斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞系的建立及其生物学特性

采用组织块移植培养技术,对来源于斑点叉尾(鱼回)(Icttalurus punctatus Rafinesque)肾脏组织的细胞进行原代培养,建立了斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞系,定名为CCK,目前已稳定传代培养70多次.斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞为成纤维样细胞,最佳培养基为M199,最适培养温度范围为28～32℃,培养基血清体积分数为10%.在此条件下,CCK细胞的倍增时间为38.9～41.0 h.斑点叉尾(鱼回)肾脏细胞的集落形成效率为(74.16±3.54)%,第9代传代细胞的染色体数目为正常二倍体2n=58,第33代传代细胞的染色体众数为60.液氮冷冻保存6个月后复苏的细胞经台盼兰染色检验,(86.69±1.04)%的细胞仍保持活性,细胞复苏后培养生长旺盛.通过对第17代离体培养细胞的28S rRNA基因进行PCR扩增及序列分析与比对,表明该细胞系来源于斑点叉尾(鱼回).[中国水产科学,2009,16(1):75-81]     

不同养殖模式对斑点叉尾鮰生长和肌肉品质特性的影响

为探究不同养殖模式下斑点叉尾鮰的生长性能和肌肉品质特性，随机选取传统池塘（TP）、高密度循环水系统（HD-RAS）和水泥池塘（CP）养殖模式下的鲜活斑点叉尾鮰，测定其生长状况，以及肌肉营养成分、颜色、持水力和质构特性。结果显示，TP和HD-RAS的斑点叉尾鮰的增重率和特定生长率差异不显著，但均高于CP；CP的肝体比（2.35%±0.22%）显著高于TP和HD-RAS；与TP相比，HD-RAS和CP肌肉的粗脂肪含量更低，粗蛋白和灰分含量更高；HD-RAS肌肉的亮度值（L*）（58.18±3.56）、红度值（a*）（6.05±1.08）最高，CP最低，分别为48.15±6.04和4.81±0.84；传统池塘养殖的斑点叉尾鮰熟肉率最低，离心损失、滴水损失和失水率最高，HD-RAS和CP之间差异不显著；HD-RAS和CP肌肉的硬度、咀嚼性和弹性显著高于TP，但3处理组间的内聚性和回复性没有显著差异。研究表明，与传统池塘养殖模式相比，水泥池塘养殖模式易造成斑点叉尾鮰生长减慢，而高密度循环水养殖模式对斑点叉尾鮰生长性能没有显著影响，并且在该养殖模式下肌肉具有更高的持水力、质构特性，同时呈现高蛋白、低脂肪的营养特点。     

斑点叉尾鮰80:20池塘养殖试验

广东省水产技术推广总站与美国大豆协会和南海科达·恒生水产有限公司三方共同合作,于2006年7月在南海开展斑点叉尾鮰养殖试验.试验运用80:20池塘养殖模式和豆粕型膨化饲料,养殖斑点叉尾鮰从鱼苗到鱼种,观察其生长及经济性能.……     

不同水温下强力霉素在斑点叉尾鮰体内的残留消除规律

研究不同水温(18 ± 1) ℃和(28 ± 1) ℃下，强力霉素在斑点叉尾鮰体内的残留消除规律。以20 mg/kg鱼体重连续口灌斑点叉尾鮰5 d，于停药后第1、3、5、7、9、12、15、24、30、40 天分别将斑点叉尾鮰处死后取肌肉(加皮)、肝脏、肾脏3种组织，采用高效液相色谱紫外检测法测定斑点叉尾鮰组织中强力霉素。结果表明，强力霉素在斑点叉尾鮰体内的消除速度与水温有密切关系，不同水温下相同组织，相同水温下不同组织中强力霉素的消除速率不同(P<0.05)。高水温时强力霉素在斑点叉尾鮰体内消除快，表明水温对斑点叉尾鮰体内的药物代谢有明显的影响，强力霉素残留的消除速度随水温降低而减慢；与其他组织相比，强力霉素在肝脏中的消除最慢。因此，若将肝脏作为强力霉素在斑点叉尾鮰体内残留的靶组织计算休药期，在(18 ± 1) ℃和(28 ± 1) ℃时，按欧盟和中国规定的动物组织中强力霉素在肝脏中最高残留限量300 μg/kg计算，从食品安全角度来分析，建议休药期分别为55 d和30 d。若按强力霉素在可食组织肌肉(加皮)中最高残留限量300 μg/kg计算休药期，建议休药期分别为22 d和19 d。本研究旨为不同水温条件下制定强力霉素在斑点叉尾鮰体内的残留限量和休药期提供理论依据。     

维生素E对斑点叉尾鮰生长性能和消化酶活性的影响

试验研究了饲料中不同含量维生素E对斑点叉尾鮰生长性能和消化酶活性的影响，并对其机理进行了初步探讨。选取900尾健康的斑点叉尾鮰，平均体重(5.20±0.15)g，随机分成4个处理（I、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ处理依次分别添加维生素E 0、50、100和1000IU/kg饲料），每个处理3个重复，每个重复75尾。试验期105d。试验结果表明：在一定添加水平内，维生素E能够显著提高斑点叉尾鮰成活率、特定生长率(SGR)、蛋白质效率和摄饵量(P＜0.01)。当维生素E添加量为到100 IU/kg时，以上四个指标均达到最高，分别为97.78±0.96％，2.99±0.50％，163.71±5.62％和7478.00±62.01 g/尾，均极显著高于维生素E添加量为0 IU/kg组(P＜0.01）；维生素E显著影响斑点叉尾鮰胃肠道和肝胰脏蛋白酶和脂肪酶活性（P＜0.01 or P＜0.05）。当饲料中添加维生素为100IU/kg时，胃蛋白酶和脂肪酶活性最高，分别达29.33±1.66 U•min－1 •mg－1，196.52±17.28 U•min－1 •mg－1，极显著高于维生素Ｅ添加量为0 IU/kg组(P＜0.01）和显著高于维生素Ｅ添加量为1000IU/kg组(P＜0.05）。由本试验结果可以看出，维生素E在一定添加水平内能显著提高斑点叉尾鮰消化酶活性，促进此鱼生长，且其适宜添加量为100 mg／kg。     

斑点叉尾鮰80:20池塘养殖试验

广东省水产技术推广总站与美国大豆协会和南海科达&#183;恒生水产有限公司三方共同合作,于2005年5月至11月在南海开展了斑点叉尾鮰养殖试验.试验运用80:20池塘养殖模式和豆粕型膨化饲料,养殖斑点叉尾鮰从鱼种到成鱼,皆在观察其生长及经济性能.……     

罗非鱼肾脏细胞系的建立及其生物学特性

采用组织块移植法，对尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）的肾脏组织细胞进行原代培养，建立了罗非鱼肾脏细胞系，已稳定传代培养50代以上，命名为TiK。罗非鱼肾脏细胞系为纤维样细胞，其最佳培养基为DMEM，最适培养温度为28℃，最适血清浓度为15%。在最适培养条件下，罗非鱼肾脏细胞系的群体倍增时间为45.8 h。细胞经液氮冷冻保存6个月后进行复苏，经台盼蓝染色，约（89.84±3.48）%的细胞具有活性，复苏后细胞生长旺盛。染色体分析显示，第32代罗非鱼肾脏细胞系染色体数目分布在20~66之间，众数为48。使用本实验室分离鉴定的罗非鱼病毒感染罗非鱼肾脏细胞，可产生典型的细胞病变效应，表明罗非鱼肾脏细胞对该病毒敏感。该细胞系的建立为罗非鱼病毒病防控技术研究提供了重要的实验材料。     

斑点叉尾鮰肠败血症病原菌的分离与鉴定

近两年来，一种严重的传染性疾病在广西斑点叉尾鮰养殖业中流行，造成鱼苗100％死亡；咸鱼的损失也高达30％～80％不等。为了确定该病病原，本试验对患病斑点叉尾鮰脑、肝脏、脾脏和肾脏组织进行了细菌的分离、鉴定及致病性试验。结果从南宁和合浦两地分离到NN和HP两株G短杆菌，人工感染试验表明，腹腔注射感染可引起健康斑点叉尾鮰100％死亡，浸泡感染可引起30％-55％死亡，并且感染发病的斑点叉尾鮰症状与自然发病症状相似。两株细菌的形态特征、培养特性和生理生化反应指标均与国外报道的鮰爱德华氏菌参考菌株（JCM1680）相同；两株细菌的16SrRNA基因序列与JCM1680菌株16s rRNA基因序列同源性均为99．3％。以上研究证实，NN和HP两株细菌为致病性鮰爱德华氏菌，其引起的传染性疾病为斑点叉尾鮰肠败血症。本研究首次对国内斑点叉尾鮰肠败血症进行病原菌的分离和鉴定，证实了斑点叉尾鮰肠败血症在广西斑点叉尾鮰养殖业中的流行及造成严重经济损失，对国内该病的控制及斑点叉尾鮰健康养殖具有重要的指导意义。     

斑点叉尾鮰呼肠孤病毒CCRV诱导CCK细胞凋亡的研究

为研究斑点叉尾(鱼回)呼肠孤病毒(CCRV)诱导斑点叉尾(鱼回)肾脏细胞(CCK)发生凋亡的机理,以CCRV感染的CCK细胞为实验材料,采用Hoechst 33258染色、DNA片段化检测、TUNEL反应、亚G1期细胞检测以及线粒体膜电位变化检测等方法进行实验.感染试验结果显示,病毒感染斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞后,细胞变圆、皱缩,随后细胞脱落,细胞单层呈网状,感染72 h后出现典型细胞病变效应(CPE);病毒感染48 h后Hoechst 33258染色结果显示,细胞的染色质固缩、核边缘化或破裂,可观察到凋亡小体,细胞凋亡率随时间增加;DNA片段化检测结果显示,病毒感染细胞12 h后细胞基因组DNA出现片段化,随后逐渐增强,72 h达到最高;TUNEL反应结果表明,病毒感染细胞72 h后细胞基因组DNA断裂,有大量游离3’末端自由羟基(-OH)存在.亚G1期细胞检测结果显示,病毒感染48 h后,约53.44％细胞处于亚G1期;利用JC-1检测试剂盒检测病毒感染细胞的线粒体膜电位变化,病毒感染细胞24 h后线粒体膜通透性发生改变,膜电位变化显著.紫外线灭活与热灭活的斑点叉尾(鱼回)呼肠孤病毒不能诱导斑点叉尾(鱼回)肾脏细胞发生凋亡,表明细胞凋亡依赖于病毒复制.     

MS-222对斑点叉尾鮰麻醉效果的研究

为研究各种因素对MS-222麻醉效果的影响,进行了不同麻醉剂质量分数、麻醉温度和药浴时间等对斑点叉尾鮰[(100±8.5)g]麻醉效果的试验。试验结果:在水温26℃条件下,MS-222质量分数在40~160 mg·L-1时,随着质量分数的增大,斑点叉尾鮰进入麻醉状态的时间显著缩短,复苏时间变化较小,MS-222质量分数在100~160 mg·L-1时能够达到理想的麻醉效果。当MS-222质量分数为100 mg·L-1,水温在18~34℃时,随着温度的升高,斑点叉尾鮰进入麻醉状态的时间显著缩短,复苏时间明显增加,水温在26~30℃时能够达到理想的麻醉效果。水温26℃条件下,当MS-222质量分数小于等于60mg·L-1时,斑点叉尾鮰的麻醉时间较长;MS-222质量分数为80 mg·L-1和100 mg·L-1时,斑点叉尾鮰的麻醉时间不能超过10 min;MS-222质量分数在大于等于120 mg·L-1时,斑点叉尾鮰的麻醉时间不能超过3 min。用不同质量分数的MS-222对斑点叉尾鮰进行麻醉时,斑点叉尾鮰每分钟呼吸频率到达峰值的时间随着麻醉剂质量分数的增大而逐渐缩短。