海洋生物溶菌酶的研究与开发

该课题完成了高产溶菌酶生产菌的代谢调控和高效表达及发酵生产工艺和产品制备工艺的研究，提出了沉淀造粒、表面喷涂颗粒酶生产技术与无载体固定化微胶束技术等；获得的海洋微生物溶菌酶具有广谱杀菌作用，对常见革兰氏阳、阴性菌等多种致病菌均有溶菌作用，是无毒、无残留的绿色制剂；课题注重产学研结合和产业化应用，海洋溶菌酶已形成产品化生产，可应用与养殖、     

海洋溶菌酶复合保鲜剂抑菌效果的研究

采用抑菌圈法测定海洋溶菌酶、茶多酚及山梨酸钾对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等菌株的最小抑菌浓度(MIC)并对其抑菌能力进行比较。实验结果表明,海洋溶菌酶可有效抑制多数水产腐败菌的生长,作为复配剂山梨酸钾、茶多酚也有各自的抑菌范围,三者最小抑菌浓度均在允许添加范围内。所以,海洋溶菌酶可以作为保鲜剂用于水产品保鲜。     

几种淡水养殖鱼类血清溶菌酶活性的初步观察

溶菌酶作为鱼类的非特异性免疫(先天性免疫)物质之一,在鱼体抵抗感染性致病菌的最前沿防御机制中起着重要作用。现已知,溶菌酶是一种呈抗生性的、由淋巴球分泌的溶解性酶,并主要作用于革兰氏阳性菌(G~+菌)     

海洋侧孢短芽孢杆菌S-12-86溶菌酶的分离纯化与冻干技术研究

海洋微生物溶菌酶发酵液经低温离心、超滤浓缩、乙醇提取、Superdex 75 10/300凝胶层析和反相高效液相色谱层析纯化得到电泳纯海洋溶菌酶,分子量为17.1 kD,比活达到3 987.7 U/mg,纯度提高41.98倍,活力回收率为21.7%。对该酶冷冻干燥过程的研究结果表明,海藻糖、蔗糖和麦芽糖对该酶均有一定的冻干保护作用。其中,以海藻糖的保护效果最佳。0.5 mol/L海藻糖与20 mg/ml吐温80复合作为冻干保护剂,使冻干后的溶菌酶活性维持在95%以上,为该酶进一步研究和应用提供了稳定的酶制剂。     

海洋细菌S-12-86的产溶菌酶条件

从中国东海海域底泥中筛选获得一株产溶菌酶的海洋细菌S-12-86,采用摇瓶发酵的方式,分别从培养基组分与发酵条件两个方面对海洋细菌S-12-86产酶的影响进行研究。结果表明,菌株S-12-86能够利用麦芽糖、淀粉、甘油和葡萄糖作为碳源,不能利用蔗糖与甘露醇;能够利用牛肉膏、酵母膏、蛋白胨和硫酸铵作为氮源,其中牛肉膏效果最佳,而硝酸钾、氯化铵和尿素几乎不能被利用;Zn2 、Mn2 、Cu2 对菌株S-12-86的生长和产酶均有抑制作用;Fe2 对菌体生长无明显影响,但明显抑制菌体产酶;Na 、K 对菌体的生长和产酶无明显影响;Ca2 对菌体生长有促进作用;Mg2 对菌体生长和产酶均有促进作用。菌株S-12-86最适发酵条件为:培养温度30℃、接种体积比4.0%、装液量体积比10.0%、产酶高峰在发酵开始后24 h。与白色链霉菌G(Streptomyces albusG)、灰色链霉菌P-51(S.griseusP-51)、枯草芽孢杆菌77(Bacillus subtilis77)等产溶菌酶微生物的产酶条件相比较,菌株S-12-86具有易培养、产酶量较高、生产成本较低等优点。因此,菌株S-12-86有较大的生产开发潜力。     

一株鳙源鲁氏耶尔森氏菌的分离鉴定及其感染的肠道病理损伤

为确定患病鳙鱼致病菌及筛选敏感药物,通过平皿划线法从患病鳙鱼血液及体表溃烂组织中分离到1株革兰氏阴性的短杆菌JL9510,该菌株在电镜下呈短杆状,在LB固体培养基上呈透明状菌落。VITEKMS全自动快速微生物质谱检测结果证明,该菌株为鲁氏耶尔森氏菌的置信度为99.9。通过16S rRNA及系统发育树构建分析,发现菌株JL9510与已知菌株JQ657818.1 Yersinia ruckeri聚为一支,确定其是一株鲁氏耶尔森菌。人工回归感染试验结果证明,该菌株为患病鳙鱼的致病菌。VITEK 2 Compact自动化细菌鉴定和药物敏感性分析系统结果显示,鲁氏耶尔森氏菌JL9510有较高的致病力,且对氟苯尼考敏感,对环丙沙星耐药。试验的抗生素表现出良好的治疗效果,为鲁氏耶尔森氏菌的防治奠定了基础。     

绿鳍马面鲀烂嘴症致病菌的分离鉴定及药敏试验

为确定绿鳍马面鲀烂嘴症的致病菌及筛选敏感药物,通过平皿划线法将患病组织内的细菌进行分离纯化,得到1株优势菌,命名为QZG3。该菌株在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂(TCBS)弧菌选择性培养基上为绿色、圆形、黏稠状菌落,经革兰氏染色判断为革兰氏阴性菌；对该菌株的16S rRNA基因进行测序、鉴定,并经系统进化树分析,发现该菌株与阿尔法克弧菌(Vibrio alfacsensis)聚为1支,因此判断该菌株为阿尔法克弧菌。人工回感试验表明,该菌株为绿鳍马面鲀烂嘴症的致病菌；药敏试验结果显示,该菌株仅对氟苯尼考、恩诺沙星两种抗生素高度敏感,对土霉素、青霉素、头孢氨苄、庆大霉素、卡那霉素、四环素以及红霉素均表现出耐药性。因此建议养殖生产上选用氟苯尼考和恩诺沙星进行药物防治。     

具抑菌活性海洋微生物的筛选

从采集于上海郊区海域的海水和海泥样品中分离出 193株海洋细菌，从中筛选抑菌活性菌株。 分别利用琼脂块法和管碟法对分离出的菌株进行初筛和复筛，结果显示，有 29株海洋细菌具有抑菌活性， 占总分离菌株的 15%，其中抑菌能力较强的 G4，抑菌谱较广，能同时抑制革兰氏阳性和阴性指示菌。     

海洋低温溶菌酶抗肿瘤活性的初步研究

通过观察海洋低温溶菌酶对体外培养细胞株增殖的影响、对角膜诱生血管的影响、对小鼠肉瘤S180（实体型）及对小鼠肝癌HAC（实体型）的抑制作用，探讨海洋低温溶菌酶抑制肿瘤生长活性。结果表明，该酶与蛋清溶菌酶在抑瘤作用机制上有很大区别，海洋低温溶菌酶具有血管生成抑制因子的活性，故对肿瘤生长具有明显的抑制作用。     

尼罗罗非鱼肠道中产酶菌株的研究

从尼罗罗非鱼肠道中分离出41株好氧菌和6株厌氧菌。好氧菌中31株为革兰氏阴性菌，10株革兰氏阳性菌；厌氧菌中，革兰氏阳性菌5株，革兰氏阴性菌1株。41株好氧菌中有31．7％的菌株能分泌蛋白酶(13株菌)；有39．0％的菌株能分泌脂肪酶(16株菌)；有17．1％的菌株能产淀粉酶(7株菌)，有36．6％的菌株能产纤维素酶(15株菌)。其中，产3种酶的有7株菌，产2种酶的有9株菌，产1种酶的有12株菌，不产酶的有13株菌。好氧菌在尼罗罗非鱼消化食饵过程所起的作用大；6株厌氧菌中仅有1株菌能产脂肪酶和纤维素酶，对尼罗罗非鱼消化食饵所起作用相对不大。优化罗非鱼肠道中微生物菌群的结构很有必要。     

健康养殖南美白对虾肠道细菌的抗菌活性

用双层琼脂扩散法检测从健康养殖南美白对虾肠道内分离出的111株菌对8株病原菌的抗菌活性。结果表明:111株菌对白假丝酵母菌,非01群霍乱弧菌,嗜水气单胞菌指示菌无抗菌活性,48.6%的菌株对余下的5株指示菌有抗菌活性,其中气单胞菌属和发光杆菌属对荧光假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑制性最强。各菌属中以气单胞菌属,发光杆菌属的抗菌谱最广,弧菌属、肠杆菌科、黄单胞菌属、芽孢杆菌属、小球菌属次之。土壤杆菌属、棒状杆菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属、假单胞菌属和色杆菌属则没有抗菌活性。     

抗生素处理对坛紫菜叶状体生长和藻际微生物的影响

设计了氨苄青霉素、硫酸庆大霉素和卡那霉素3种抗生素的不同组合处理坛紫菜叶状体,旨在筛选出坛紫菜叶状体藻际微生物的最优去除方法;同时,探究紫菜叶状体生长与微生物群落变化之间的关系。结果显示,低浓度(10μg/mL)的硫酸庆大霉素或高浓度(800μg/mL)的卡那霉素处理,对坛紫菜叶状体生长均具一定的抑制作用,而不同浓度的氨苄青霉素处理均促进了叶状体生长。500μg/mL的氨苄青霉素、500μg/mL的硫酸庆大霉素与300μg/mL的卡那霉素3种抗生素混合处理叶状体24 h,不会抑制叶状体的生长;同时,对藻际微生物有较强的抑制性。不同的坛紫菜品系,不同的叶状体日龄和培养密度,以及在不同的海水盐度和不同浓度的营养盐中培养,抗生素处理组圆盘体的生长均比对照组快。通过比较抗生素处理组与对照组分离的菌株后发现,抗生素处理组有两株菌落形态和菌株形态与对照组显著不同的特有菌株。研究表明,在坛紫菜叶状体的生长过程中,某些对叶状体生长起阻碍作用的细菌如果大量繁殖,会抑制对叶状体生长有益的细菌繁殖,当用抗生素抑制了阻碍生长的细菌,就会使益生菌成为优势菌,促进叶状体的生长,益生菌对上述抗生素的处理不太敏感,但由于培养条件的改变,抗生素对阻碍生长的细菌的抑制作用会减弱,使得它们大量繁殖,从而抑制叶状体的生长。     

蛭弧茵裂解作用的初步研究

蛭弧菌是一种寄生性细菌,广泛分布干土壤及备种水域之中,对诸多革兰氏阴性菌尤其是水产动物病原菌具有吞噬裂解活性.本文选取七株细菌为宿主菌,对蛭弧菌的裂解作用进行了初步研究.结果表明:除金黄色葡萄球菌外.蛭弧菌对其他六株菌均具有不同程度的裂解活性,其中以对红色假单胞菌的裂解能力更强.     

蛭弧菌裂解作用的初步研究

蛭弧菌是一种寄生性细菌．广泛分布干土壤及各种水域之中．对诸多革兰氏阴性菌尤其是水产动物病厚菌具有吞噬裂解活性。本文选取七株细菌为宿主菌．对蛭弧菌的裂解作用进行了初步研究。结果表明：除金黄色葡萄球菌外，蛭弧菌对其他六株菌均具有不同程度的裂解活性．其中以对红色假单胞菌的裂解能力更强。     

斑点叉尾鮰致病性嗜水气单胞菌的分离

从贵州乌江库区某渔场发病的斑点又尾鲴中分离出4株细菌。经形态学、染色特性、溶血性和生理生化特性鉴定，分离到3株嗜水气单胞菌。实验接种到鲤和小白鼠分别于48h和72h全部死亡，并从实验鲤鱼和小白鼠中回收到分离菌。药敏试验表明，它们对常用抗生素呈不同程度的敏感性。     

斑点叉尾致病性嗜水气单胞菌的分离

从贵州乌江库区某渔场发病的斑点叉尾中分离出4株细菌。经形态学、染色特性、溶血性和生理生化特性鉴定,分离到3株嗜水气单胞菌。实验接种到鲤和小白鼠分别于48h和72h全部死亡,并从实验鲤鱼和小白鼠中回收到分离菌。药敏试验表明,它们对常用抗生素呈不同程度的敏感性。     

硝化细菌对铜绿微囊藻生长的影响

细菌和藻类共同参与水生态系统中的营养再生和物质循环,研究菌藻之间的关系对调控水生态系统具有重要的意义.本研究通过菌藻共同培养,研究硝化细菌在不同环境条件下对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)生长的影响.结果表明,108 cells/mL和 109 cells/mL的硝化细菌对铜绿微囊藻有微弱的抑...     

Relationships between intracellular bacteria and the bivalve killer dinoflagellate Heterocapsa circularisquama (Dinophyceae)

ABSTRACT: Relationships between the growths of five different clonal strains of Heterocapsa circularisquama and intracellular bacteria were investigated using culture experiments. Although each H. circularisquama strain culture was established from one cell by repeated and careful washings with micropipettes, intracellular and extracellular bacteria in each strain culture were still observed under a epifluorescence microscope using the DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) staining technique. The extracellular bacteria are derived, presumably, from the inside of algal cells after the death and collapse of algal cells in culture. Using an electron microscope, bacteria were constantly observed in the cytoplasm and food vacuoles of H. circularisquama cells. The growth of five algal strains containing bacteria was compared with that of a bacteria-free strain using culture experiments under combined conditions of five different light intensities and five different strengths of culture medium. Bacteria showed no significant effect on the growth or survival of the algal cells. During the algal exponential growth phase, the intracellular bacterial cell numbers per algal cell decreased, whereas the total bacterial cell density in each algal culture increased. Final cell yield (total number) of the intracellular and extracellular bacteria varied considerably according to the algal strains. These results suggest that the intracellular bacteria of H. circularisquama grow or survive depending on the host alga, and that the alga can grow independently.     

抗菌性海藻酸钠涂膜在罗非鱼片保鲜中的应用

采用测定涂膜抑菌性能、缓释效果来探讨抗菌性海藻酸钠涂膜的抑菌机理并将其应用在罗非鱼片的涂膜保鲜中。实验结果表明,抗菌膜是一种具有缓释效果的保鲜膜,对大肠杆菌Esche-richia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、腐败希瓦氏菌Shewanella putrefaciens及鱼片表面其他杂菌均有较好的抑制效果,保鲜剂在40h内可从涂膜中完全释放;与未经涂膜处理的对照组相比,抗菌膜可以明显控制鱼片细菌总数的增长、维持较低的挥发性盐基氮值和改善鱼片的感官质量,综合考虑鲜度指标并本着以感官评分为基础的原则,抗菌涂膜处理可以将罗非鱼片的保鲜期延长约5.5d。     

２株污染小球藻的除菌技术

本论文在考察了普通小球藻(Chlorella vulgaris)和蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)对青霉素、硫酸链霉素和制霉菌素三种抗生素敏感性的基础上，研究了对已污染藻种进行无菌化的几种分离方法。结果表明，两株小球藻对抗生素的敏感性有明显差异；青霉素、链霉素与制霉菌素的联合使用与单独使用对藻生长的影响差别不是很大；液体培养中加入组合抗生素能够暂时抑制藻液中杂菌的生长，但并不能得到纯培养藻种；离心清洗与抗生素结合使用能够大量除掉细菌，却使霉菌旺盛生长，说明藻菌间存在复杂的相互关系；连续两次使用添加合适浓度混合抗生素的固体平板最终得到藻的纯培养物。