荧光假单胞菌拮抗菌株对烟草疫霉的抑菌机制及控病效果

为探讨烟草根际生防细菌对烟草疫霉Phytophthora nicotianae的抑菌机制,从重庆地区连作烟田健康烟株根际土壤分离获得5株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens拮抗菌株。通过平板对峙及代谢产物抑菌试验筛选对烟草疫霉具有高效拮抗作用的菌株,其中,P-72-10菌株抑菌效果最强,抑菌带半径达13.0 mm,相对抑制率为68.57%,且该菌株代谢产物对烟草疫霉菌丝生长有明显的抑制作用,相对抑制率达25.39%～46.03%;显微观察发现该菌株可引起烟草疫霉菌丝的分支增多,菌丝顶端膨大呈畸形,多数菌丝中间或顶端细胞的细胞壁加厚、原生质浓缩和产生类似厚壁孢子的细胞。在温室盆栽条件下P-72-10菌株对烟草黑胫病也表现出良好的控病效果,对抗病和感病品种的相对防效分别为53.57%和66.37%。     

一株烟草黑胫病高效拮抗菌的筛选、鉴定及生防潜力评价

采用稀释涂布平板法、对峙培养法和牛津杯法从烟草黑胫病土壤中分离和筛选出21株对烟草黑胫病有拮抗作用的细菌,其中,XCS007菌株拮抗作用最明显,运用微观形态学、生理生化特征及16Sr DNA基因序列鉴定其为一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。菌株XCS007菌液及其粗提物对烟草黑胫病病菌菌丝的抑制率分别是91.80%和97.11%;盆栽试验结果显示,其防治效果分别是83.18%和83.55%;大田试验结果显示,其防治效果分别达到78.64%和79.54%。     

拮抗放线菌TA21对烟草根黑腐病菌的抑制及其控病作用

菌株TA21是一株从重庆烟区土壤中筛选出的对烟草根黑腐病菌Thielaviopsis basicola有较强拮抗作用的放线菌,为了明确其抑菌效果和控病作用及其在烟草根黑腐病生防中的应用潜力,本文进行了菌株TA21抑菌活性检测和温室控病测试;并通过形态学、生理生化和分子分类的方法确定其分类地位。室内测定试验表明,菌株TA21对烟草根黑腐病菌的抑菌带宽达12.5mm;温室控病试验发现其对烟草根黑腐病防治效果达85.3%。无菌滤液试验表明,在试验浓度范围内无菌滤液均能有效抑制烟草根黑腐病菌菌丝生长、减少孢子萌发。根据菌株形态特征、培养性状、生理生化特性、细胞组分及16S rDNA序列分析,确定菌株TA21为链霉菌属吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus。     

拮抗放线菌JD211的抑菌活性及其鉴定

本实验室从江西庐山珙桐树中分离筛选出的一株拮抗放线菌,编号为JD211。为明确放线菌JD211菌株在植物病害生物防治中的应用潜力,采用菌丝生长速率法测定其抑菌作用,通过多相分类法研究其分类地位。结果表明：JD211的粗提物可显著抑制水稻纹枯病菌、稻瘟病菌、烟草黑胫病菌、根霉、胶孢炭疽病菌、犁头霉、西瓜枯萎病菌等真菌的生长,其中对稻瘟病菌、烟草黑胫病菌等植物病原真菌的相对抑制率高达90％以上。根据形态特征、培养特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析结果,将菌株JD211初步鉴定为奈良链霉菌（Streptomyees naraensis）。     

烟草疫霉拮抗细菌B44R-1的筛选及其生防效果

为获得烟草疫霉Phytophthora nicotiana的优良拮抗菌,从烟草根际土壤和根系中分离对烟草疫霉具有较好拮抗作用的菌群,并从中筛选具有较强抑菌效果的拮抗菌株。通过形态学、生理生化试验、16S rDNA基因测序分析鉴定拮抗菌株种属,评价其防病效果及对烟草的促生作用。结果表明,从烟草根际土壤和根系分离得到拮抗菌群39个,并从中筛选得到拮抗效果较好的菌株B44R-1,初步鉴定其为皮特不动杆菌Acinetobater pittii。菌株B44R-1对烟草黑胫病的防效达到55.37%,对烟株根系生长发育影响明显,烟株鲜重、干重、株高、茎围、叶数和最大叶面积相比对照均有提高。本研究筛选获得对烟草黑胫病菌的拮抗菌不动杆菌,对烟草黑胫病防治效果和促生作用显著,具有较好的生防潜力。     

海洋生境棘孢木霉TCS007菌株的鉴定及抑菌活性

为研究一株分离自南极海洋沉积物的菌株TCS007的分类地位、菌株抗逆性能及抑菌活性，采用形态及ITS序列分析对菌株进行了鉴定；比较了低温、高温及高盐3种胁迫条件下与正常条件下TCS007的菌丝生长差异，以评价菌株的抗逆性能；通过平板对峙试培养法测定了TCS007对16种植物病原真菌的抑菌谱；用乙酸乙酯提取TCS007发酵滤液中的代谢产物，并通过菌丝生长速率法测定了其对油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum的抑制活性。结果显示:TCS007菌株被鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum，并展现出在高盐胁迫下具有良好的抗逆性能；其对16种供试植物病原真菌的抑制率在56.65%~87.62%之间，其中对小麦全蚀病菌Gaeumannomyces graminsis的抑制活性最高。TCS007发酵滤液乙酸乙酯提取物对油菜菌核病菌具有明显的抑制作用，其EC₅₀值为38.80 μg/mL。研究结果表明，TCS007及其代谢产物具有拮抗植物病原真菌的生防功能，具有开发成生物农药的潜在价值。     

新疆盐环境棉花黄萎菌拮抗放线菌的筛选及菌株TRM42561的防效测定和鉴定

为充分发掘新疆盐环境中生防活性放线菌,以棉花黄萎菌为靶标,从805株新疆盐环境放线菌中筛选获得14株拮抗菌,其中菌株TRM42561抑菌活性最强,其发酵液对棉花黄萎菌的抑菌圈直径达26.33 mm,且对6种常见植物病原真菌和4种细菌均有较好的抑制效果,抗菌谱广。室内抑菌活性表明,拮抗菌TRM42561发酵液对棉花黄萎菌菌丝生长抑制率为83.75%,孢子萌发抑制率为68.75%。田间试验结果表明,拮抗菌TRM42561对棉花黄萎病的田间防治效果显著,在3次施药后的第15和30 d,其防治效果分别达到33.06%和41.65%。通过菌株形态特征、培养特性、生理特性以及16S rDNA序列分析,确定拮抗菌TRM42561为娄彻氏链霉菌Streptomyces rochei。     

贵州省烟草黑胫病菌对烯酰吗啉的敏感性

为了明确烟草黑胫病菌对烯酰吗啉的敏感性现状,从贵州省各地采集了47株烟草黑胫病菌株,分别测定了菌丝生长和游动孢子囊形成对烯酰吗啉的敏感性.结果表明,烯酰吗啉对烟草黑胫病菌菌丝生长和孢子囊形成的抑制基本一致,对菌丝EC50范围为0.792 6～4.232 7μg/mL,平均为2.476 8μg/mL;对孢子囊的抑制作用略强,EC50范围为0.394 5～4.625 3μg/mL,平均值为2.040 0 μg/mL.统计分析表明,烟草黑胫病菌47个菌株菌丝生长和孢子萌发对烯酰吗啉的敏感性符合正态分布,不同菌株对烯酰吗啉的敏感性有显著差异,而且菌株对烯酰吗啉的敏感性与其地理来源有一定的相关性.     

短小芽胞杆菌AR03对烟草炭疽病的抑制作用

为测定短小芽胞杆菌AR03菌株对烟草炭疽病菌的室内拮抗活性和盆栽防治效果,采用平板拮抗法初步筛选菌株拮抗活性,采用抑制菌丝生长法及抑制孢子萌发法筛选该菌株菌悬液的抑菌浓度,采用喷雾法进行防治效果测定。AR03菌株对烟草炭疽病菌的拮抗活性很强,能显著抑制菌丝生长、孢子萌发和病害发生,浓度为1×107 cfu/mL的AR03发酵液能有效抑制菌丝的生长和孢子萌发,AR03菌悬液(1×108 cfu/mL)对炭疽病的盆栽防治效果为83.03%,与对照药剂25%三唑酮可湿性粉剂的防治效果相当。AR03菌株是一株优良的广谱高效生防菌株。     

NYS-4菌株发酵液抑菌活性成分的分离及初步结构鉴定

NYS-4菌株是从秦岭地区土壤中分离到的一株放线菌。采用管碟法及抑制菌丝生长速率法测定了NYS-4菌株发酵液对多种病原细菌和真菌的抑菌活性。结果表明:NYS-4菌株发酵液对白菜软腐病菌 Erwinia carotovora var.、猕猴桃溃疡病菌 Kiwi ulcer disease germs 和枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 3种病原细菌具有较强的抑菌活性;对西瓜枯萎病菌 Fusarium oxysporum f.sp .Niveum 、烟草赤星病菌 Alternaria alternate 、油菜菌核病菌 Sclerotinia sclerotiorum 等8种病原真菌菌丝生长亦具有较强的抑制作用。采用离子交换树脂吸附、凝胶柱层析、反相高效液相色谱等方法,结合高效液相色谱-质谱联用(HPLC-ESI-MS/MS)技术,对NYS-4菌株发酵液的活性次生代谢物进行了分离和鉴定,从中分离鉴定出14个链丝菌素(streptothticin)类化合物,其中, N -乙酰化链丝菌素A、 N -乙酰化链丝菌素B、 N -乙酰化链丝菌素B酸和链丝菌素B酸经初步鉴定为新化合物。     

几丁寡糖对烟草黑胫病的控制效应及其机制

在室内条件下,采用菌丝生长速率法测定了几丁寡糖对烟草黑胫病菌的抑制作用,继而在温室盆栽和人工接种条件下,分别测定几丁寡糖、木霉、几丁质、几丁寡糖+木霉、几丁寡糖+木霉+几丁质等5种处理对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,几丁寡糖在离体条件下对烟草黑胫病菌菌丝生长无抑制作用,但在盆栽试验中对烟草黑胫病具有显著防治效果。5种处理中,几丁寡糖单独处理对烟草黑胫病的防治效果最高,为57.81%,其次为几丁寡糖+木霉+几丁质和几丁寡糖+木霉处理,分别为53.49%和52.49%。在温室条件下对烟草植株施用几丁寡糖及人工接种黑胫病菌后10天内,几丁寡糖能显著提高烟草体内的SOD、POD、PPO和几丁质酶活性,且活性峰值分别比对照提高96.30%、136.36%、10.34%和9.10%。     

烟草疫霉拮抗菌株P 72 10的鉴定及其拮抗代谢 产物 初步分析

 为探讨烟草根际生防细菌的生防机制,从重庆地区连作烟田健康烟株根际土壤中分离筛选到1株对烟草疫霉具有较强拮抗作用和对黑胫病具有良好防效的细菌菌株P-72-10。根据培养性状、形态特征、生理生化特性、基因组DNA的(G+C)mol%含量测定以及16S rDNA基因序列分析确定该菌株的分类地位。该菌株菌落乳白色,能产生水溶性荧光色素,革兰氏染色反应阴性,菌体杆状、大小(8.1~16.2)μm×(1.8~4.8)μm,单端生鞭毛,不形成芽孢。The BIOLOG GN2 结果显示该菌株属于假单胞菌属Pseudomonas。该菌株基因组DNA的(G+C)mol%含量为 60.72 mol%。16S rDNA基因序列分析显示该菌株与假单胞菌属荧光假单胞杆菌多个菌株的序列同源性达到99%,GenBank上的登录号为：HQ888871。结合其形态特征和生理生化特性,将菌株P-72-10鉴定为荧光假单胞杆菌P. fluorescens。平板检测拮抗代谢产物结果表明：该菌株具有分解纤维素、蛋白质和结合Fe ³⁺的能力,但不能分解几丁质。     

拮抗细菌B8对烟草黑胫病菌的抑制作用及其菌株鉴定

从烟草根际土壤中分离到对烟草黑胫病菌及其它植物病原菌具有抑制作用的菌株B8,平板对峙培养抑菌带内菌丝畸形、原生质凝集或外渗。其发酵原液和发酵液的无菌滤液均能抑制烟草黑胫病菌和蜡状芽孢杆菌;离体叶片接种法测定其发酵液对烟草黑胫病的防效,结果表明预防作用达100%。室内盆栽试验表明B8菌株发酵液对烟草黑胫病的预防作用可达78.1%,优于治疗作用。该菌菌体杆状,芽孢侧生、椭圆形,经形态学、生理生化性状和16S rDNA序列测定,将其鉴定为侧孢短芽孢杆菌。     

烟草黑胫病拮抗菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

为获得对烟草黑胫病（tobacco black shank）具有较好拮抗作用的菌株,从食腐昆虫美洲大蠊Periplaneta americana肠道分离纯化得到1株对烟草黑胫病具有较强抑制作用的D5-8菌株,拟进一步明确该菌株的分类地位,优化其发酵条件并测定其对烟草黑胫病的防治效果。利用形态特征、生理生化特性观察及16S rRNA基因序列分析对D5-8菌株进行鉴定;以细菌发酵液OD₆₀₀值及对病原菌的抑制率为指标,对其发酵培养基和发酵条件进行单因素试验及正交试验;通过室内盆栽试验,明确菌株D5-8对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,经平板对峙试验发现菌株D5-8对烟草寄生疫霉的抑制率达66.80%;通过形态特征和生理生化特征初步确定菌株D5-8为芽胞杆菌属Bacillus,结合16S rRNA基因序列分析鉴定菌株D5-8为特基拉芽胞杆菌Bacillus tequilensis;其最适培养基：牛肉浸膏8 g,酵母浸粉5 g,麦芽糖10 g,蒸馏水1000 mL;最佳的发酵条件为温度28℃、初始pH 6、转速210 r/min、装液量30 mL、接种量2%、培养时间60 h、光照时间4 h;盆栽试验结果表明,发酵条件优化后D5-8发酵液（10⁸cfu/mL）对烟草黑胫病的保护防效和治疗防效可达66.89%和53.72%,均高于原始发酵液的61.84%和51.83%。研究结果为特基拉芽胞杆菌D5-8生防菌剂的开发及其对烟草黑胫病的防治应用提供了理论依据。     

烟草黑胫病和根黑腐病生防假单胞杆菌的筛选与鉴定

为获得对烟草黑胫病和根黑腐病具有双重防病效果且能够促进烟草生长的假单胞杆菌，采用稀释涂布法从40份土壤样品中分离出201株细菌，通过平板对峙和含毒介质法，筛选出对烟草黑胫病和烟草根黑腐病病原菌均具有良好拮抗作用的菌株PA2101和PG3402。盆栽促生试验表明，菌株PA2101和PG3402能协调地改善烟草地上部分的生长和烟草根系发育，均在一定程度上增加了烟草的株高、叶面积、株鲜重、根鲜重、叶片数和根长，提高了烟草的根冠比和根活力。盆栽试验结果表明，菌株PA2101对烟草黑胫病和根黑腐病的防效分别为70.11%和62.67%，均高于其对照药剂；菌株PG3402对两种病害的防效分别为60.92%和60.00%，与对照药剂相当。抗性标记菌株的定殖试验结果表明，菌株PA2101和PG3402在接种后第29 d能定殖于烟草根际土壤和根内，在烟草茎和叶内也能长时间存在，表明两菌株能够良好定殖。16S rDNA序列、菌落形态和生理生化性状分析表明，菌株PA2101为铜绿假单胞杆菌Pseudomonasaeruginosa，菌株PG3402为格拉纳达假单胞杆菌Pseudomonas granadensis。综上所述，菌株PA2101和PG3402对烟草具有良好的促生作用，并对烟草黑胫病和根黑腐病有较好的防病效果，是具有生防潜力的菌株。     

撕裂蜡孔菌对烟草黑胫病的防治效果及对烤烟生长的影响

为探讨撕裂蜡孔菌Ceriporia lacerata菌株HG2011对烟草黑胫病的防治效果和对烤烟的促生作用,利用该菌株制备发酵液和固体菌剂,通过拮抗和盆栽试验研究其对烟草黑胫病病原菌烟草疫霉Phytophthora nicotianae生长的抑制作用、对黑胫病的防治效果及对烟苗生长和养分吸收的影响。结果表明:撕裂蜡孔菌菌株HG2011能显著抑制烟草疫霉生长;在带毒平板试验中,含20%发酵液的培养基对烟草疫霉菌丝生长的抑制率达54.50%;在平板对峙试验中,菌株HG2011能使烟草疫霉菌丝扭曲、畸形和空泡化,最终完全侵入并覆盖烟草疫霉菌落。在盆栽试验中,施用撕裂蜡孔菌固体菌剂可降低发病烟苗叶片中的丙二醛含量,并能维持正常的细胞膜透性,使烟苗黑胫病发病率比单独接种烟草疫霉处理显著降低了15.55%～37.77%,且预防效果71.16%优于治疗效果17.98%。在化肥配施高量菌剂处理中烟苗的株高、最大叶面积和生物量均最高,比单施化肥处理显著增加9.08%、36.28%和11.84%;烟苗氮、磷、钾的吸收量比单施化肥处理显著增加11.29%、38.73%和12.79%。表明撕裂蜡孔菌菌株HG2011能有效防治烟草黑胫病,刺激烟苗生长、促进养分吸收,表现出良好的防病促生效应。     

多粘类芽胞杆菌LB-9的诱变及抑菌防病效果研究

为获得对烟草疫霉菌生防效果更佳的拮抗菌株，对多粘类芽胞杆菌LB-9进行基因诱变。利用原生质体电转化法，构建了菌株LB-9的Tn-5转座插入突变体库，获得约2000个转化子，通过平板对峙法筛选出对烟草疫霉菌拮抗能力增强且效果稳定的突变菌株3个，其中编号为A13的突变菌株对烟草疫霉菌的抑制效果达到80%以上，与原始菌株LB-9的抑菌率相比提高了20%以上。采用室内盆栽接种法研究了正突变菌株A13对烟草黑胫病的防控效果，并利用实时荧光定量PCR法初步分析了其诱导烟株体内抗病相关基因的表达。结果表明，正突变菌株A13处理烟株7 d后，对烟草黑胫病的防效高于原始菌株LB-9，防效可达80%以上，同时可诱导烟株体内不同信号通路中抗性相关基因的上调表达。本研究为多粘类芽胞杆菌插入诱变育种方法研究提供了理论支撑，对烟草黑胫病的生物防治具有重要意义。     

放线菌11-3-1对油菜菌核病的防治作用与菌株鉴定

为了进一步明确放线菌11-3-1菌株的生防效果和分类地位,采用平板对峙法和活体组织法测定其抑菌效果。放线菌11-3-1菌株对供试的15种植物病原真菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,尤其对油菜菌核病菌具有明显抑制作用,抑菌带可达到19.67 mm。显微镜观察显示,11-3-1菌株对油菜菌核病菌菌丝生长有明显影响,可致使油菜菌核病菌菌丝体畸形、扭曲和原生质浓缩外渗等。11-3-1菌株发酵原液对油菜菌核病的室内药效达96.91%,效果显著优于对照组和药剂对照组。根据形态观察、生理生化特性和16S rDNA序列比对分析,初步鉴定该菌株为黄色长孢链霉菌Streptomyces longisporoflavus。