用RT-套氏PCR ELISA检测新城疫病毒

马来西亚研究人员研制了一种用敏感和特异的RT-套氏PCR结合ELISA检测系统检测新城疫病毒NDV的方法。从一致融合基因顺序设计了对所有3个致病型NDV都高度特异的两个套氏引物对。与其他禽传染性病原体没有交叉反应,包括传染性支气管炎病毒、传染性囊病病毒和禽痘病毒。根据琼脂糖电泳检测,这种RT-套氏PCR的敏感性比非-套氏RT-PCR高约100倍。为了检测PCR产物,研制了一种ELISA检测法可以检测扩增的PCR产物并证实其敏感性是凝胶电脉的10倍。还通过对从有ND症状鸡收集的35份样品进行测试,比较了这种套氏PCR-ELISA与常规NDV检测方法HA试验和非-套氏RT-PCR的效果。用这种RT-套氏PCR ELISA发现21份60%组织样品NDV阳性,而用非-套氏RT-PCR和常规HA试验分别只有8份(22.9%)和2份(5.7%)NDV阳性。由于其检测组织样品中的NDV高度敏感,可以用这种PCR-ELISA诊断试验筛选大量样品。     

口蹄疫病毒O型抗体直接竞争ELISA检测方法研究

目的建立一种敏感、特异、快速的O型口蹄疫病毒抗体检测方法。方法以O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1和HRP标记VP1兔抗血清为原料,通过方阵滴定试验确定ELISA的反应条件以及阈值,建立直接竞争ELISA检测方法 ,并运用该方法检测已知临床阴阳性样品。结果 VP1抗原包被浓度为50ng/μL;HRP标记抗血清工作浓度为1:2000;抑制率大于30%为阳性,抑制率小于30%为阴性;检测120阳性临床血清,阳性检出率为90.8%;检测120份阴性临床血清,阴性检出率为93.3%。结论研究建立的直接竞争ELISA方法操作简单,能够用于检测口蹄疫病毒O型抗体VP1抗体。     

长顺绿壳蛋鸡种群禽白血病净化技术探索

通过对长顺绿壳蛋鸡原种场100套种鸡,采用ELISA方法检测禽白血病A/B亚型和J亚型抗体、P27抗原,结合品种选育,淘汰阳性鸡,经4个世代净化,种鸡血清禽白血病A/B亚型阳性率8.88%、禽白血病J亚型阳性率9.17%,种蛋ALV-P27阳性率2.02%。     

入孵种蛋贮存以4天为宜

山东枣强马雪云、侯宗良等将新鲜种蛋和存放18℃、75％4d、8d和12d的种蛋同时入孵。在入孵的第2h、24h、48h和66h分别抽取4组存放不同天数的种蛋、测量蛋重丢失、蛋清PH值和蛋清厚度。结果表明：新鲜蛋清PH值在入孵后先迅速增加，至PH值为9时，变化缓慢，但最终表现新鲜蛋清PH值最低；入孵2h，新鲜蛋蛋清最厚，与贮存4d、8d和12d的种蛋比较，新鲜蛋的蛋清厚度在入孵后的前24h降低较快，贮存种蛋的蛋清厚度也逐渐下降，但下降缓慢，且贮存4d的蛋清厚度始终高于贮存8d、12d的种蛋；随着贮存和孵化时间的延长，种蛋重量丢失增加，直至趋向一致，即种蛋从种鸡产出至孵化结束，其蛋重丢失占种蛋重的百分比是一致的。新鲜蛋入孵24h的蛋清变化相当于种蛋在18℃，相对湿度75％环境下存放4d的变化，将新鲜蛋入孵，胚胎供养不足，死淘汰和弱雏率增大。而入孵前贮放4d的种蛋，其蛋清粘度和PH值变化刚好满足胚胎供养需要，孵化效果最佳。     

草鱼呼肠孤病毒HZ08株抗体IPMA检测方法的建立及应用

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对该方法特异性、敏感性、重复性、与ELISA检测结果的符合率及对临床血清样品的检测效果等进行了验证。结果显示,HZ08株种毒按照1×103拷贝/μL浓度接种后72h固定,HRP-Ig G二抗1∶1000稀释,待检血清1∶100稀释时效果最佳;该IPMA方法与草鱼阴性血清、免疫细菌三联疫苗的草鱼血清、感染GCRV JX0901(GCRVⅠ型)的草鱼血清无交叉反应;GCRV HZ08株阳性血清稀释至1∶800时仍能检出;批内和批间重复性实验显示,该方法具有良好的重复性;符合性实验结果显示,该IPMA方法与ELSIA方法的阳性和阴性符合率分别为95.7%和87.5%;用建立的IPMA方法检测草鱼出血病弱毒疫苗免疫草鱼,免疫2周后抗体水平达到峰值;对现地送检的126份草鱼血清样本进行检测,平均检出阳性率为72.2%。研究表明,建立的HZ08株IPMA方法特异性强、重复性好、敏感性高,为GCRVⅡ型的流行病学调查、疫苗免疫效果评价及抗原抗体检测提供了一种有效的检测手段。     

不同因素对樱桃谷SM2i型种蛋孵化效果的影响试验

本文就静置状态下种蛋在不同贮存时间、贮存位置、蛋重分级、凉蛋、喷水对樱桃谷SM2i型种蛋受精率和孵化率的影响进行试验，结果表明：种蛋贮存84h和108h孵化率最高，分别为85．85％和87．50％；尖端向上竖放孵化率最高，为84．95％；但对受精率无明显影响P〉0．05。随着蛋重增加受精率增高，中等大小（70．0～74．9g）的蛋孵化率较高；凉蛋、喷水对受精率无明显影响P〉0．05．但可使孵化率提高。     

复方中药方剂对鸡传染性支气管炎的疗效研究

鸡胚培养法是常用的病毒培养法之一,取9～11日龄SPF鸡胚,将IBV按每胚0.2mL接种鸡胚尿囊腔,剔除24h内死胚,将36～48h死亡胚和部分活胚置4℃冰箱过夜,无菌采集尿囊液(F1代)。同时观察记录鸡胚发育及胎儿病变情况。并测定其IBV半数感染量(EID50)及血凝特性试验,结果显示:传染性支气管炎病毒株在SPF鸡胚中复壮增殖,并引起鸡胚死亡,经连传2代后测定收获的尿囊液中病毒效价为10～4.50/0.1mL,凝集效价为1:256。     

Taura综合征病毒套式RT—PCR检测方法的建立及应用

Taura综合征病毒（TSV）是世界动物卫生组织（OIE）目录规定的水生动物二类疫病病原体。本研究在RT—PCR方法检测TSV行业标准的基础上，优化建立了能更准确检测TSV的套式RF—PCR。特异性和敏感性试验结果表明，该套式RT—PCR能对2个试验用TSV毒株的RNA进行扩增，并得到与预期大小一致的231bp的扩增产物，而其它2种对虾病原则无相同大小的特异性扩增产物出现；所建立的套式RT—PCR的灵敏度大约为常规RT—PCR的10。倍，最低可检测到10fg的TSVRNA。分别应用两种RT—PCR方法对180份分别来自广西沿海不同对虾养殖场的对虾临床样品进行检测，其中套式RT—PCR共有52份检出TSV，而常规RT—PCR仅有23份栓出TSV。表明所建立的套式RT—PCR提高了TSV的阳性检出率，较普通的常规RT—PCR有更大的应用价值和意义。     

蛋形指数、蛋重、蛋色对雉鸡孵化效果的影响研究

雉鸡又名山鸡(商品名),试验研究了中国雉鸡的种蛋蛋形指数、种蛋的重量以及颜色对孵化效果的影响。将雉鸡蛋形指数、蛋重各分为4个组,将雉鸡蛋色分为3个组,并进行孵化对比试验。试验统计结果对实际生产中具有一定的参考价值。     

鸡新城疫低毒力毒株（ZM10株）免疫SPF鸡后对非免疫鸡的扩散试验（6代毒力返强试验）

用鸡新城疲低毒力毒株（ZM10株）免疲7日龄SPF鸡，免疲后10d将不免疫的7日龄SPF鸡与之同居10d，将同居鸡取出，再将不免疲的7日龄SPF鸡与之同居、如此反复。从同居6代后SPF鸡脑和脾中分离到ND病毒，再将分离到的ND病毒接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，其ICPI低于0．4，MDT／MLD为112h；井从同居6代鸡血清中检测到抗ND抗体。     

葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测草鱼出血病病毒

本文报道葡萄球菌 A蛋白协同凝集(SPA COA)快速检测草鱼出血病病毒的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织检测的初步结果。并对该方法进行了特异性和敏感性考核以及凝集物的电镜观察。该方法快速、特异、设备简单,适合基层单位检测草鱼出血病病毒,并有可能作为草鱼出血病疫苗质量鉴定的指标之一。     

猪瘟病毒实验室诊断研究进展

猪瘟的实验室诊断中,主要有针对病毒抗原、抗体及分子生物学检测三大类方法。病原检测方法有免疫组化法、酶联免疫吸附试验(ELISA法)、免疫金标记技术等;抗体检测有免疫荧光中和试验(IFCNT)、间接血凝试验(IHA)等;分子生物学检测有反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等。     

微流控芯片技术检测虾四种病原微生物方法的建立

针对虾的白斑综合征病毒、桃拉综合征病毒、黄头病毒和十足目虹彩病毒1的基因保守序列设计LAMP引物,将引物包被于芯片反应槽中,将微流控芯片技术与LAMP等温扩增技术相结合,建立针对这四种病毒的高效准确检测方法。用不同浓度的病毒阳性模板检测了建立的检测方法对4种虾病毒与另1种常见虾病毒的特异性,并对20份阳性和30份阴性虾组织样本的特异性、敏感性和重复性进行了临床对比验证实验。结果表明：本研究方法灵敏度高,特异性强,重复性好,各病毒间无交叉反应,为同时快速检测虾的四种病毒提供了技术手段。     

抗犬瘟热高免卵黄抗体IHA检测方法的建立

目前检测卵黄抗体的方法很多,但IHA方法具有简便快速的优点,本研究的目的是为了建立抗犬瘟热高免卵黄抗体检测方法。采用犬瘟热病毒和犬细小病毒二联疫苗处理作为疫苗抗原,用犬瘟热病死犬的肝脏部分处理后作为组织抗原,制备敏化绵羊红细胞,用IHA方法确定了犬二联疫苗抗原和犬瘟热病毒组织抗原的最适含量。二联疫苗提取抗原的含量为0.7 mg/mL致敏红细胞时,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶256;而患犬瘟热松狮犬的肝脏组织抗原蛋白浓度为0.5mg/mL,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶128。经过IHA验证,制备的松狮犬瘟热肝组织抗原,蛋白含量0.5 mg/mL 1%致敏红细胞,对应的单抗、鸡血清均出现了凝集,阳性对照也出现凝集,阴性对照未出现凝集。建立的IHA抗体检测方法,为准确检测制备抗犬瘟热高免卵黄抗体的效价奠定了基础。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗及病毒株冷冻干燥保存法的研究

草鱼出血病是我国淡水渔业中危害严重的疾病之一，已研究出疫苗免疫防治的有效方法，而且疫苗制备已进入工厂化规模生产。但是以往的生产工艺中病毒株采用低温冷冻或磷酸甘油缓冲液4℃保存法，疫苗成品为水剂，这样病毒株的毒力稳定性较差，疫苗保存期较短，而且不能长途运输。为了保证疫苗质量和便于运输、使用，参考人、畜用疫苗制备方法，很有必要建立疫苗、病毒株冷冻干燥保存浩。本文就草鱼出血病细胞疫苗和病毒株冷冻干燥的方法进行研究，结果报告如下。1材料和方法1.1材料及主要设备草鱼出血病细胞培养灭活疫苗：按“草鱼出血病灭活…     

科海撷英

鼻腔接种犬瘟热弱毒疫苗的免疫效果犬瘟热疫苗的接种途径多采用肌肉注射方法,最近,朝鲜学者研究了经鼻腔接种犬瘟热毒疫苗的免疫效果。试验选用50日龄犬12只,间隔2周3次经鼻腔接种犬瘟热病毒Lederle株弱毒活疫苗。在首免后5周经鼻腔攻击强毒,应用蔗糖密度梯度超速离心(SGUC)提纯抗原,且以羊抗犬IgA-HRP或羊抗犬IgG-HRP结合物建立ELISA,用于检测鼻拭子或血清样品的抗体效价。此外,将鼻拭子样品接种Vero细胞单层,用兔抗犬病热病毒抗体和羊抗兔IgG-HRP结合物建立细胞ELISA(C-ELISA),检测结果表明,鼻腔免疫犬鼻拭子和血清样品的…     

普通变形杆菌TWN3株DNA疫苗的初步研究

普通变形杆菌TWN3分离自死亡大口鲇,菌的DNA文库已构建成功,通过免疫印迹法从文库中筛选到TWN3抗原片段PV4,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建DNA疫苗pcDNA3-PV4.肌肉注射免疫小鼠进行真核表达检测.免疫组织化学分析DNA疫苗在接种局部肌肉中抗原的表达,ELISA检测小鼠血清中的IgG及IFN-γ含量.免疫pcDNA3-PV4疫苗的小鼠肌肉细胞中检测到PV4相关抗原蛋白的表达.外周血中的IgG及IFN-γ显著高于免疫pcDNA3组.对小鼠进行免疫保护试验,免疫DNA疫苗的小鼠对TWN3菌有免疫力.初步显示构建的DNA疫苗有一定效果.试验结果为鱼类水体试验提供了参考依据,同时随着TWN3株菌DNA疫苗研究的深入,将对该疫苗最终大规模用于鱼类提供理论基础.     

不同营养水平的饲粮对产蛋期美国鹧鸪种蛋品质和代谢的影响

采用饲养试验和代谢试验相结合的方法，研究了不同营养水平的饲粮对产蛋期美国鹧鸪种蛋品质和代谢的影响。结果表明，不同营养水平的饲粮对种蛋品质的大多数指标影响不显著（P＞0．05），而对种蛋蛋白高度、哈氏单位等少数指标有显著性影响（P＜0．05），第4组的种蛋蛋白高度最大，为4．73mm，分别比第5、3、2、1组高2．54％、4．44％、5．71％、8．46％，其中第4组与第1、2、3组间有显著差异（P＜0．05），而与第5组差异不显著（P＞0．05）；第4组种蛋哈氏单位为84．66，分别比第5、3、2、1组高1．75％、1．91％、2．41％、3．01％，其中第4组与第1、2组差异显著（P＜0．05），而与第5、3组差异不显著（P＞0．05）。不同营养水平的饲粮对产蛋期美国鹧鸪的代谢也有影响，第4组能量代谢率最大，达76．25％，分别比第3、5、2、1组高1．11％、1．42％、2．09％、2．10％，其中与第1、2组差异显著（P＜0．05），而与第3、5组差异不显著（P＞0．05）；第4组蛋白质日沉积率最高，是79．43％，分别比第1、5、2、3组高1．35％、1．79％、1．88％、2．58％，但各组间差异不显著（P＞0．05）。     

酶联免疫方法(ELISA)快速检测水产品中药物残留假阳性原因浅析

基于抗原抗体反应基础上建立的酶联免疫分析法(ELISA),具有操作简单、快速、灵敏度高、特异性强等优点,是目前水产品中氯霉素残留筛选最常用的方法,但在实际操作过程中会发现有假阳性存在.为此,本文分析了ELISA方法检测水产品中氯霉素残留假阳性的原因.     

中国对虾几个产卵场群体携带白斑综合征病毒状况调查

白斑综合征可以导致养殖对虾短时间内大面积死亡,是迄今为止对虾养殖业面临的最大挑战。本试验采用巢式PCR法对2001年采自黄渤海的中国对虾几个产卵场群体进行白斑综合征病毒检测,旨在较全面地了解黄渤海野生中国对虾携带病毒状况。各群体的阳性检出率分别为：朝鲜半岛南海岸群体55％;渤海湾群体35％;辽东湾群体94．7％;海州湾群体47．4％。结果显示,中国对虾几个产卵场群体均不同程度地携带白斑综合征病毒。辽东湾产卵场群体阳性检出率明显高于其他群体,推测人工孵化苗种放流、海湾的地理和水质条件与中国对虾的WSSV感染率相关。而中国对虾野生群体携带病毒对于对虾养殖业的影响是不容忽视的,笔者认为,只有从无特异病原(SPF)及抗特异病原(SPR)对虾养殖群体的建立着手才能从根本上避免由于对虾携带病毒而可能导致的病毒性疾病的暴发。同时,应该重视海区污染的治理,减少病毒病暴发的诱因。本试验建立了快速检测WSSV的PCR方法,1pg病毒核酸仍可检测到,为白斑综合征病毒病的防治及早期诊断提供了有效的手段。