快速诊断中国对虾肝胰腺细小病毒病的冰冻切片方法

采用组织切片染色、冰冻切片染色、组织涂片染色和粪便涂片染色这四种观察包涵体的方法,对中国对虾肝胰腺细小病毒病进行诊断。四种诊断方法结果的比较表明,冰冻切片诊断方法具有快速、简便、准确、不易漏检的优点,可弥补组织切片诊断法时间长、组织涂片诊断法不可靠和粪便涂片诊断法易漏检的缺点。     

聚乙二醇切片法在牙鲆淋巴囊肿病毒检测中的应用

通过系列优化实验，选出了适合于牙鲆淋巴囊肿病毒检测的聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)包埋切片法；运用牙鲆淋巴囊肿病毒单克隆抗体的问接免疫荧光抗体染色技术，首次用PEG切片成功地对牙鲆淋巴囊肿组织中的病毒进行了检测；并与新鲜组织冰冻切片的实验结果进行了对比；另外，还对石蜡切片、PEG切片及冰冻切片的优缺点进行了讨论。结果表明，将制片温度控制在52℃以下时，PEG切片中的淋巴囊肿病毒的抗原性能够得到较好的保存，经过间接免疫荧光染色后，囊肿细胞的细胞质内观察到强阳性绿色荧光，与冰冻切片中的荧光强度无明显差别，表明PEG切片同冰冻切片一样能很好地保存病毒的抗原性。另外．PEG切片与石蜡切片一样对组织细胞的形态保存良好；而冰冻切片的细胞形态变化大，细胞质发生弥散、皱缩。因此，聚乙二醇包埋切片法能够同时保存病毒的抗原性和组织细胞良好的形态结构，应用于免疫组织化学、免疫病理等研究可以获得较好的效果。     

虾夷扇贝组织结构分析

把虾夷扇贝作为实验材料,掌握虾夷扇贝血涂片的制作方法,并运用HE染色组织切片的方法对虾夷扇贝的组织结构进行观察以及分析。用5mL注射器吸取2mL肝素钠,抽取1mL左右虾夷扇贝心脏血液,从载玻片一端滴一滴血液,左手水平拿着玻片,右手用另一个载玻片水平轻推血液,使其展平,在阴凉处风干,同样方法制取五个血涂片。留一个做空白对照,取两个血涂片用瑞氏染液染色,其他两个吉姆萨染液染色,放于阴凉处晾干留作观察。取新鲜扇贝组织切成1.0cm×1.0cm×0.3cm的组织块,经过固定、脱水与透明、浸蜡、包埋等过程后把组织块切成4~6μm的石蜡切片。再经过苏木素染色盐酸酒精褪色,后用伊红染液复染等过程后用中性树胶完成封片,待干后进行显微镜的观察以及拍照。最后通过观察与人体以及鱼类相关的组织结构进行分析对比。     

一种可用于现场观察对虾病毒包涵体的染色法

筛选出两种既可混合在一起，又能将对虾肝胰腺涂片的细胞核和细胞质分别着色的染色剂：台盼蓝和伊红Ｙ（Ｔ—Ｅ）。讨论了它们混合染色的条件与方法。用含有０．６％台盼蓝和０．２％伊红的混合染色液涂染肝胰腺细小病毒样病毒感染的对虾肝胰腺，观察到了核内的病毒包涵体。观察结果与病理切片苏木精－伊红染色结果吻合。这一方法用于野外现场进行对虾病毒感染的观察诊断，方法简便迅速，诊断结果与经典的苏木精－伊红染色法基本一致。     

简易诊断鱼病方法

在养鱼生产中，做到有效地防治鱼病，首先要能正确地诊断鱼病。下面介绍一种简单实用的肉眼诊断鱼病方法。肉眼诊断法是捞取3～5尾病鱼或因病刚死还未腐烂的鱼，仔细观察鱼的体表，鳃和肠道，作分析诊断。     

8种染色方法对组织切片中虾肝肠胞虫染色效果的比较

病理检测是一种诊断病原及观察机体组织病理变化的重要方法,特殊染色是在病变组织中寻找病原体的前提手段,良好的染色有助于将病原体与组织区别,从而增加病原在组织切片中的检出率。为筛选出一种适用于虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)病理切片检测的最佳染色方法,使用苏木精-伊红(HE)染色法、Masson染色法、爱显蓝-雪夫(AB-PAS)染色法、甲苯胺蓝(TB)染色法、伟郝夫范吉森(EVG)染色法、劳克坚牢蓝(LFB)染色法、天狼猩红(Sirius red)染色和普鲁士蓝(PB)等8种染色方法对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)感染了虾肝肠胞虫的肝胰腺进行组织病理切片染色,并结合对EHP检出率的统计分析,比较了这些染色方法的优缺点。结果表明:HE染色法、AB-PAS染色法、TB染色法、EVG染色法、天狼猩红Sirius red染色法和PB染色法对孢子的染色效果较差,与背景颜色对比不明显,单个视野检出率较低; LFB染色法虽然使孢子易被识别,但是有孢子丢失现象,且组织染色效果差; Masson染色结果显示孢子呈现品红色,与组织颜色对比鲜明,孢子颗粒清晰可见,对组织细胞结构染色效果较好,且检出率也最高。综合分析染色效果及检出率,Masson染色法是一种非常适用于组织内的虾肝肠胞虫孢子染色的方法,本研究为微孢子虫病的组织病理研究提供一种有效的基础手段。     

虹鳟卵的过熟现象

本研究是在一九六六年和一九六七年一～三月份进行的。试验用鱼取自琦玉县水产试验场熊谷养鳟试验池养成的3～4令的雌虹鳟。方法是使排卵后的卵,长时间地停留在母体内,从排卵时算起,以后每隔3天(67年)和5天(66年)挤出部分卵,观察卵在过熟过程中的外部形态、组织构造以及遇水被激活后的形态变化等。普通组织学检查以Bauin氏液或20％福尔马林液为固定剂,石蜡包埋作成切片,以Mayer氏酸性铝苏木精—伊红、Heidenheirn氏azan染色。组织化学方面以高碘酸—schiff(PAS)法勘定细胞中皮质泡,用苏丹Ⅲ或苏丹黑B染色的冰冻切片勘定细胞中的油球。     

三角帆蚌细菌病病理组织的显微结构研究

用黄杆菌、温和气单胞菌、不动杆菌、产碱杆菌、产碱假单胞菌及其5种混合细菌人工感染健康的三角帆蚌,切取病蚌肝脏、肠道、鳃和斧足等主要器官的组织,采用美蓝染色法进行细菌涂片和制作石蜡组织切片。试验表明：感染温和气单胞菌、产碱假单胞菌和5种混合细菌的病蚌组织切片与对照组相比,有明显不同,尤其是肝脏、肠道和鳃组织发生了明显的病理变化。     

鱼类和虾蟹血细胞染色方法

血细胞染色观察对于动物的生理和病理研究具有十分重要的意义,特别是对于与血液及细胞免疫相关的疾病,血细胞染色观察至今仍是最基本的诊断手段.血细胞涂片染色效果的好坏,对于细胞的形态观察和分类具有决定性的意义,也是血细胞染色方法应用中的一个难点.……     

文昌鱼类弹性蛋白的组织化学研究

用组织化学的方法对文昌鱼鱼体各段连续切片进行检测，发现其口须支持骨骼及鳃弓骨骼中存在VIH染色阳性物质。再用弹性蛋白酶对文昌鱼咽部组织切片及新鲜解剖的鳃组织进行消化，镜检后发现VIH阳性物质已被消化掉。从而提示文昌鱼鳃弓骨骼中的VIH阳性物质可能是一种类弹性蛋白。     

山羊传染性胸膜肺炎综合诊治

探讨山羊传染性胸膜肺炎综合诊治,依据流行病学、临床症状、病例变化、结合涂片染色镜检、血清学诊断和分子生物技术等对病羊进行正确诊断,并采用中西医结合的方法对患病山羊进行综合治疗。     

毛蚶组织切片的制作和观察

以毛蚶组织为试验材料,使用苏木精—伊红染色法(HE染色法),对毛蚶组织结构进行固定、切片、染色。将制作的组织切片放在显微镜下,观察其组织结构特点,探讨贝类组织切片制作的各个技术要素。     

醋酸洋红染色技术在大菱鲆幼鱼生理性别鉴定中的应用

综合运用肉眼观察、活体压片-醋酸洋红染色和组织切片—H.E.染色3种方法对大菱鲆Scophthalmus maximus L.幼鱼进行性别鉴定.结果表明,在所有采集的1 217尾全长8.3～21.5cm、体重9.0～183.9 g的大菱鲆幼鱼样品中,体重＞90 g的269尾幼鱼和体重10～90 g的790尾幼鱼,可用肉眼直接观察鉴定性别;体重10～90 g的另外154尾幼鱼,可采用活体压片方法鉴定性别;体重＜10 g的4尾幼鱼,性腺难以剥离,则需组织切片的方法鉴定性别.对活体压片性别鉴定结果进行组织切片抽样验证表明,体重＞10 g的幼鱼,均可以采用活体压片方法准确地鉴定出性别,其准确率可以达到100％.本研究验证了采用活体压片-醋酸洋红染色技术在大菱鲆幼鱼生理性别鉴定中具有很高的准确性,它不仅有利于全雌育种中对幼鱼快速进行性别鉴定,而且可以应用于商品苗性别的快速鉴定.     

猪寄生虫病粪便虫卵检查法

1直接涂片检查法是简便和常用的方法，但检查时所用的粪便数量少，故检出率较低。本法是先在载玻片上滴1滴甘油与水的混合液，再用牙签或火柴棍挑起少量粪便加入其中，混匀，夹去较大的粪渣，最后使玻片上留有一层均匀的粪液，其浓度的要求是将此玻片放于书上，能通过粪便液膜模糊地看出其下的宇为合适。     

1994年浙江省对虾暴发性流行病病原及传播途径的初步调查

用Ｔ—Ｅ染色、单克隆抗体的ＥＬＩＳＡ现场诊断、组织切片和Ｈ—Ｅ染色和电镜观察等不同方法对１９９４年浙江省乐清和温岭两地区虾池及海区样品进行了现场和实验室检查。结果说明，１９９４年浙江省对虾暴发性流行病实质上是杆状病毒性的皮下及造血组织坏死，病原为ＨＨＮＢＶ。检查到的ＨＰＶ不是这场暴发病的病原。对非对虾类生物和对虾鲜活饲料的单抗ＥＬＩＳＡ检测表明，海区张网饲料可能是１９９４年浙江对虾暴发性流行病的主要传染源，病虾池中除对虾外，其它甲壳类生物在该病的传播上可能也起到一定的作用。这些生物除了可能传播ＨＨＮＢＶ外，还可能传播ＨＰＶ。     

一起孵化鸭胚高死亡现象的诊断和防治

1999年8月，我们诊断处理了一起鸭胚在孵化10～18日龄期间高度死亡病例，最后确诊为种鸭混合感染沙门氏菌和大肠杆菌，通过饲料中给药治疗和自制本地株灭能苗接种种鸭群，成功地控制了本病，现将有关诊断情况报告如下。 1 基本情况 　　1999年8月，重庆市某地抱房发生鸭胚在孵化过程中死亡率骤增，死亡时间集中在孵化10～18日龄的现象。死亡鸭胚多数变色、恶臭、严重腐败，少部分死亡胚未变色，也无明显臭味。该抱房种蛋来源固定，来自于同一种鸭场，其孵化前和孵化过程中消毒处理同以前一样，其受精蛋孵化率历来较高，达95％左右，却突然下降到40％左右。其母鸭无任何患病的迹象。 2 实验室诊断及结果 2．1 涂片镜检无菌破壳，分离出卵黄，用铂金耳取少许涂片，革兰氏染色，镜检。镜下可见单个、散在的细小菌或短杆菌，呈革兰氏阴性染色，细菌大小为（1～3）μm×（0．4～0．7）μm。     

对虾养殖常见疾病的诊断、预防与治疗

本介绍对虾养殖中常见的几种疾病（黑死病、黑鳃病、肝胰脏病、白斑病，弧菌病），一般的肉眼诊断和显微镜观察诊断法、及治疗方法。在初中中，采取生态养殖模式的病害预防措施，结合药物的控制与治疗，在虾农中推广应用，取得一定的成效。     

奶牛早期妊娠诊断技术研究概况与展望

奶牛早期妊娠诊断是提高繁殖效率的重要措施之一。本文综述了目前在奶牛早期妊娠诊断中常用的几种方法,包括观察诊断和直肠触诊法、超声波诊断、孕酮测定诊断法、早孕因子(EPF)检测法、免疫乳胶凝集试验(LAIT)诊断、其它生化方法;并对以后的诊断技术进行了展望。     

养殖刺参腐皮综合征 2 种致病菌间接荧光抗体快速检测方法

以养殖刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合征的2种致病菌:灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为抗原,分别制备兔抗血清。以载玻片为介质,建立了2种病原菌的间接荧光抗体检测技术(IFAT)。交叉反应、阻断试验和吸收试验结果均表明本方法特异性强。对人工感染实验中的养殖水体及发病刺参溃烂组织检测,可以检出水体和患病刺参溃烂组织中的相应病原菌,病原菌被染成明亮的黄绿色,检测灵敏度2.4×104cell/mL。冰冻切片检测结果显示,在刺参肿胀嘴部与溃烂肌肉处有大量染成黄绿色的细菌颗粒。结果表明:采用IFAT可以对刺参腐皮综合征2种致病菌进行准确快速的检测。该方法的建立对刺参腐皮综合征的流行病学调查及快速诊断具有重要意义。     

鳜鱼和鲈鱼主要消化器官显微结构的比较

采用常规石蜡切片、H.E染色的方法,对鳜鱼和鲈鱼主要消化器官,包括胃、肠和肝三种组织进行显微结构研究并比较。结果表明,鳜鱼和鲈鱼胃腺都很发达,肌层较厚,鲈鱼粘膜下层中胶原纤维较多;鳜鱼肠四层结构分界明显,没有肠腺分布,肠上皮细胞中含杯状细胞,鲈鱼肠粘膜下层不明显,上皮细胞中杯状细胞较多;鳜鱼肝细胞索状排列,细胞较大,细胞界限不清,在肝细胞间有大量脂肪存在,而鲈鱼肝细胞单个疏松排列,核仁清晰,细胞界限明显,两种鱼肝组织中均未观察到枯否氏细胞的存在。