中国对虾血细胞吞噬功能的研究↑（*）

本研究建立了检测中国对虾血细胞吞噬功能的橙检测法。该检测法可同时直观地观察中国对虾血细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬和杀伤情况：一项试验可同时获得吞噬和杀伤百分率，吞噬和杀伤指数四个指标。用本法研究四种免疫增强剂对时虾血细胞吞噬功能的作用，结果表明，他们均可提高血细胞对金葡菌的吞噬活力以及血淋巴中的溶菌活力和酚氧化酶活力，但经统计学分析，结合攻毒试验的结果，浙农Ⅰ号和湖州Ⅰ号的免疫效果优于湖州Ⅱ号和湖州Ⅲ号。     

中国对虾血红细胞吞噬功能的研究

本研究建立了检测对虾血细胞吞噬的功能吖啶橙检测法，该检测同时直观地中国对虾血细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬和杀伤情况；一项试验可同时获得吞噬和杀伤百分率，吞噬和杀伤指数四个指标。用本法研究四种免疫增强剂对对，血细胞吞功能的作用，结果表明，均呆提高血细胞对金葡菌的吞噬活力以及血淋巴中的溶菌活力和酚氧化酶活力，但经统计学分析，结合攻毒试验的结果，浙农Ｉ号和湖州Ｉ号的免疫效果优于湖州Ⅱ号和湖州Ⅲ号。     

中国对虾血淋巴凝集素的血凝活性与促噬活性

1999年8月，运用血凝活性测定法分别检测中国对虾血淋巴弹簧集素，血淋巴液、血细胞、肌肉、肠、肝胰腺和甲壳的血凝活力，并运用吖啶橙血细胞吞噬测定法检测血细胞的吞噬活力，同时测定了经注射中国对虾副粘病毒提纯液后血淋巴凝集素血凝活力及血淋巴液抗菌活力、酚氧化酶活力、溶菌活力，结果表明，血淋巴凝集素主要分布在血淋巴液和血细胞中；该凝集素对人（A、B、O型），鸡和兔红细胞及其醛化红细胞的凝集具有一定专一性；对血细胞吞噬异物具有促进功能；注射副粘病毒提纯液后，血淋巴凝集素凝集活力变化和血淋巴液抗菌活力，酚氧化酶活力、溶菌活力变化相一致。     

双齿围沙蚕与赤子爱胜蚓对凡纳滨对虾生长和免疫指标的影响

以鲜活饵料双齿围沙蚕（Perinereis aibuhitensis）、赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）和人工配合饵料投喂凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei），并测定各种饵料对其生长和免疫指标的影响。结果表明，沙蚕和蚯蚓单独投喂或与人工配合饵料配合投喂都可显著提高凡纳滨对虾的生长速率，但用沙蚕单独投喂的对虾成活率较低。蚯蚓与人工配合饵料配合投喂可显著提高对虾血清中抗菌活力、溶菌活力、酚氧化酶活力和血细胞数量；蚯蚓单独投喂可显著提高血清中抗菌活力、酚氧化酶活力和血细胞数量，对血清中溶菌活力作用不明显。沙蚕与人工配合饵料配合投喂可显著提高对虾血清中抗菌和溶菌活力．但对血清中酚氧化酶活力和血细胞数量变化作用不明显；单独投喂沙蚕对所测各项免疫指标影响均不显著。研究结果证实：利用蚯蚓和沙蚕可显著提高对虾的生长速率，但蚯蚓的饵料效果优于沙蚕。[中国水产科学，2006，13（4）：561—565]     

中国对虾淋巴器的酚氧化酶

酚氧化酶 (ｐｈｅｎｄｏｘｉｄａｓｅ ,ＰＯ)作为一个类补体系统[1] 在甲壳动物中的作用日益受到人们的重视 ,国内外学者在酚氧化酶与免疫的关系方面作了许多工作。一致的看法是 ,微生物细胞壁中的多糖成份可激活酚氧化酶原系统[2 ] 。甲壳动物血细胞中的酚氧分酶原系统被激活后可促进血细胞的吞噬与包襄 ,介导凝集和凝固 ,产生杀菌物质[1-4 ] 。但对于ＰＯ与病毒的关系则研究较少 ,在被病毒感染的对虾组织中直观地显示ＰＯ活性及ＰＯ对病毒的作用目前尚未见报道。对虾淋巴器被认为是对虾的免疫器官[5,6] 。本工作以健康和患病中国对虾的淋…     

聚甘露糖醛酸对中国对虾免疫相关酶活性和溶菌溶血活性的影响

在中国对虾的血清、肌肉和肝胰提取液中有酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、过氧化物酶（ＰＯＤ），其中，ＡＣＰ和ＡＬＰ在肝脏中的活性最高。采用１．０％的聚甘露糖醛多糖作为免疫药物，对中国对虾进行注射刺激后，发现血清中的溶菌和溶血活性有显著提高；肝胰腺中的ＡＣＰ和ＡＬＰ活性也有明显增加，在７２ｈ，ＡＣＰ活性由对照组的３．２１Ｕ．１００ｍＬ＾－１提高到９．６９Ｕ．１００ｍｌ＾－１，ＡＬＰ活性由４     

中国对虾血细胞吞噬活动中超氧阴离子（O↓（2）↑（-））的产生

用Zymosan A对中国对虾（Penaeus chinensis）血细胞进行体外刺激,用NBT还原法测定血细胞吞噬活动中产生O2^-的过程。结果表明,中国对虾血细胞在经刺激诱导的吞噬活动中有明显的呼吸爆发和O2^-的产生;不同浓度的Zymosan A对血细胞产生O2^-的影响不同。Zymosan A在0.25-1.0mg/ml对随质量浓度的增加,产生O2^-的量也增加,但当Zymosan A质量浓度继续增加到1.5和2.0mg/mL时,产生O2^-的量反而下降。用同一浓度的Zymosan A对不同密度血细胞进行刺激产生O2^-的强度也不同,随着密度的增加,血细胞产生O2^-的量增加。SOD、NEM和碘代乙酰胺（Iodoacetamide）对血细胞吞噬过程中O2^-的产生有抑制作用;Hg^2 、Cr^3 、Pb^2 、Cu^2 和Zn^2 5种重金属离子也能抑制血细胞产生O2^-;不同个体的中国对虾血细胞产生O2^-的能力不同。NBT还原法测定中国对虾血细胞吞噬时产生的O2^-可以作为检测对虾免疫状态的指标。     

脂多糖、多巴胺与蛋白激酶抑制剂联合作用对凡纳滨对虾血细胞吞噬率、胞吐酚氧化酶活力的影响

研究了脂多糖(LPS)、多巴胺(DA)对凡纳滨对虾血细胞吞噬、胞吐及信号通路的影响。结果表明,LPS、DA对凡纳滨对虾血细胞数量、吞噬率和胞吐酚氧化酶活力影响显著(P<0.05),LPS、DA与血细胞孵育30min后,高浓度(1～10mg/L或μmol/L)处理组对虾血细胞数量均随作用浓度增大而明显下降,胞吐酚氧化酶活力则显著升高,LPS处理组对虾血细胞吞噬率显著升高,而DA处理组对虾血细胞吞噬率则表现出明显的下降趋势。同时在LPS作用下,分别加入蛋白激酶C(PKC)、酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂chelerythrine、genistein后,凡纳滨对虾血细胞吞噬和胞吐作用均受到明显的抑制作用,抑制剂对吞噬的抑制效果为genistein>chelerythrine,对胞吐的抑制效果则为chelerythrine>genistein;在DA作用下,加入蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89后,血细胞吞噬作用得到增强,但对胞吐作用无明显影响,chelerythrine、genistein均抑制对虾血细胞的胞吐作用,抑制剂的作用效果为chelerythrine>genistein,两种抑制剂对吞噬均无显著影响。     

中国对虾血细胞凝集素的性能研究↑（*）

对中国对虾(Penaeuschinensis)的血细胞凝集素部分性能的研究结果表明,中国对虾的血淋巴中存在可凝集多种脊椎动物血细胞的因子—血细胞凝集素,凝集活力的大小同中国对虾的健康状况有密切关系,发病对虾体内的凝集素活力明显下降。该凝集素具有较强的热稳定性,100℃处理20min仍具活性;并且具有广泛的pH作用范围,可在pH3～11产生凝集作用;适当增加盐度(18～36)可以提高该凝集素的凝集活性;其活性还会被EDTA强烈抑制;但对Ca2 、Mg2 、Mn2 等离子和多种糖类不敏感。在中国对虾血细胞的细胞膜上未发现有凝集鸡红细胞的活性物质。     

免疫增强剂的特点及其在水产动物中的应用方法(下)

正5.真菌与真菌多糖将从蘑菇中提取的β-1,3-葡聚糖投于鱼类后,可以增强供试鱼白细胞吞噬活性,提高补体和溶菌酶的活性,促进特异性抗体的生成。将这种β-1,3-葡聚糖投于对虾后,也可以增强血细胞的吞噬活性和提高酚氧化酶的活性。由于免疫刺激剂激活了免疫功能,可以有效地预防鲤(Cyprinus carpio)的气单胞菌病、五条的链球菌病和日本囊对虾的弧菌病与病毒性血症。     

Effect of yeast polysaccharide on some hematologic parameter and gut morphology in channel catfish (Ictalurus punctatus)

A study was conducted to investigate the effect of dietary yeast polysaccharides on some hematologic parameters and intestinal morphology of channel catfish. Channel catfish were fed diets containing yeast polysaccharides at 0 (control), 0.1, 0.2, or 0.3?% for 7?weeks. Each diet was provided to 10 channel catfish specimens (5.82?±?0.13?g initial weight) replicated 3?times in individual 250?L fiberglass tanks. Some hematologic parameters, leukocyte phagocytic activity, and intestinal morphology were monitored. After 7?weeks of trial, 0.2?% yeast polysaccharides resulted in significantly higher (P?相似文献   

三种免疫添加剂对草鱼非特异性免疫功能的影响

在饲料中添加不同剂量的Vc、酵母多糖和壳聚糖,连续投喂42d,并在试验的第14、28、35和42天取样检测,研究其对草鱼血清溶菌酶活性、血清超氧化物歧化酶活性（SOD）活性、血清碱性磷酸酶（AKP）活性、补体C3、含量丙二醛（MDA）含量和血液白细胞吞噬活性共6种指标的影响。结果显示：实验组与对照组相比,饲料中添加Vc可以提高血清溶菌酶活性、SOD活性、AKP活性、补体C3含量和血液白细胞吞噬活性高,并降低MDA含量。添加酵母多糖可以提高血清溶菌酶活性、AKP活性、补体C3含量和血液白细胞吞噬活性,并降低MDA含量,但不能提高SOD活性。添加壳聚糖可以提高血清溶菌酶活性、SOD活性、AKP活性、补体C3含量和血液白细胞吞噬活性,但不能降低MDA含量。饲料中添加Vc、酵母多糖和壳聚糖均对草鱼的非特异性免疫功能具有一定的促进作用。     

茯苓多糖对中华鳖非特异性免疫功能的免疫调节作用

研究了口服茯苓多糖对中华鳖(Trionyxsinensis)非特异性免疫功能的影响。试验共分3个组,在基础饲料中添加20·0mg/kg茯苓多糖作为试验组,添加500·0mg/kg酵母细胞壁作为免疫刺激剂对照组,以投喂基础饲料作为空白对照组。连续投喂28d后,测定中华鳖血液中白细胞的吞噬活性、血清溶菌活力和补体活性。结果表明:在中华鳖饲料中添加茯苓多糖和酵母细胞壁能显著提高中华鳖白细胞的吞噬活性(t检验,P<0·05),而2个试验组之间中华鳖血液中白细胞的吞噬活性没有显著差异(t检验,P>0·05);2个试验组中华鳖血清中补体C3和C4的活性与对照组之间呈显著差异(t检验,P<0·05),而试验组之间无显著性差异(t检验,P>0·05)。本研究结果说明在中华鳖饵料中添加茯苓多糖和酵母细胞壁对中华鳖的非特异性免疫功能有增强作用。     

Effect of yeast polysaccharide on the immune function of juvenile sea cucumber, <Emphasis Type="Italic">Apostichopus japonicus</Emphasis> Selenka under pH stress

In the present study, we evaluated the effect of yeast polysaccharide (YSP) on the immune function of Apostichopus japonicus at different pH levels. Juvenile sea cucumbers were fed artificial feed containing 0.5% YSP. Phagocytic activity and activity of lysozyme (LSZ), acid phosphatase (ACP) and alkaline phosphatase (ALP) were measured under pH stress after 24 h. The results showed that the phagocytic index, the activity of LSZ and ACP in the intestines increased at pH 10.0, and ACP activity in the body wall decreased. The phagocytic rate and ALP activity in the intestines were not different from the control group. The phagocytic index was also not different from the control group at pH 5.5. The activity of LSZ and ACP in the intestines and the activity of ALP increased, while the activity of ACP in the body wall decreased. The phagocytic rate of YSP group increased and the phagocytic rate of control group decreased. Thus, this study indicated that YSP can modulate the non-specific immunity of A. japonicus, and the reasonable dose of YSP might be used as the immunostimulants in sea cucumbers farming under pH stress.     

中国对虾线粒体16S rRNA基因序列分析

中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)是我国海洋渔业重要的经济虾种之一。本研究以相应引物对野生群体和人工培育第1代、第4代、第5代、第6代群体(CP1、CP4、CP5、CP6)的各2个个体的线粒体16SrRNA基因片段进行了PCR扩增和序列测定分析。分析结果表明，测得的16SrRNA基因片段长为520bp，10个中国对虾个体间无碱基差异，其A、T、G、C含量分别为171bp(32．88％)、176bp(33．85％)、104bp(20．00％)、69bp(13．27％)，AT含量明显高于GC含量。利用其中长度为413bp的同源序列，以环斑鼓虾(Alpheus armillatus)为外群探讨了对虾科(Penaeidae)中的对虾属、美对虾属、明对虾属、囊对虾属和滨对虾属5个属(Penaeus，Farfantepenaeus,Fenneropenaeus,Marsupenaeus,Litopenaeus)12种对虾间的系统关系。以NJ法构建的分子系统树显示可将以上12种虾类分为两个大群：中国对虾和斑节对虾先聚到一起后与日本对虾聚成一大群；美对虾属、滨对虾属个体各聚成1支后聚成一大群，最后与中国对虾等聚到一起。同时可见，小褐美对虾(F．subtilis)与保罗美对虾(F.paulensis)、南方滨对虾(L.schmitti)与白滨对虾(L.setiferus)种间的亲缘关系较近。     

云芝多糖和副溶血弧菌灭活苗对斜带石斑鱼免疫功能的影响

采用注射云芝多糖和副溶血弧菌灭活苗的方法免疫斜带石斑鱼后,测定了受免鱼的吞噬细胞的吞噬活性、杀菌功能和免疫保护率。结果表明,云芝多糖组在第3天,吞噬细胞的吞噬百分比(PP)达到峰值(90%),显著高于对照组(P0.05),然后开始下降,到第7天即与对照组相当(P0.05);30 m in和60 m in的杀菌率显著提高(P0.05)。灭活苗组和云芝多糖+灭活苗组的PP值和杀菌率显著高于对照组(P0.05),并维持在较高水平,但2组之间差异不显著(P0.05);用副溶血弧菌攻毒后,斜带石斑鱼的免疫保护率达87.6%。由此可见,灭活苗不仅能提高斜带石斑鱼的特异性免疫力,而且也能增强吞噬细胞的吞噬和杀菌活性等非特异性免疫力。     

饲料中水解鱼蛋白对中国对虾非特异免疫的影响

在中国对虾基础饲料中用水解鱼蛋白替代0%、5%、10%和15%鱼粉蛋白,制成饲料投喂中国对虾30d,实验结束取样测定对虾生长指标并进行血细胞记数,以肝胰脏中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶活性和血清中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、一氧化氮合酶活性为非特异免疫指标,探讨水解鱼蛋白作为免疫增强剂对中国对虾非特异性免疫效应的影响。结果表明,5%水解鱼蛋白替代鱼粉蛋白组对虾肝胰脏中酸性磷酸酶活性为0.54U/gprot,显著高于对照组和其他替代组(P<0.05);血液中总的血细胞数量最多,血清的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和溶菌酶活性均显著高于对照组和其他替代组(P<0.05),并且特定生长率最高。说明水解鱼蛋白作为免疫增强剂对中国对虾的非特异性免疫功能具有明显的增强作用。     

中国对虾人工选育群体的同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳技术对中国对虾人工选育子一代、子四代、子五代群体和黄、渤海野生群体遗传变异进行了同工酶比较分析。结果表明，在检测的4个群体肌肉组织的13个基因位点中，MDH-2^*、GPI^*、MPI^*、PGM-2^*和PGM-3^*5个位点呈多态。PGM-3^*位点上的变异程度最高，其等位基因频率呈递减趋势；人工选育群体在MPI^*位点上出现^*c基因，其等位基因频率呈递增趋势。中国对虾野生群体同人工选育群体的多态位点比例相同，为38．46％；其平均观察杂合度分别为0．0577、0．0377、0．0263、0．0231，呈依次递减趋势。中国对虾野生群体和人工选育群体之间的遗传距离平均值为0．0062，远大于子四代和子五代间的遗传距离。人工选育中国对虾群体的遗传多样性已有所降低，但在某些基因座位上出现了特异基因，这是否可作为具有良好生长特性和抗逆能力的人工定向选育群体的基因标记尚有待进一步研究。