巢式PCR法鉴定猪早期胚胎性别的研究

根据猪SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据猪β-珠蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了猪胚胎性别鉴定的PCR反应体系。公猪可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母猪只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。由于巢式PCR只需3～8个细胞就可以在紫外灯下看到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

醋酸洋红染色技术在大菱鲆幼鱼生理性别鉴定中的应用

综合运用肉眼观察、活体压片-醋酸洋红染色和组织切片—H.E.染色3种方法对大菱鲆Scophthalmus maximus L.幼鱼进行性别鉴定.结果表明,在所有采集的1 217尾全长8.3～21.5cm、体重9.0～183.9 g的大菱鲆幼鱼样品中,体重＞90 g的269尾幼鱼和体重10～90 g的790尾幼鱼,可用肉眼直接观察鉴定性别；体重10～90 g的另外154尾幼鱼,可采用活体压片方法鉴定性别；体重＜10 g的4尾幼鱼,性腺难以剥离,则需组织切片的方法鉴定性别.对活体压片性别鉴定结果进行组织切片抽样验证表明,体重＞10 g的幼鱼,均可以采用活体压片方法准确地鉴定出性别,其准确率可以达到100％.本研究验证了采用活体压片-醋酸洋红染色技术在大菱鲆幼鱼生理性别鉴定中具有很高的准确性,它不仅有利于全雌育种中对幼鱼快速进行性别鉴定,而且可以应用于商品苗性别的快速鉴定.     

大黄鱼性别特异SNP标记的开发与验证

大黄鱼是我国养殖量最大的海水经济鱼类,其雌鱼生长显著快于雄鱼,但两性的外部形态差异不明显,也没有异形性染色体,依靠传统方法无法对其活体准确进行生理性别和遗传性别的判别与鉴定,需要开发性别特异的分子标记。本研究从2尾雌鱼和2尾雄鱼、以及分别由50雌鱼与50尾雄鱼组成的2个混合样品的基因组重测序数据比较中筛选与性别显著关联的SNP位点,对其中11个位点分别设计引物在15尾雌鱼和15尾雄鱼中扩增出PCR产物进行Sanger测序验证,鉴定出1个与性别完全连锁的位点(SNP6,15尾雌鱼均为纯合、15尾雄鱼均为杂合)。然后,设计等位基因特异性PCR引物,其中包括2条雌性与雄性通用引物和1条雄性特异引物,在闽—粤东族与岱衢族大黄鱼合计近2 200个个体中进行扩增,结果在全部雌鱼中都只扩增出1个348 bp的条带,而在全部雄鱼中还扩增出1个194 bp的Y染色体特异条带,检出率达到100%。研究表明,大黄鱼属于XX♀-XY♂类型的性别决定。本研究鉴定出一个雄性特异SNP标记,并建立了一种新的大黄鱼遗传性别鉴定技术,为大黄鱼单性育种、基因组选择育种和性别决定分子机制研究提供了重要的技术手段。     

1种快速鉴定金钱鱼遗传性别的方法

金钱鱼(Scatophagus argus)是我国东南沿海名优养殖鱼类, 具有 XY 性别决定系统, Dmrt1 是其性别决定候选基因。金钱鱼生长具有性别二态性, 雌鱼生长快于雄鱼。目前缺乏快速鉴定金钱鱼遗传性别的分子标记, 阻碍了其性别控制育种技术的建立。本研究以公布的金钱鱼基因组数据, 在 Dmrt1 附近设计多对标记引物, 并通过 PCR 扩增验证标记的性别特异性。其中, 标记引物 Dmrt1-Marker-4-F/R 在雌鱼中仅扩增出一条 593 bp X 染色体条带, 而在雄鱼中能扩增出 593 bp 和 693 bp 两条条带, 分别来自 X 和 Y 染色体, 表明该标记为共显性标记。利用该标记检测我国南海沿岸 3 个不同地理群体 213 尾金钱鱼的遗传性别与表型性别完全一致。此外, 快速 DNA 提取试剂盒提取的片段较短 DNA 样品也可用于该对标记引物准确鉴定遗传性别。本研究建立了一种快速、准确、经济可靠的金钱鱼遗传性别鉴定方法, 将旨为促进金钱鱼性别控制育种技术的建立, 并为金钱鱼性别决定与分化机制研究提供依据。     

家鸡囊胚细胞微量DNA提取方法的探讨

为了提取微量的家鸡囊胚细胞DNA应用于种蛋孵化前的PCR性别鉴定,本实验应用Chelex-100法、常规试剂提取法、DNA试剂盒提取法进行微量囊胚细胞的DNA提取,并应用W染色体性别鉴定引物进行PCR鉴定。结果表明,3种方法均能提取适合于PCR的模板,其中以Chelex-100法提取的效果最好,最小细胞数为10个,其次为常规试剂提取法和DNA试剂盒提取法,最小细胞数分别为50个和1200个。本研究对微量家鸡囊胚细胞DNA提取方法进行了大量的摸索和改进,为家鸡种蛋孵化前性别鉴定技术研究奠定了一定的基础。     

家畜性别鉴定与控制技术的研究进展

家畜繁殖中的性别鉴定与控制对畜牧生产、遗传疾病的防治和家畜育种有非常重要的意义。一方面可大大提高畜牧业的经济效益。如乳用及蛋用等限性性状以雌性效益高，而肉用及毛用等受性别影响的性状则以雄性增重快、产毛量高、省饲料、肉质和毛质优，不同种类家畜的性别选择成为提高养殖效益的主要途径之一。另一方面，对于性连锁疾病的防止，可以通过性别控制技术加以限制。在畜禽育种工作中，对于繁殖效率较低的家畜，借助性别控制可以有意识地增强核心群的作用，获得最大的选择强度和效益，加速家畜的遗传进展和畜群的更新。     

黄喉拟水龟性别调控相关lncRNA和mRNA的筛选及初步分析

性别异形在动物界广泛存在，长期以来一直是生物学中的热门话题。黄喉拟水龟性别分化属温度依赖型，其温度响应分子机制仍不清楚。为了进一步解析龟鳖动物性别分化的分子机制，本研究初步比较分析了黄喉拟水龟转录本中性别差异表达(different expressed, DE)的长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)及其调控的靶基因。首先，运用Illumina深度测序平台，通过转录组测序(RNA-Seqs)对黄喉拟水龟的精巢和卵巢进行了比较转录组学分析并筛选鉴定出雌雄差异转录本，共筛选获得8 237个DE mRNA和9 573个DE lncRNA。通过GO功能注释及 KEGG通路富集分析发现，上述差异转录本主要参与龟鳖动物性别分化和性腺发育等相关信号通路。此外，通过顺式和反式作用分析，筛选获得了一系列与生殖发育相关的(性腺发育和性别分化)受DE lncRNAs调控的靶基因。本研究为进一步阐明黄喉拟水龟温度依赖型性别的分子机制提供了线索，特别是为进一步挖掘利用龟鳖动物性别决定因子，进行龟鳖动物性控育种技术研究奠定了基础。     

西伯利亚鲟性别及性腺发育的超声波鉴定

利用超声波检查仪对人工养殖西伯利亚鲟的性别及性腺发育进行超声波扫描,并利用微创手术检查和组织学观察法来验证超声波对西伯利亚鲟性别及发育时期扫描的鉴定结果。通过对比研究表明:超声波方法对西伯利亚鲟性别鉴定的准确率较高,对2～5龄雌性鉴定的准确率为95%,对雄性鉴定的准确率为87%。超声波技术鉴定性腺发育的准确率随性腺的发育而提高,鉴定早期性腺(Ⅰ～Ⅱ期)发育的准确率(65.25%)低于对晚期性腺(Ⅲ～Ⅴ期)发育鉴定的准确率(88.65%)。超声波技术鉴定西伯利亚鲟性别及性腺发育速度较快,根据鱼的发育状况,平均每尾鱼所用的时间约30s。     

动物胚胎干细胞的建立与应用

胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(inner cell mass ICM)或原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)经体外分化抑制培养分离克隆的。本文介绍了胚胎干细胞的概念,对ES细胞分离、培养和鉴定方法及在动物遗传育种中的应用进行了综述。     

水产动物性别控制研究和实践

水产动物由于其性别控制的某些特点,其做为遗传学理论研究的对象及在育种实践中的价值具有广泛意义。实验表明,应用染色体工程、细胞工程以及生理生化的一些技术手段,可以达到水产动物性别定向控制的目标。关于水产动物的遗传育种,国内外有许多详尽的评述,本文将包括多倍体育种等做为不育苗种发生的技术一并列入,就国内外水产动物性别控制研究和实践进行专题论述。