黄瓜炭疽病菌对杀菌剂的敏感性的优化测定方法研究

本文以黄瓜炭疽病菌(GloeosporiumorbiculareArs)为研究对象,采用随机试验设计,比较了不同培养基、孢子萌发方法对病菌孢子萌发的影响,建立了一套测定炭疽病菌分生孢子对杀菌剂敏感性的简易方法。结果表明:不同培养基培养的分生孢子,均以使用玻片水琼胶表面萌发法的萌发效果最好,且以PDA培养基培养的分生孢子在玻片水琼胶表面萌发率最高、最稳定。此外使用该方法测定了黄瓜炭疽病菌对福美双、百菌清的敏感性。     

稻曲病菌无性孢子萌发及在不同培养基上生长特性

采用不同的培养基研究稻曲病菌孢子萌发及病菌生长特性.结果表明,稻曲病菌厚垣孢子和分生孢子在蒸馏水和2%蔗糖溶液中3h不能萌发;6h时分生孢子、厚垣孢子分别萌发产生次生分生孢子和分生孢子;新采集的黄色和黑色稻曲球上的厚垣孢子在2%蔗糖溶液中的萌发率均高于其在蒸馏水中的萌发率.供试的9种固体培养基中,以马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)最适于病原菌生长.生长速率为2.54 mm/天;病菌在7种培养液中振荡培养7天后,在马铃薯葡萄糖培养液(PDB)中菌丝干重最大,达24.5mg/mL,在大米汁和马铃薯蔗糖培养液(PSB)中产生的分生孢子量最多,孢子浓度分别为2.63×107和2.28×107个/mL;而固、液态的Czapek、稻秆汁和胁本哲氏培养基均不适宜于稻曲病菌的培养.     

促进草莓炭疽病菌大量产孢的方法

为了促进草莓炭疽病菌在人工培养基上快速、大量地产生分生孢子,本研究在PDA培养基中添加不同量的酵母提取物,并结合涂断气生菌丝的方法,测定了不同处理对草莓炭疽病菌分生孢子产生的影响。结果发现,在PDA培养基中添加0.1%酵母提取物最适合草莓炭疽病菌（Colletotrichumtheobromicola）的产孢。将培养3 d菌落上的气生菌丝涂断,2 d后可产生大量分生孢子。因此,PDA培养基中添加0.1%酵母提取物,结合菌丝涂断的方法,可显著提高草莓炭疽病菌的产孢量。该方法所用营养成分简单,用时短,操作简便。     

黄瓜白粉病菌接种及对杀菌剂敏感性测定方法

建立了孢子悬浮液接种黄瓜子叶测定黄瓜白粉病菌杀菌剂敏感性的简便方法。比较了白粉病菌分生孢子悬浮液涂抹法和喷雾法接种黄瓜幼苗子叶的效果,结果表明,涂抹法发病率高,均匀度更好;测定了接菌后不同时间施药,白粉病菌对己唑醇、腈菌唑、三唑酮、甲基硫菌灵和百菌清等5种杀菌剂的敏感性,结果表明,接菌后96h施药较为敏感,测得的EC50较小。最后确定接种及毒力测定方法为:接种时白粉病菌分生孢子悬浮液使用十二烷基硫酸钠水溶液分散悬浮,孢子浓度为15×10倍显微镜下每视野30~40个,接种后96h施药,发病后直接利用病斑数来计算毒力测定结果。该方法可用于黄瓜白粉病菌抗药性监测和对杀菌剂敏感性测定。     

辣椒炭疽病菌对嘧菌酯的敏感性测定

 从江苏和海南省随机采集分离获得45个辣椒炭疽病菌单孢菌株,根据孢子形态鉴定其病原菌为Colletotrichum gloeosporioides和C.capsici,其中C.gloeosporioides占总菌株数的64.4%.筛选出甘油琼脂(AEA)培养基和水琼脂(WA)培养基,分别作为产孢法和孢子萌发法测定辣椒炭疽病菌对嘧菌酯敏感性的适宜培养基.通过孢子萌发法测定2种病原菌45个菌株对嘧菌酯的敏感性范围在0.009~0.091μg/mL之间,平均EC₅₀为(0.047±0.040)μg/mL.其中29个C.gloeosporioides菌株和16个C.capsici菌株的平均EC₅₀值分别为(0.051±0.047)μg/mL和(0.041±0.024)μg/mL.研究发现旁路氧化酶抑制剂水杨肟酸(SHAM)对嘧菌酯抑制分生孢子萌发有协同增效作用,且嘧菌酯抑制辣椒炭疽病菌菌丝生长的能力较弱.     

稻曲病菌分生孢子的生物学研究

 本文对稻曲病菌分生孢子的一些生物学特性进行了研究,结果表明,基质养分对分生孢子萌发影响较大,纯水不利于孢子萌发,PSA最适于孢子萌发,葡萄糖则强烈抑制孢子萌发,马铃薯煮汁既可抵消葡萄糖的抑制作用,又可刺激孢子萌发。分生孢子在琼脂面上比在液滴中萌发率高。分生孢子萌发的适宜温度为22~31℃,以28℃最好。分生孢子萌发对pH值敏感,以pH 6~7最适宜。用振荡培养法获取分生孢子,培养10 d后,孢子的萌发力开始下降。分生孢子的存活对水的依赖性强,在水中保存8 d萌发力不变,在100% RH中8 d萌发力略有降低,而在25% RH中5 h萌发力即迅速下降。根据这些特性,作者对分生孢子在田间的动态作了一些推测。     

黄麻炭疽病菌产孢和保存的初步试验

试验表明,黄麻炭疽病菌进行组织分离时,表面消毒以0.1％升汞溶液处理2分钟或70％酒精处理1分钟效果最好。在PDA培养基上,病菌生长适温25—30℃,分生孢子形成适温30—32℃。利用大麦、高粱、麻皮等天然培养基可以大量产生供接种用的分生孢子。大麦粒培养基上的干孢子,置冰箱中可保存1年。     

硫酸铜对柑橘和山麦冬炭疽病菌的影响

在PDA培养基培养条件下,研究不同浓度的CuSO4对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌生长状况、产孢量、孢子萌发率的影响。试验结果表明,与对照组相比,1 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响最大,完全抑制了这两种病菌的生长和产孢;0.2 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响也非常明显,不仅较大程度地抑制了这两种病菌的生长和产孢,而且使这两种孢子的萌发率均低于19%;0.1 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响较大;0.02 g/mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响较小。由此可以初步得出,0.2 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的抑制效果显著,可以作为抑制这两种病菌的临界浓度。     

亲和病原菌诱导黄瓜组织结构抗病性机制

炭疽病菌预先接种黄瓜可以诱导其产生对褐斑病的抗性.经炭疽病菌(1.0×106个孢子/mL)诱导48h后,黄瓜对褐斑病的抗性最大可达97.83%.在同种马铃薯葡萄糖液体培养基中培养,这两种病原菌的竞争力差异显著,黄瓜炭疽病菌能够获得更多的营养物质,生长旺盛,而褐斑病菌的生长则受到严重抑制.经苯胺兰染色发现,炭疽病菌诱导后黄瓜叶片中胼胝质的积累量显著增加.此外,黄瓜炭疽病菌与褐斑病菌的侵染方式存在一定的差异,前者可以通过气孔或直接穿透细胞壁侵入寄主.而后者只能通过直接穿透细胞壁侵入寄主.     

枯草芽胞杆菌HZB02的分离及其室内抑菌效果

从施用SupperGreen的小白菜‘凤山5号’根际土壤中分离筛选到1株对白菜炭疽病菌(Colletotrichum higginsianum)有较强拮抗活性的细菌菌株HZB02。该菌株对白菜炭疽病菌孢子萌发、菌丝生长、盆栽白菜发病等均有明显的抑制能力。根据菌落形态、菌体电镜观察及16SrDNA序列测定结果判断,该菌株属于Bacillus subtilis subsp.subtilis。进一步研究不同培养基条件及添加大豆油对HZB02抗生作用的影响,发现其在SYMA、PDA培养基上抑制炭疽病菌菌丝生长的能力最佳,此外其SYM、PDB发酵液对炭疽病菌孢子萌发的抑制作用亦最强,然而它的TSB发酵液则显示出最优抑制菌丝生长的效果。研究发现在SYM与PDB中添加5%大豆油的发酵液可显著提升HZB02的抑菌功效。     

梅花炭疽病菌生物学特性研究

梅炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｍｕｍｅ）在２０％梅叶汁培养基上菌丝生长最好,而且产孢速度快,其次为ＰＳＡ培养基,病菌分生孢子在５种营养液中均可萌发,以梅叶汁中萌发率最高,葡萄糖液次之,清水对照最差。适合菌丝生长的最适温度为２５℃,适合分生孢子萌发的最适ｐＨ值为５．４,分生孢子在相对湿度８８．５％以上才能萌发,以相对温度１００％中萌发率率最高,在水滴中萌发率较低,持续光照有利于菌丝生长和     

马铃薯炭疽病菌的生物学特性及培养性状研究

对马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)生物学特性及不同碳、氮源的利用能力等进行了研究.结果表明,马铃薯炭疽病菌菌丝在5～40℃均能生长,最适生长温度为30℃;分生孢子在25℃时萌发率显著高于其他温度,在液态水中萌发率显著高于其他相对湿度,pH6.7时萌发率显著高于其他pH条件(P＜0.05);薯块浸提液中萌发率显著高于马铃薯根、茎、叶和土壤浸提液(P＜0.05);分生孢子萌发对光不敏感,在有无光照条件下都能萌发,且差异不显著.除D-阿拉伯糖和氯醛糖外在其他碳源培养基上菌落直径显著高于对照(P＜0.05);硝酸铵对该菌生长有显著促进作用(P＜0.05),而碳酸铵、L-谷氨酸、尿素、大豆蛋白胨、L-组氨酸、L-精氨酸、亮氨酸、蛋白胨和甘氨酸有显著抑制作用(P＜0.05);不同培养基对该菌生长影响不同,在PDA培养基上生长最快,在水琼脂培养基上生长最慢,且在不同培养基上菌落形态有差异.     

丹皮酚对植物病原真菌的体外抑制作用

为揭示丹皮酚在牡丹体内的抗菌机制,采用生长速率法测定了丹皮酚对供试病菌菌丝生长的抑制作用;用涂布平板法测定了丹皮酚对供试病菌孢子萌发及形成的影响。结果表明,丹皮酚含量与病菌菌落直径线性增长及菌丝生物学产量的相对抑制率呈正相关,在丹皮酚含量0.08、0.4mg/mL培养液中培养禾谷丝核菌和茄病镰刀菌5天,对菌丝干重的抑制率分别为79.81%和55.08%。丹皮酚对供试病菌的孢子萌发无作用,但孢子萌发后,其芽管基部膨大、顶端膨大及中间局部膨大。丹皮酚推迟病菌分生孢子梗的形成时间,降低分生孢子的形成数量,在0.20、0.24mg/mLPSA培养基上培养玉蜀黍赤霉和茄病镰刀菌10天,对分生孢子形成的抑制率分别为100%和33.33%。     

紫苏和薄荷提取物对茶炭疽病病菌(Gloeosporium theae sinesis)的抑制作用

采用95%乙醇浸提紫苏和薄荷获得其提取物,用菌丝生长速率法测定了提取物对茶炭疽病病菌菌丝的抑制作用,采用水琼脂培养法测定提取物对病菌分生孢子萌发的抑制效果,并在显微镜下观察菌丝生长和孢子萌发的状态。结果表明,2种植物提取物对茶病疽病病菌菌丝和分生孢子萌发均有较好的抑制作用。在40 mg/m L浓度下,2种植物提取物对茶病疽病病菌菌丝生长抑制率均在75%以上,紫苏提取物在48 h内抑制率达100%,对其病菌孢子萌发的抑制率最高可达84.28%。显微观察发现,各浓度下茶病疽病病菌菌丝生长和孢子萌发形态均有不同程度畸变,紫苏提取物浓度越高畸变越严重。     

红树内生细菌AmS2菌株对芒果炭疽病菌的抑制作用

为了解红树内生细菌AmS2菌株对芒果炭疽菌的抑菌机制及其分类学地位,采用生长速率法测定了菌株抗菌活性对芒果炭疽菌菌丝生长及孢子萌发的有效中浓度(EC50)。结果表明:经形态与培养特征观察、生理生化测定及16S rDNA序列分析,将AmS2菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。抗菌活性物质分析发现,菌株可分泌产生易溶于水和甲醇等强极性溶剂、对热稳定、pH4~7条件下较稳定的非蛋白类抗菌活性物质。毒力测定表明,菌株抗菌物质粗提物对芒果炭疽病菌菌丝生长和分生孢子萌发的EC50分别为0.9772 mg/mL和1.9027mg/mL,当提取物浓度3.0mg/mL时,可致使病菌分生孢子壁消解。     

爵床提取物对辣椒炭疽病菌的抑制作用及其苗期防效

爵床(J usticia procumbens L.)是一种传统的中药材.为探明爵床提取物对辣椒炭疽病菌的抑制作用,采用生长速率法和孢子萌发法分别测定了爵床提取物对辣椒炭疽病菌菌丝生长、孢子产生和孢子萌发的抑制作用,采用苗期盆栽试验观察爵床提取物对辣椒炭疽病的防治效果.结果表明,爵床甲醇提取物可抑制辣椒炭疽病菌菌丝生长、孢子产生和孢子萌发,其活性随着浓度的提高而增强,抑制中浓度分别为4.23、2.16和2.98 mg/mL.通过对爵床提取物处理后病菌孢子萌发形态显微观察,发现病菌孢子芽管长度受到明显抑制甚至不能萌发.当提取物浓度为16mg/mL时对苗期辣椒炭疽病的防效达73.08％.     

采用孢子萌发法测定化合物对黄瓜白粉病菌的生物活性

接种黄瓜白粉菌后16 h的黄瓜叶片用透明胶带在子叶表面粘孢子取样的平均发芽率与用台盼蓝染色后在光学显微镜下调查的发芽率分别为83.7%和85.0%,t测验无显著差异,表明透明胶带取样的发芽率可以代表黄瓜叶片上白粉病菌孢子的发芽率。采用孢子萌发法和叶碟法分别测定了醚菌酯、植物源活性组分大黄素甲醚(P3D)对8个黄瓜白粉菌菌株的EC₅₀。统计结果表明:采用两种方法测定醚菌酯P、3D对黄瓜白粉菌的EC₅₀的相关系数的平方值分别为0.880、.99,表明两种方法的测定结果有很强的相关性;采用该孢子萌发法可评价化合物对植物专性寄生病菌如白粉菌孢子萌发的生物活性。     

柑橘黑斑病菌生物学特性研究

本文测定了不同培养基、温度、pH、光照条件对柑橘黑斑病菌柑橘叶点霉(Phyllosticta citricarpa)菌丝生长和孢子萌发的影响,以明确其生物学特性。结果表明,该菌最适生长的培养基为燕麦片琼脂培养基(OA);菌丝最适生长温度为25～30℃,最适pH为5～7;在12h光暗交替条件下生长最好,全黑暗条件下生长最慢。分生孢子萌发最适温度为25℃,最适pH为6,以在0.2%葡萄糖溶液中的萌发率最高。菌丝和分生孢子在55℃水浴处理10min均失活。     

白粉病菌重寄生物——粉霉芽枝孢

寄生于枫杨白粉病菌上的重寄生物,经过调查研究,确定为芽枝孢(Cladosporium)的一个种。经与近似的重寄生芽枝孢比较,存在形态上和培养特性方面的区别,因此,确定应另立新种,称为粉霉芽枝孢(C.erysiphicola sp.nov.)。该菌不但能寄生于枫杨白粉病菌上,还能侵染枸杞白粉病菌及小麦白粉病菌等。对上述几种白粉病菌分生孢子的侵染,出现穿入孢子、缠绕菌丝、腐蚀孢子及使孢子萎缩等现象,有希望作为一种生物防治剂。该菌在培养基PSA及PDA上生长繁殖良好,其分生孢子除在不同营养液中萌发外,在蒸馏水中也能萌发。萌发的温度在27℃左右。     

山东省辣椒上尖孢炭疽复合种对吡唑醚菌酯的敏感基线及吡唑醚菌酯增效配方筛选

为明确山东省辣椒炭疽病菌对吡唑醚菌酯的敏感性,延缓其抗性发展及降低防治成本,在该省主要辣椒产区采集并经单孢分离获得175株尖孢炭疽复合种,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了病原菌群体对吡唑醚菌酯的敏感性,同时测定了吡唑醚菌酯与甲基硫菌灵、多菌灵、代森锰锌、戊唑醇和咯菌腈5种杀菌剂分别混用对尖孢炭疽复合种的联合毒力。结果表明:吡唑醚菌酯对尖孢炭疽复合种菌丝生长和孢子萌发的EC50值范围分别为0.056~0.530和0.002~0.027 μg/mL,平均值为（0.273 ± 0.067）和（0.014 ± 0.019）μg/mL,其敏感性频率分布呈连续单峰曲线,符合正态分布,可作为田间抗性监测的敏感基线;不同采集地菌株对吡唑醚菌酯的敏感性存在一定差异,其中采自菏泽市的菌株敏感性最高,而采自潍坊市的菌株敏感性最低;吡唑醚菌酯与甲基硫菌灵按体积比1:3和3:1复配,对抑制尖孢炭疽复合种的菌丝生长和分生孢子萌发均表现为增效作用,其中按体积比1:3混用时增效作用最明显,增效系数分别是4.82和3.94。结果可为吡唑醚菌酯的合理使用提供理论依据。