单克隆抗体酶联免疫技术检测对虾皮下及造血组织坏死病的病原及其传播途径

用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ技术对１９９４年５月～７月自山东和辽宁采集的虾池和海区材料，包括对虾、浮游生物、小型甲壳类生物、鱼类、底泥及饲料等共１９２个样品进行了对虾暴发性流行病病原ＨＨＮＢＶ的检测。结果表明，对虾中的ＨＨＮＢＶ阳性与虾池发病情况基本相符，用单抗ＥＬＩＳＡ方法可提前２０～４０ｄ对虾池的发病可能性作出预报；桡足类浮游生物的带毒率高于对虾，且其阳性的出现早于对虾，沿岸海区的桡足类浮游生物有较高的阳性率，它可能是对虾暴发性流行病的主要病原携带者；部分地区的卤虫也带有ＨＨＮＢＶ，同时还从糠虾等小型甲壳类生物中检出了病原。     

1993～1994年山东省中国对虾育苗期病毒感染的流行病学调查

１９９３年和１９９４年育苗期，在山东省十余家育苗场采集了亲虾、受精卵、无节幼体、蚤状幼体、糠虾幼体和仔虾等样品共５６份。组织病理学切片观察说明，所有样品均未检查出对虾暴发性流行病病原ＨＨＮＢＶ的病理变化；ＨＰＶ的病理变化主要在亲虾、糠虾幼体和仔虾中检出，蚤状幼体有ＨＰＶ感染的可疑情况。１９９４年，５．５％的糠虾幼体和５．１％的仔虾检出有ＨＰＶ的感染。在糠虾和仔虾阶段，海捕亲虾苗种的ＨＰＶ带毒率为４．０％，越冬亲虾苗种的带毒率为６．２％。ＨＰＶ和ＨＨＮＢＶ的单克隆抗体ＥＬＩＳＡ检测方法表明有３个样品为可疑的ＨＨＮＢＶ阳性；有１２．５％～２５％的糠虾期育苗池和７０％的仔虾期育苗池存在有ＨＰＶ的感染。     

对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒单克隆抗体的研制

用经密度梯度离心纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ—９３７）注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其免疫后的脾细胞与ｓｐ２／０骨髓瘤细胞进行融合。经筛选与克隆，获得７株抗ＨＨＮＢＶ的单克隆杂交瘤细胞株。其中Ｆ９株的染色体数为８７，ＥＬＩＳＡ测定培养上清中单抗滴度为１∶８，腹水为１∶１０００。患有杆状病毒的皮下及造血组织坏死症的对虾组织切片的单抗酶联免疫染色，表明Ｆ９株单抗只与ＨＨＮＢＶ病灶发生特异性结合，与对虾组织结构不发生特异性反应。将其用于现场样品的检测研究表明，该抗体适于用来进行对虾暴发性流行病的病原检测。     

中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（HHNBV）DNA探针的制备及应用

ＨＨＮＢＶ是１９９３年中国对虾暴发性流行病的主要病原之一。从纯化的病毒中提取ＤＮＡ，用ＥｃｏＲｌ限制性内切酶酶切成ＤＮＡ片段，与ＰＵＣ１８体外重组，建立ＨＨＮＢＶＤＮＡ文库。从中筛选出三个重组质粒（５＃、８＃、９＃），它们所插入的片段大小分别为：２．８Ｋｂ、０．８Ｋｂ、１．６Ｋｂ，它们分别用光敏生物素标记成探针，与感染ＨＨＮＢＶ的病虾ＤＮＡ呈阳性反应，以此利用制备的ＨＨＮＢＶＤＮＡ探针的高敏感性和特异性来检测虾病。     

对虾暴发性流行病病原对中国对虾幼体及仔虾的人工感染研究

用对虾暴发性流行病病原（ＨＨＮＢＶ）作为人工感染实验的毒种来源，对中国对虾幼体及仔虾进行了人工感染研究，结果表明ＨＨＮＢＶ通过水体浸浴不能感染健康的中国对虾卵，幼体及仔虾；但可通过投喂感染健康的中国对虾仔虾，使其发病死亡，死亡的进程随着体长的增加而缩短。     

首例斑节对虾越冬亲虾发生杆状病毒的皮下及造血组织坏死症研究

湛江长洪对虾苗种实验场的斑节对虾转入越冬池后３～１０ｄ内发生暴发性死亡，症状与北方地区杆状病毒的皮下及造血组织坏死症一致。病理学研究表明，所有发病虾样的皮下组织、造血组织、结缔组织、肝胰腺血窦、淋巴器官等细胞核均存在严重的ＨＨＮＢＶ病灶，只有２０％的发病对虾肝胰腺中观察到轻微感染的ＭＢＶ包涵体。ＨＨＮＢＶ单抗的酶联免疫染色，可对ＨＨＮＢＶ的病灶产生特异性着色，对虾组织结构和ＭＢＶ包涵体均不着色。在山东培育三代并养殖１６个月的斑节对虾中也观察到与湛江发病的越冬亲虾相同的情况。以上说明，近年来在广东一带ＨＨＮＢＶ是值得重视的病原，其危害可能重于ＭＢＶ。对于发生过对虾暴发性流行病的群体来说，不宜用来作为亲虾。     

对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒的精细结构、核酸、多肽及血清学研究

对纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）进行了超微结构、紫外吸收、核酸类型及多肽ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的研究。同时用单克隆抗体对ＨＨＮＢＶ的两分离株和ＭＢＶ进行了血清学比较研究。用ＴＭＶ作为内标定物测得病毒粒子大小为１５０ｎｍ×４５０ｎｍ，其衣壳为两个帽状物端夹１３圈螺旋对称的园柱体结构。病毒在２６０ｎｍ处吸光系数为０．１１７ｍｇ／ｍＬ／ＯＤ２６０。病毒核酸为双链ＤＮＡ，分子量大于３５×１０６ｄ。病毒囊膜有１２种主要多肽。病毒衣壳有两种主要多肽。从寿光（ＨＨＮＢＶ—９３７）和青岛（ＨＨＮＢＶ—９３８）分离到的病毒种在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和抗ＨＨＮＢＶ—９３７单抗ＥＬＩＳＡ反应上没有显著差异。ＨＨＮＢＶ与斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）在抗原决定簇上存在差别。     

1993_1994年对虾暴发病的流行病学研究

研究了山东省１９９３─１９９４年对虾暴发性流行病的群体病症及其发展，分析了该病的地区、时间、种间分布及个体差异。结果表明：典型的虾池发病历时一周，死亡率达９０％以上；凡虾池密集（＞７０公顷／公里海岸线）、放苗量大（４５—６０万／公顷）、投入高（４５，０００—７５，０００元／公顷）的地区发病早、损失大。发病时间主要在６—７月。１９９３年病程短而急，形成一个发病高峰，近似流行病学的偏态分布（对数常态分布）；１９９４年病程长而缓，部分地区形成两个高峰。根据流行病学原理推算了１９９３年青岛流亭对虾暴发性流行病的平均潜伏期（６．０２天）和暴露日期。依据１０７个样品的切片分析，证实对虾暴发性流行病的病原为皮下及造血组织坏死病毒（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａｌａｎｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＨＮＢＶ）。还讨论了流行病发生与环境因子，如温度、溶氧、ｐＨ、浮游生物、放苗密度以及投饵等之间的关系。     

斑节对虾（Penaeus monodon）暴发性病害的病原超微结构观察

斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ）暴发性病害的病原超微结构观察ＳＵＰＥＲＭＩＣＲＯＳＴＲＵＣＴＵＲＥＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＰＡＴＨＯＧＥＮＯＦＥＸＰＬＯＳＩＶＥＤＩＳＥＡＳＥＯＦＢＬＡＣＫＴＩＧＥＲ（ＰＥＵＡＥＵＳＭＯＮＯＤＯＮ）邓国成李焕...     

抗病毒药物防治对虾暴发性流行病试验

抗病毒药物防治对虾暴发性流行病试验ＴＨＥＥＦＦＥＣＴＯＦＡＮＡＮＴＩＶＩＲＵＳＤＲＵＧＯＮＰＲＥＶＥＮＴＩＮＧＡＮＤＣＵＲＩＮＧＳＨＲＩＭＰＥＸＰＬＯＳＩＶＥＥＰＩＤＥＭＩＣＤＩＳＥＡＳＥ李健，孙修涛，刘萍，麻次松，王秀华（中国水产科学研究院黄海水产...     

对虾病害发生的原因调查及对策分析

本文报道了１９９３年和１９９４年在山东烟台地区养殖对虾发生严重流行病原因的调查结果，着重从养殖环境和饲养管理技术上分析产生疾病的原因，提出了在养殖过程中增强对虾体质、预防疾病的七项措施。     

中国对虾放流群体在象山港中的移动和分布

浙江沿海没有中国对虾的自然分布。七十年代初引种南移至池塘获得成功。把中国对虾的南移从人工控制下的有限水体中向自然海域扩大,即进行人工放流与移植,是提高近海生产力的一个好途径。这对改变生态结构也有积极意义。了解、掌握放流移植虾群在港内的移动、分布、集群与出港规律是本项研究的重要内容。研究表明,移植虾群的移动和分布规律既显示出与它的发源地黄渤海相似的共性,又由于港域独特的地理条件和生态环境显示出自身的地理群特性。     

Tissue distribution of hepatopancreatic parvo‐like virus of shrimp in freshwater rice‐field crab,Paratelphusa hydrodomous (Herbst)

An attempt was made to determine the replication efficiency of hepatopancreatic parvo‐like virus (HPV) of shrimp in different organs of freshwater rice‐field crab Paratelphusa hydrodomous (Herbst) using bioassay, PCR, RT‐PCR, ELISA, Western blot and q‐PCR analyses. Another attempt was made to use this crab as an alternative to penaeid shrimp for the large‐scale production of HPV. This crab was found to be highly susceptible to HPV by intramuscular injection. The systemic HPV infection was confirmed by PCR and Western blot analyses in freshwater crab. The expression of capsid protein gene in different organs of infected crab was revealed by RT‐PCR analysis. Indirect ELISA was used to quantify the capsid protein in different organs of the crab. The copy number of HPV in different organs of the infected crab was quantified by q‐PCR. The results revealed a steady decrease in C_T values in different organs of the infected crab during the course of infection. The viral inoculum that was prepared from different organs of the infected crab caused significant mortality in post‐larvae of tiger prawn, Penaeus monodon (Fabricius). The results revealed that this rice‐field crab could be used as an alternative host for HPV replication and also for large‐scale production of HPV.     

对虾配合饵料与虾病防治关系的研究

对虾配饵中动、植物蛋白比接近1:1为宜,如果动物蛋白不足,对虾生长发育不良,易感染各种疾病。配饵中添加鱼油试验经生物统计表明,鱼油是对虾增重的第一限制因子。配饵中缺乏鱼油,对虾食欲不振,会引起消化生理代谢障碍。对虾配饵原料质量如油脂氧化酸败与原料霉变及霉变产生的毒素,对对虾生长极其不利。不仅使虾体瘦弱,抗病力减弱,而且死亡率比对照组明显增高。因此,对虾配饵精选原料是保证配饵质量、减少发病率、提高成活率的关键因素。     

Biosecure Shrimp Feeds and Feeding Practices: Guidelines for Future Development

For the purposes of this paper, biosecure shrimp feeds and on‐farm feeding strategies refer to the “feed, whether live, fresh, or formulated, and the management of the feed on the farm, should not be an entry point of potential pathogens to the shrimp and/or to the culture system.” The paper reviews the different feeds commonly used for the production of farmed shrimp and discusses their potential risks from a disease perspective, including the use of live hatchery and nursery feeds, the use of live and/or fresh food organisms for the production of broodstock, and the use of dry formulated shrimp feeds for shrimp growout operations. In addition, the paper discusses the critical role played by feed‐processing techniques for the pasteurization and destruction of pathogens within shrimp feeds and the need for nutritionists to formulate feeds for optimal nutrition and health, and not just for optimal growth. The importance of the development and implementation of good on‐farm feed management practices by farmers is discussed, including the prohibition of the top‐dressing of pelleted feeds on farm by farmers with unapproved feed additives such as antibiotics. Finally, the paper discusses the responsibilities of farmers, feed manufacturers, and traders regarding the development and use of recommended biosecure shrimp feeds and feeding practices.