作用,且随着浓度的提高和施用次数的增加,其毒杀作用增强;而印楝素(现代苦楝油Melia azedarach L.的提取物)与其他2种植物提取物(0.01g·mL-1)的不同组合均对稻田天敌类群均有较强的毒杀作用.因此建议降低香泽兰乙醇提取物与印楝素的使用浓度或施用次数,以减轻对自然天敌的影响.     

辽宁省大型真菌浸提液及发酵液对线虫的毒力作用

利用从辽宁省采集的206株大型野生真菌的浸提液和部分发酵液,测定其对根结线虫Meloidogyne incognita、胞囊线虫Heterodera glycines、小杆线虫Caenorhabditis sp.和水稻干尖线虫Aphelenchoides basseyi的活性。结果表明：有22种真菌对靶标线虫的致死率达70%以上,且同一菌株的浸提液和发酵液对线虫亦有明显的选择毒性作用。有7株菌浸提液对2种以上靶标线虫的致死率超过90%。蛇头菌Mutinus caninus F149浸提液对南方根结线虫毒力最高,致死率达97.74%,对胞囊线虫和水稻干尖线虫的毒力也超过90%,而对小杆线虫毒力仅为24.04%,因其对人毒性大而未获得纯培养。薄蜂窝菌Hexagonia tenuisF128浸提液对大豆胞囊线虫J2毒力最高,致死率达96.55%,但其发酵液毒力下降;浸提液对根结线虫的毒力仅次于F149,对水稻干尖线虫毒力较弱,但发酵液对干尖线虫致死率却提高至91.38%。块鳞青鹅膏Amanita excelsaF155浸提液对根结线虫的致死率达96.67%,但发酵液仅为70.93%。粉迷孔菌Daedalea biennis F139的浸提液对小杆线虫的毒力最强,致死率达90.40%。松生拟层孔菌Fomitopsis pinicola F130的浸提液与裂褶菌Schizophyllum commune F107的浸提液和发酵液及小灰孢Lycoperdon pusillus F102的发酵液对水稻干尖线虫的致死率均超过95%。血红菇Russula sanguinea F204和大红菇R.alutacea F153的浸提液和发酵液对3种植物线虫的致死率均超过85%,而对小杆线虫的毒力较弱。     

拮抗性根瘤菌对大豆根部病原物的影响研究

 从大豆根瘤中分离到1株对大豆胞囊线虫和大豆根腐病菌有拮抗作用的根瘤菌菌株L396。根据16S rDNA序列同源性、形态学特征和生理生化反应,将该菌株鉴定为费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)。室内测定结果表明,细菌悬液处理胞囊7d,对胞囊孵化的相对抑制率达到82.96%;处理二龄幼虫96h,线虫的致死率达到66.7%;与茄腐镰刀菌对峙培养发现可以形成4mm的抑菌带,可以使腐霉菌发生溶菌现象;该菌株对病原真菌有较宽的抑菌谱,对其它作物病害的防治也具有潜在的应用价值。     

新鲜北美一枝黄花叶对南黄蓟马的拒食活性

南黄蓟马虽为菊科、茄科、葫芦科植物的常见害虫,但未见其侵害菊科植物北美一枝黄花,这促使作者对其拒食活性进行研究。在为期一周的叶片喂食试验中南黄蓟马成虫全部死亡,提示北美一枝黄花中含有拒食活性物质。该植物新鲜叶的甲醇提取物(含有3%蔗糖溶液)的纸片喂食试验显示了类似的拒食活性。通过活性追踪,最终确定北美一枝黄花甲醇提取物的正丁醇萃取部分经反相中压柱色谱以及高效液相色谱分离得到的两个流分具有拒食活性,且两者联合使用拒食效果更加明显。