5-羟色胺对中华绒螯蟹眼柄MTXO细胞兴奋和分泌活动的影响

采用全细胞膜片钳技术，通过检测膜电容变化的方法实时监测细胞的分泌活动，在单个细胞水平观察了5-羟色胺（5-HT）对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）眼柄视神经节端髓X器官（MTXO）3种类型神经内分泌细胞兴奋性和分泌活动的调控作用。在电流钳模式下，5-HT使河蟹眼柄MTXO A型和B型细胞产生去极化反应，并诱导细胞兴奋，出现不同频率的动作电位；相反5-HT诱导C型细胞产生超级化反应，抑制细胞的兴奋活动。在全细胞电压钳记录模式下，5-HT明显地引起A型和B型神经内分泌细胞的膜电容增加，C型细胞的膜电容没有明显的变化。这表明，5-HT通过调控河蟹眼柄神经内分泌细胞的兴奋性诱导CHH和MIH的释放，抑制C型细胞的分泌活动。     

中华绒螯蟹眼柄神经内分泌细胞表达ATP敏感钾通道

作者采用膜片钳技术之内面向外记录模式观察了河蟹（Eriocheir sinensis）眼柄视神经节端髓X器官（MTXO）神经内分泌细胞对0~1mmol•L－1 ATP的反应，发现河蟹眼柄MTXO细胞表达ATP敏感钾通道（KATP）。电生理特征研究结果表明，在细胞膜内外两侧的Ｋ+浓度均为200mmol•L－1时，KATP呈弱的内向整流性，电导为68pS，有翻转电位。灌流ATP对KATP通道的开放产生浓度依赖性抑制作用，当细胞外液中ATP浓度超过0.1mmol•L－1后，去极化刺激不能诱发KATP电流，并且1mmol•L－1ATP可明显阻断KATP开放活动。胆固醇等甾醇类物质对河蟹眼柄MTXO细胞KATP无明显的影响，但0.1mmol•L－1优降糖可完全阻断KATP的单通道开放。ATP敏感钾通道（KATP）受内源性ATP的调控，在细胞代谢与兴奋性耦联中起重要作用，提示河蟹眼柄MTXO细胞的代谢活动对神经多肽激素的分泌产生了反馈调节作用，胆固醇等甾醇类物质未通过调节KATP的活动调控细胞的分泌活动。本文结果为阐明甲壳动物眼柄神经多肽激素分泌的调控机制奠定了基础。     

中华绒螯蟹眼柄端髓X器官神经分泌细胞钙激活钾通道研究

采用膜片钳的内面向外式记录了中华绒螯蟹眼柄端髓X器官(MTXO)神经内分泌细胞钙激活钾通道活动。结果表明,在对称性高钾溶液中(200mmol.L-1),钙激活钾通道的单通道活动为快速开放的矩形方波,时程长短不一,通道电导为(213.4±11.2)pS。在-80~ 80mV钳制电压下,通道电流幅度及开放概率呈现明显的电压依赖性;随浴液游离Ca2 浓度的增加,通道的开放概率和开放数目增加,表现出明显的钙敏感性。药物敏感试验结果显示,80mmol.L-1四乙胺(TEA)可完全阻断通道活动。表明中华绒螯蟹眼柄端髓X器官(MTXO)神经分泌细胞钙激活钾通道(BKCa)具有大电导、电压依赖性、Ca2 敏感性和四乙胺(TEA)敏感性等特征。     

长吻鮠不同时期脑垂体的超微结构

采用组织学方法和透射电镜技术对性周期内不同阶段和不同季节的雌性长吻鮠(Leiocassis longirostris)脑垂体的超微结构进行较详细的研究，结果表明：长吻鮠脑垂体包括腺垂体和神经垂体两个部分，腺垂体组织中有6种分泌细胞，即促性腺激素(GTH)分泌细胞、生长激素(STH)分泌细胞、促甲状腺激素(TSH)分泌细胞、促黑色素细胞刺激激素(MSH)分泌细胞、催乳激素(PRL)分泌细胞、促肾上腺皮质激素(ACTH)分泌细胞。神经垂体组织中存在A型(A1、T2)和B型神经分泌纤维，A型分泌纤维轴突中具有不同类型的分泌颗粒，B型分泌纤维轴突中含有许多透明小囊泡。产卵前GTH细胞胞质中充满了电子密度较高的大、小两种分泌颗粒；TSH细胞胞质中分泌颗粒排空，电子密度降低，出现大空泡；STH细胞处于活跃的合成和分泌状态；MSH细胞粗面内质网相当发达，成层围核分布，分泌颗粒极少；PRL细胞电子密度高，具圆球形被膜的分泌颗粒；ACTH细胞分泌物颗粒数量少。产卵后GTH细胞中的分泌颗粒排空；TSH细胞出现空泡；STH细胞中的粗面内质网围核环状排列；MSH细胞分泌颗粒多但比较小，粗面内质网呈扁状或网状；PRL细胞分泌颗粒极少，分布不均匀；ACTH细胞内质网近核分布。秋季GTH细胞中发现GTH1和GTH2两种细胞，GTH1细胞具有大量围核分布的分泌颗粒，GTH2细胞胞质中分泌颗粒数量较少；STH细胞胞质中粗面内质网极发达，围核分布，线粒体数量增加；TSH细胞内质网膨大成泡状；MSH细胞有明显的双核结构，其中一核具核仁，胞质内分泌颗粒较产后增多；PRL细胞具有呈不均匀分布的圆球形分泌颗粒；ACTH细胞线粒体与内质网围核分布，分泌颗粒较少，不均匀分布于细胞质中。冬季GTH细胞内有少量分泌颗粒散布在核周围；TSH细胞含有较多的小型分泌颗粒，胞核外周有大量长条形的粗面内质网；STH细胞中分泌颗粒数量较少，合成和分泌活动微弱；MSH细胞粗面内质网呈泡化状，绕核排列；PRL细胞、ACTH细胞和秋季时的超微结构无明显差异。神经垂体中的分泌纤维各阶段也有一定的变化，产前阶段具有较多球形的无被膜分泌颗粒，产后阶段分泌颗粒呈现排空，秋季部分可见到分泌颗粒，但数量相对较少，冬季变化不明显。     

摘除眼柄诱导中国对虾(Penaeus orientalis kishinouye)性腺成熟和提前产卵的初步试验(摘要)

<正> 我们于1979年12月—1980年2月在青岛、1980年3—4月在江苏省连云港市以摘除一侧眼柄的方法进行了诱导对虾性腺成熟和提前产卵的试验研究。试验的材料是越冬的亲虾(包括海区捕获和人工养成的雌虾)。试验证实,通过摘除眼柄,消除分泌抑制卵成激素的神经分泌细胞群(X器官),能诱导亲虾性腺发育并获得较高成熟率(指成熟的亲虾百分比)。这样即可提高亲虾利用率,又可达到使亲虾提前产卵、孵化的目的。为充分利用育苗设备,     

红螯螯虾XO-SG神经细胞的原代培养

本研究采用酶解的方法获得红螯螯虾眼柄XO-SG复合体的单个神经细胞,并依据显微观察对XO-SG神经细胞进行分类,同时利用Leibovitz's L-15等作为基础培养基离体培养解离的神经细胞。目的是建立虾类XO-SG神经细胞的分类标准并确定合适的培养条件,便于在体内外开展神经内分泌系统的调控研究。结果显示,根据神经细胞形态特点,红螯螯虾XO-SG神经内分泌细胞分为6种类型,不同类型的细胞在细胞大小以及显微结构上存在明显差异;建立了红螯螯虾眼柄XO-SG神经元的体外原代培养方法,细胞在改良的L-15培养基中存活状态良好,原代培养的神经细胞可以在体外存活14 d。离体培养过程中,不同类型神经细胞的再生速率存在差异,部分细胞在第2天就出现再生的轴突或树突。再生过程基本可以持续7 d,随后细胞开始萎缩凋亡。本研究为红螯螯虾眼柄神经细胞的分类以及利用神经细胞在体外开展虾类的内分泌代谢和调节机制研究提供了基础依据和研究平台。     

中华绒螫蟹眼柄端髓X器官神经分泌细胞钙激活钾通道研究

采用膜片钳的内面向外式记录了中华绒螯蟹眼柄端髓X器官（MTXO）神经内分泌细胞钙激活钾通道活动。结果表明，在对称性高钾溶液中（200mmol·L^-1），钙激活钾通道的单通道活动为快速开放的矩形方波，时程长短不一，通道电导为（213．4±11．2）ps。在-80～＋80mV钳制电压下，通道电流幅度及开放概率呈现明显的电压依赖性；随浴液游离Ca^2＋浓度的增加，通道的开放概率和开放数目增加，表现出明显的钙敏感性。药物敏感试验结果显示，80mmol·L^-1四乙胺（TEA）可完全阻断通道活动。表明中华绒螯蟹眼柄端髓X器官（MTXO）神经分泌细胞钙激活钾通道（BKCa）具有大电导、电压依赖性、Ca^2＋敏感性和四乙胺（TEA）敏感性等特征。     

中华绒螯蟹脑神经分泌细胞的研究

经光学显微镜和透射电镜观察,中华绒螯蟹的脑具有3种类型的神经分泌细胞。Ⅰ型细胞最大,胞质中存在许多大小不同的空泡,分泌颗粒数量很少;Ⅱ型细胞中等大小,细胞器发达,分泌颗粒数量较多,形态多样;Ⅲ型细胞最小,分泌颗粒数量最多,细胞器很少。     

摘除单侧眼柄对南美对虾产卵和孵化的影响

在海虾商业化养殖过程中，控制卵巢的成熟和产卵是首要解决的问题，对捕获的雌虾已习惯采用眼柄摘除术来促使其卵巢成熟，摘除眼柄后，眼柄中的X器官窦腺复合体分泌的性腺抑制激素(GIH)明显减少。很多研究者证实，虾蟹胸神经节分泌的性腺促进激素(GSH)能诱导卵巢的成熟。甲壳纲动物卵巢的成熟可能由性腺促进激素(GSH)和性腺抑制激素(GIH)这对拮抗激素所控制。摘除眼柄后，GIH的减少可能直接或间接地促进了GSH的分泌，从而促进了性腺的成熟。     

驼背鲈脑垂体显微和超微结构的观察

采用PAS、Mallory三色法和腺垂体不同细胞改良染色法3种组织学染色方法,以及透射电镜技术,对驼背鲈(Cromileptes altivelis)脑垂体的形态、组织结构和超微结构进行了研究。结果表明,驼背鲈脑垂体为圆球形实心腺体,位于间脑腹面,由神经垂体和腺垂体2部分组成。根据神经纤维中所含分泌颗粒形态和大小把神经分泌纤维分为A1、A2和B型。神经纤维中存在2种垂体细胞,即呈椭圆形的Ⅰ型垂体细胞和呈梭形的Ⅱ型垂体细胞。腺垂体由3部分组成:前外侧部(RPD)、中外侧部(PPD)和中间部(PI)。腺垂体部可以鉴别出6种内分泌细胞,其中RPD有2种内分泌细胞:促肾上腺皮质激素(ACTH)分泌细胞和催乳激素(PRL)分泌细胞;PPD有3种内分泌细胞:生长激素(GH)分泌细胞、促性腺激素(GTH)分泌细胞和促甲状腺激素(TSH)分泌细胞;PI只有1种内分泌细胞,即促黑激素(MSH)分泌细胞。此外,腺垂体还有1种非分泌细胞星状细胞(SC)。驼背鲈腺垂体中6种内分泌细胞的分布情况为:前外侧部分布有2种细胞,即嗜酸性的PRL分泌细胞和嗜碱性的ACTH分泌细胞;中外侧部有GH、GTH、TSH 3种分泌细胞;MSH分泌细胞分...     

克氏原螯虾不同发育时期5-HT与DA在卵巢和肝胰腺中的分布

为了研究5-HT与DA阳性物质在克氏原螯虾(Procambrus clarkii)不同发育时期的卵巢细胞和肝胰腺细胞中的分布特征,运用免疫组化法对卵巢发育4个不同时期的卵巢与肝胰腺进行观察。结果表明,各期卵巢卵细胞和肝胰腺细胞中均存在5-HT与DA阳性物质。Ⅰ期卵巢5-HT阳性物质分布于卵母细胞胞核,胞质未出现阳性;Ⅱ期～Ⅳ期5-HT阳性物质主要集中在卵母细胞胞质以及胞核。在发育各期的肝胰腺中5-HT的免疫物质均呈阳性。Ⅰ～Ⅳ期卵巢中,DA阳性物质主要分布于卵母细胞的胞核以及肝胰腺细胞,其强度呈递减趋势。结果提示5-HT具有促进卵巢发育作用,而DA则抑制卵巢发育。     

赤潮异弯藻对鳀鱼早期发育的影响

就赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo)藻液及各组分对鳀鱼(Engraulis ja ponicus)早期发育阶段的影响进行了研究。并就鳃鱼早期发育过程中对赤潮异弯藻的敏感性时期作了探讨。实验结果表明，原肠期前的发育卵和初孵仔鱼对赤潮异弯藻较其他发育阶段更为敏感。在同等条件下藻细胞内容物对鳃鱼早期发育各阶段的毒性最大，其次是藻细胞碎片和藻液，去藻过滤液的毒性最小。暴露在高浓度90000c／ml藻细胞内容物中，96h后仔鱼的存活率为4％；而在同浓度的去藻过滤液中，96h后仔鱼的存活率为75％。藻细胞内容物和藻细胞碎片对鳃鱼仔鱼96hI。C∞分别为2818、6760c／mL．     

不同供核细胞、处理方法及激活时间对猪核移植重构胚发育的影响

在不同的外界因素下,使用胞质内体细胞核注射的方法,为进一步提高猪体细胞核移植的效率来寻找新途径。利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞经过去核,注核及激活等操作后,研究猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞,血清饥饿处理法及不同的激活时间等因素对猪核移植重构胚体外发育的影响.结果表明,猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞用作核供体与猪卵母细胞构建重构胚,在卵裂率上无显著性差异。作为供核细胞的猪成纤维细胞,经过血清饥饿与不经过血清饥饿培养,核移植重构胚的卵裂率无显著性差异。在进行核注射后,使供核细胞与胞质受体作用适当的时间(1～6h)在进行激活,有利于重构胚的发育。提示颗粒细胞和猪胎儿成纤维细胞用作核供体与猪卵母细胞构建重构胚以及作为供核细胞的猪成纤维细胞,经过血清饥饿与不经过血清饥饿培养处理后,这二者对猪核移植重构胚发育的均无明显影响。但是使供核细胞与胞质受体作经过适当的时间(1～6h)的激活,却有利于重构胚的发育。     

中国对虾循环系统的发生

采用组织学方法。研究了中国对虾循环系统的发生过程，在无节幼体第3期，起源于头胸甲皱褶部位的腹侧中胚层细胞通过增殖向背面迁移，在中肠的背面形成一中胚层板，此板两侧向背面上卷，合拢而成心脏，与此同时，该中胚层板两侧周围的中胚层细胞向两侧迁移，与体壁接触形成围心腔，心孔出现在无节幼体第5期，是由该处的心壁细胞直接内陷形成；心脏的形态结构随着幼体的发育而不断完善，至蚤状幼体第1期以后，组成心壁的细胞分化为单层的心肌细胞，随后其外包被一层由结缔组织细胞形成的心外膜，至仔虾期，心脏的外形和结构已与成虾的相似；背腹动脉发生的方式与时间和心脏的相同；中背动脉的发生包括两部分；心脏近端的中背动脉由心脏前端延伸而成，心脏远端的中背动脉则由幼体前端背部中胚层细胞形成，血细胞最早出现在无节幼体第1期。     

厚壳贻贝胚胎和早期幼虫神经系统发育的初步研究

采用免疫细胞化学技术和荧光染色技术初步研究了厚壳贻贝胚胎及早期幼虫的神经发育情况以及含有不同类型神经细胞的时空分布.在厚壳贻贝从受精开始至囊胚期的整个胚胎发育过程中,均未发现FMRF酰胺类免疫阳性信号和5-羟色胺免疫阳性信号,神经最初形成于担轮幼虫阶段,出现了FMRF酰胺类免疫阳性信号和5-羟色胺免疫阳性信号,36 hpf时,更多的FMRF酰胺类免疫阳性信号出现在幼虫顶部区域左右两侧,伸出的阳性纤维延伸后形成基底神经纤维,并延伸至正在发育的中足所在区域.在顶端区所有阳性信号中,第一个免疫信号始终处于腹部,位置未发生变化.D形幼虫阶段神经系统的FMRF酰胺类免疫阳性信号分别是顶器官的3个顶部阳性信号、侧部2个阳性信号以及足区形成的2个阳性信号.顶器官中的信号延伸出免疫活性纤维形成基底神经纤维.18 hpf时,第1个5-羟色胺免疫阳性信号出现在早期担轮幼虫的顶器官前端.在早期D形幼虫阶段,阳性信号伸出一个短小的基底神经纤维,并延伸至后来发育成的顶器官神经纤维网部位,42 hpf时,更多5-羟色胺阳性信号细胞出现在顶区域,数量增至2～3个.D形幼虫阶段(48 hpf),5-羟色胺免疫阳性信号数量增至4个,分布于脑神经节的周围,其发出的基底纤维延伸至紧密的顶神经纤维网.     

胚胎干细胞的研究进展及应用前景

干细胞(Stem Cell)是一类具有分化潜能和自我复制的早期未分化细胞。胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES细胞)是一种早期胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)或原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)经体外分化抑制培养,分离和克隆得到的具有发育全能性的高度未分化细胞。本文综述了胚胎干细胞的形态学、生长特性、免疫学鉴定方法,ES细胞抑制分化和诱导分化的机理以及饲养层、血清和细胞因子等影响胚胎干细胞分离克隆的因素,并进一步阐述了胚胎干细胞的应用前景以及存在的问题。     

赤潮异弯藻对牙鲆早期发育的影响

就赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo)藻液及各组分对牙鲆(Paralichthys olivaceus)早期发育阶段的影响及敏感性时期作了探讨。实验结果表明，原肠期前的发育卵和初孵仔鱼对赤潮异弯藻较其他发育阶段更为敏感。在同等条件下藻液对牙鲆早期发育各阶段的毒性最大，其次是藻细胞碎片和藻细胞内容物，去藻过滤液的毒性最小。暴露在高浓度80000cells／ml藻液中，96h后仔鱼的存活率为47．6％；而在同浓度的去藻过滤液中，96h后仔鱼的存活率为90％。藻液对牙鲆仔鱼96h LC50为35042cells／ml。     

中华锯齿米虾卵子发生过程中滤泡细胞的结构研究

利用光镜和透射电镜对中华锯齿米虾卵子发生过程中滤泡细胞的结构进行了研究。结果表明:随着卵子发生,滤泡细胞经历了发生、发育及退化的过程。在卵黄大量生成阶段,单层滤泡细胞紧贴卵母细胞,其内部蕴含着大量的内质网及线粒体。滤泡细胞与卵母细胞通过微胞饮泡和微绒毛进行物质交换。     

On the Structure and Molt Controlling Function of the Y-Organ in the Prawn Penaeus indicus

The morphological and histological structure of the Y-organ of Penaeus indicus is described. The gland 1–2 × 0.3 mm (LXW) is located in between the mandibular and posterior dorsoventral muscle at the junction of prebranchial and branchial chambers. Histochemical tests were performed to determine the chemical nature of the Y-organ cells. Significant changes in the size and tinctorial affinity of the Y-organ cells were observed in relation to the molt cycle. Y-organectomy experiments revealed that the onset of premolt development was inhibited, suggesting the presence of molt inducing factor in the Y-organ.     

草鱼jam-a分子在胚胎幼鱼期及受GCRV感染PSF细胞的表达分析

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)可引发草鱼(Ctenopharyngodon idellus)出血病，导致高死亡率。草鱼吻端成纤维细胞(Grass carp snout fibroblast cells, PSF)是GCRV的敏感细胞系。JAM-A (Junctional adhesion molecule A)为免疫球蛋白超家族成员，是多种病毒的细胞受体。本研究在前期克隆到草鱼3种jam-a基因，命名为gcjam-a1，gcjam-a2和gcjam-a3。在获取ORF序列的基础上，利用qRT-PCR分析了3种gcjam-a在草鱼胚胎及幼鱼不同发育时期及PSF细胞中受GCRV(GD108株)感染前后的表达模式。结果显示，检测的13个胚胎及幼鱼发育时期中，gcjam-a1在未受精卵中高表达，在受精卵至出膜前的胚胎表达水平均较低；从出膜后1~3 d表达量开始上升；出膜6~15 d均呈高水平表达。gcjam-a2与gcjam-a3在草鱼胚胎及幼鱼发育各阶段表达水平较低。在无病毒感染的PSF细胞中，gcjam-a只有少量表达。受GCRV-GD108感染后，病毒S7基因在PSF细胞中的拷贝数随时间呈显著上调趋势，gcjam-a的表达量也有不同程度的上调，mRNA上调水平为gcjam-a1>gcjam-a2>gcjam-a3。本研究证实了3种gcjam-a基因在PSF细胞中的表达均与GCRV-GD108感染相关，其中，gcjam-a1的表达水平受GCRV-GD108感染影响最大，同时，它在孵化出膜后表达上升，推测它可能与病毒的感染更相关。gcjam-a1可作为下一步GCRV与宿主互作研究中的候选分子。