拟穴青蟹卵巢蛋白质双向电泳的样品制备方法

为探索适用于拟穴青蟹卵巢蛋白质双向电泳的样品制备方法,比较了TCA/丙酮沉淀法和3种裂解液抽提法对总蛋白的提取效果,4种方法分别得到133、369、306和417个蛋白点。采用裂解液Ⅲ(7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4% CHAPS、40 mmol/L Tris-base、65 mmol/L DTT、2% IPG Buffer、Protease in hibitor cocktail、1 mmol/L EDTA)提取蛋白所得图谱效果最好,背景清晰,蛋白点最多。     

盐胁迫条件下盐藻的生长及特异表达蛋白的研究

采用不同NaC1浓度培养盐藻.通过分光光度法记录其生长状态.试验结果表明,在NaC1浓度为1.0～2.0 mol/L时.盐藻生长状态良好;NaCl浓度为3.0～4.0 mol/L时盐藻生长缓慢;盐藻经不同NaCI浓度培养0.5、5、23 h后抽提蛋白,所获得的粗提蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,观察不同NaCI浓度培养液中生长的盐藻可溶性蛋白质SDS-PAGE图谱.发现在低NaC1浓度(1.0～2.0 mol/L)下培养时23、51 kD蛋白略有变化但变化不大;在高NaC1浓度(3.0～4.0 mol/L)下胁迫5、23 h时23 kD蛋白显著增加;高NaC1胁迫23 h时51 KD蛋白含量下降明显.验结果证明51、23 kD蛋白可能与盐藻耐盐机制有关.     

菊黄东方鲀鱼精蛋白提取工艺优化研究

为研究河鲀鱼精蛋白的制备工艺,以菊黄东方鲀(Takifugu Flavidus)精巢为原料,以鱼精蛋白提取率为指标,通过单因素试验研究NaCl溶液的pH、硫酸浓度、硫酸用量、提取温度、提取时间以及乙醇用量等单因素对鱼精蛋白提取率的影响,在此基础上,采用响应面法优化鱼精蛋白的提取工艺条件。结果显示,采用响应面法优化获得河鲀鱼精蛋白的最佳提取工艺条件为:NaCl溶液pH 8.5,硫酸浓度0.6 mol/L,硫酸用量4.0倍沉淀体积,提取温度45℃,提取时间2.4 h,乙醇用量4.0倍沉淀体积,此时鱼精蛋白提取率达到19.07%。研究表明,响应面法对河鲀鱼精蛋白提取条件的优化方案合理可行,可为河鲀精巢的开发利用提供参考依据。     

正交试验确定扇贝蛋白质沉淀的最佳条件

水产品中蛋白质提取有很多种方法,为了确定扇贝蛋白质最好沉淀前提,为扇贝深加工产品的开发提供理论依据,本文采用了正交尝试计划了三身分三程度的L9尝试,采用考马斯亮蓝G-250法来测定蛋白质的含量。结论表明:扇贝蛋白质在温度为85℃,时间为45min,氯化钠浓度为10%时为最好沉淀前提。     

镉在海藻中的化学形态

利用化学试剂逐步提取法研究了紫菜、海带、裙带菜和羊栖菜中镉的存在化学形态。研究结果表明:镉以多种化学形态存在于4种海藻中,1 mol/L氯化钠提取态镉和 2% 醋酸提取态的镉所占比例较大,两者约占总镉含量的76.3%～92.9%。0.6 mol/L盐酸提取态、去离子水提取态和80%乙醇提取态镉所占比例较小,其中乙醇提取态(离子态镉)约仅占总镉含量的0.4%～9.2%,且对于4种海藻,紫菜中的离子态镉所占比例最低(均小于1%)。实验进一步证实以海藻中总镉含量作为检测标准不能准确反映海藻及其制品的食用安全性,因此亟需建立海藻中针对毒性较强的离子态镉的检测标准限量和快速有效的检测方法,以保障我国海藻产业和出口创汇经济的顺利发展。     

条斑紫菜蛋白酶解多肽的抑菌活性

以条斑紫菜为原料,分别提取水溶、酸溶、碱溶、盐溶性蛋白质,并用6种蛋白酶酶解,将所得24种酶解物采用琼脂孔穴扩散法对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、四联微球菌(Micrococcus tetragenus)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)以及大肠杆菌(Escherichia coli)4种菌进行抑菌活性测定。结果显示,水溶性胃蛋白酶酶解物的抑菌活性最优。将水溶性蛋白质经硫酸铵沉淀以及超滤分级,比较不同饱和度硫酸铵沉淀所得蛋白质酶解物以及不同分子量多肽的抑菌效果。结果显示,水溶性蛋白在硫酸铵饱和度为40%、50%时沉淀所得蛋白的胃蛋白酶酶解物中,相对分子质量小于5 k Da的级分抑菌效果最为明显。此外,对该级分进行了抑菌活性影响因素的初步研究,结果表明该级分热稳定性以及酸碱稳定性均较好,有望开发为天然的食品防腐剂。     

条浒苔蛋白质的纤维素酶辅助提取及其性质

以条浒苔为研究对象,以蛋白质提取率为指标,通过单因素试验确定提取条件,后采用均匀设计确定纤维素酶辅助提取工艺条件。结果表明,条浒苔蛋白质的提取条件为pH 11.0,温度60℃,时间5h;纤维素酶辅助提取条件为料液比1∶50,温度30℃,pH 5.5,时间5.5h,加酶量5.0%,纤维素酶处理后再经水提取5h,在此条件下蛋白质的提取率为30.22%~35.74%。为浒苔深加工及资源化利用,测定浒苔蛋白质的功能特性,结果表明,条浒苔蛋白质的等电点pI=3.0,在pH 7时起泡性最好,起泡性随着蛋白质溶液的浓度增加而增强,泡沫稳定性在pH 3和质量浓度2mg/ml时最好,乳化性在4mg/ml时最好,乳化稳定性在2mg/ml时最好,条浒苔蛋白质的吸油性为131.6%,60℃时溶解性最大。     

桑沟湾标准化与传统养殖模式海带的营养成分比较

采用常规分析方法，对桑沟湾同一海域标准化养殖模式和传统养殖模式下海带(Saccharina japonica)产品的主要营养成分进行了分析比较。结果显示，2种养殖模式下海带的水分含量均高于88%，差异不显著；蛋白质含量差异不显著，而可溶性蛋白含量差异显著；脂肪含量均较低且二者差异不显著。标准化养殖模式下海带的必需氨基酸含量(除赖氨酸外)和呈味氨基酸含量均高于传统养殖模式，其中，谷氨酸含量最高，分别为1.75%和1.27%。2种养殖模式下的海带各种脂肪酸含量较低，均低于1%。标准化养殖模式下海带的Zn、Mg、Na和K 4种矿物质元素的平均含量都略高于传统养殖模式。标准化养殖模式下海带的可溶性糖含量显著高于传统养殖模式，褐藻胶含量分别为22.66%和21.27%，标准化养殖模式略高。研究表明，与传统养殖模式相比，标准化养殖模式海带产品的蛋白质、氨基酸、脂肪酸、矿物质元素、可溶性糖及褐藻胶等含量较高，显著提高了海带产品的营养和品质，同时，也提高了其作为食品和工业原料的价值，桑沟湾标准化海带养殖模式表现出显著优势。     

缢蛏蛋白组分Y3的提取及抑癌活性研究

以新鲜缢蛏Sinonovacula constrzcta为材料,经25 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5,含0.14mol/L NaCl)缓冲液提取缢蛏粗蛋白、透析、DEAE离子交换层析、Sepharose CL-6B凝胶层析,得到1种具有抑癌生物活性的缢蛏蛋白组分Y3.SDS-PAGE电泳测得该蛋白组分的分子量约为64 kD.采用MTT比色法检测Y3对4种肿瘤细胞增殖的影响.结果显示,Y3对Hela和BGC803细胞有明显的抑制作用,而对SKOV3和HepG2抑制作用不明显.此外,探讨了Y3对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力.结果显示,该蛋白组分清除自由基的能力很强,在浓度为100 μg/ml时,Y3对羟基自由基清除率达到92.71％.在3μg/ml下,对超氧阴离子自由基的清除率达到59.73％.     

锌胁迫对海洋小球藻生长和金属硫蛋白诱导的影响

研究锌离子胁迫对海洋小球藻生长和金属硫蛋白诱导的影响,当小球藻达到对数生长期,用不同离子浓度(5、10、20、50和100μmol/L)的锌盐(氯化锌、柠檬酸锌、乙酸锌和葡萄糖酸锌)分别进行胁迫培养,通过测定小球藻的生物量和锌结合金属硫蛋白含量,考察锌胁迫对海洋小球藻的生物量、热稳定蛋白含量以及锌结合金属硫蛋白含量的影响。结果显示,当浓度分别小于5和10μmol/L时,柠檬酸锌和氯化锌对小球藻生长无显著抑制作用;而浓度为5μmol/L时,乙酸锌和葡萄糖酸锌对小球藻生长即产生显著抑制,且抑制作用皆随锌离子浓度的增加而增大。与对照组相比,4种锌盐胁迫3 d后小球藻产生的热稳定蛋白含量极显著增加,其中以锌离子浓度为50μmol/L的葡萄糖酸锌对小球藻胁迫产生的热稳定蛋白含量最高,达到34.5 mg/g(湿藻泥)。同样在此浓度的葡萄糖酸锌胁迫下,小球藻诱导产生的锌结合金属硫蛋白的含量最高。研究表明,用锌离子浓度为50μmol/L的葡萄糖酸锌对小球藻胁迫培养,诱导产生的锌结合金属硫蛋白含量达到最高。     

海带多糖凝胶颗粒加工过程碘含量的变化

采用灰化法对海带多糖凝胶颗粒加工过程各工序的海带碘含量进行测定,并对结果进行方差分析,研究探讨了海带多糖凝胶颗粒加工过程碘含量的变化。结果表明:杀青处理对碘含量的流失有显著影响(P<0.01),其中海水杀青的海带碘含量为0.066%,极显著高于淡水杀青海带(P<0.01);海带制备成多聚糖膳食纤维,其碘含量显著低于鲜海带(P<0.01),其中海水杀青海带制备的海带多聚糖膳食纤维的碘含量极显著高于淡水杀青及盐渍海带制备的样品(P<0.01);海带多聚糖膳食纤维加工成凝胶颗粒的过程中会造成碘含量的进一步流失。     

复合酶提取法对浒苔(Enteromorpha sp.)膳食纤维吸附能力的影响

针对丰富的浒苔资源还未得到有效利用的现状,以浒苔为原料,采用复合酶提取法制备浒苔膳食纤维。浒苔在55℃、pH=7.7的条件下,由不同比例的蛋白酶和纤维素酶(5:1、10:1、15:1、20:1和25:1)配制的复合酶进行酶解,提取膳食纤维,测定不同提取条件得到的浒苔膳食纤维在模拟体内的环境下(pH=2.0和pH=7.0)吸附葡萄糖、胆固醇和亚硝酸盐的能力。结果显示,随着复合酶中蛋白酶比例的升高,膳食纤维对葡萄糖和胆固醇的吸附能力先增强后减弱。在蛋白酶∶纤维素酶的比例为10:1时,膳食纤维对葡萄糖的最大吸附值为20.03 mg/g;在蛋白酶∶纤维素酶比例为15:1时,膳食纤维对胆固醇的最大吸附值为21.93 mg/g。而浒苔膳食纤维吸附亚硝酸的能力则随着复合酶中蛋白酶比例的升高而逐渐增强,在蛋白酶∶纤维素酶比例为25:1时,浒苔膳食纤维对亚硝酸盐达到最大吸附值29.25 µmol/g。在人工肠液中(pH=7.0),膳食纤维对胆固醇的吸附能力较强;在人工胃液中(pH=2.0),膳食纤维对亚硝酸盐的吸附能力较强;膳食纤维对葡萄糖的吸附能力在人工肠、胃液中无显著差异(P>0.05)。推测膳食纤维对亚硝酸盐的吸附主要发生在胃部,对胆固醇的吸附主要发生在肠部,而膳食纤维对葡萄糖的吸附在胃部和肠部同时进行,是一个持续的吸附过程。     

暂养期健康海带和患病海带附生菌群落结构及多样性分析

为探究暂养期健康海带(Saccharina japonica)和患病海带附生菌群落结构差异及其与海水之间的关系, 本研究采用高通量测序技术, 分析了暂养期健康海带(HS)、患病海带(DS)、健康海带养殖区海水(HW)和患病海带养殖区海水(DW) 4 个样本中微生物的 16S rRNA 序列。结果显示, 共识别出 32 个门, 77 个纲, 398 个科, 797 个属, 1772 个 OTUs。从门分类上来说, 海带样本的优势细菌门为变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes), 其中拟杆菌门、放线菌门和厚壁菌门在 HS 和 DS 样本中的相对丰度分别为 19.91%、10.79%、15.52%和 37.31%、1.65%、5.92%, 差异较大; 从科分类上来说, 黄杆菌科(Flavobacteriaceae) 和红杆菌科(Rhodobacteraceae)在 HS 样本中的相对丰度分别为 10.7%和 12.55%, 均低于 DS 样本(33.47%和 21.17%)。多样性分析显示, HS 与 DS 样本之间的 Ace 和 Chao 指数无显著性差异(P>0.05), Shannon 和 Simpson 指数具有显著性差异(P<0.05)。SIMPER 分析显示, 患病海带中 3 个细菌科的 4 个 OTUs (OTU1169、OTU1111、OTU1351 和 OTU1353) 共提供 35.88%的差异率。综上所述, 健康海带和患病海带优势附生菌的相对丰度具有较大差异, 种间分布具有显著性差异(P<0.05), 但物种丰富度无显著性差异, 属于黄杆菌科的 OTU1169 和 OTU1111 是诊断海带是否感染疾病的主要指示菌。本研究从群落结构和多样性的角度分析附生菌与暂养期海带病害的互作关系, 为今后揭示暂养期海带病害发生的机制提供科学参考。     

草鱼肠道芽孢杆菌的鉴定及产酶能力分析

从100 g左右的健康草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道中分离出3株疑似芽孢杆菌(Bacillus)菌株(G1、G2、G3),并通过对其进行生理生化特征、16S rDNA全序列和产酶能力的分析,筛选出1株高产酶能力的益生菌株。结果显示:G1、G2和G3菌株与枯草芽孢杆菌在16S rDNA序列相似性≥99%的水平上聚为同一分支,结合形态观察和生理生化特征,最终鉴定G1、G2和G3菌株均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);以水解圈直径/菌落直径比值评定了G1、G2和G3菌株的产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶的能力,其中G1菌株产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶能力(比值分别为2.9、2.2和3.3)均高于G2、G3菌株,具有作为益生菌的潜力。     

虾夷马粪海胆对饵料选择性研究

研究虾夷马粪海胆幼胆对鲜海带、盐渍海带、干海带、白菜和萝卜的饵料选择性。利用五种物料饲喂虾夷马粪海胆幼胆50天,检测海胆的成活率、生长情况。结果发现,摄食鲜海带和干海带组成活率最高,分别达到(99.83±0.29%)和(93.50±2.60%);摄食干海带和盐渍海带组的增重率最高,分别达到(120.36±3.13%)和(117.34土5.74%);摄食鲜海带和盐渍海带组的壳径扩增率最大,分别达到(4.74±0.45%)和(4.30±0.40%)。虾夷马粪海胆幼体摄食干海带时,饵料系数最低,为1.62±0.53。研究表明,鲜海带、干海带和盐渍海带都是虾夷马粪海胆的优选饵料。     

Purification and biochemical characterization of a cellulase from the digestive organs of the short-spined sea urchin Strongylocentrotus intermedius

We isolated a cellulase from the digestive organs of the short-spined sea urchin Strogylocentrotus intermedius using a combination of ion-exchange chromatography and gel filtration together with an assay for carboxymethylcellulase activity. The isolated cellulase was stained as a single band by Congo red. The molecular weight of the isolated cellulase, as determined by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis under reducing conditions, was 59?kDa. The isolated cellulase exhibited hydrolytic activity toward carboxymethyl cellulose, with an optimum temperature and pH of 30?°C and pH 8.0, respectively. The thermal stability of the enzyme was characterized by determining the temperature at which activity decreased by 50?% with treatment for 30?min at pH 7.0 and found to be 32?°C. Cellulase activity remained at a high level at 5?C20?°C, which is the growth temperature of the short-spined sea urchin. These results confirm that the short-spined sea urchin should preferably be reared at a water temperature of <20?°C.     

Impact of shellfish biodeposits and rotten seaweed on the sediments of Ailian Bay,China

We assessed the function of a Patinopecten yessoensis and Saccharina japonica integrated multi-trophic aquaculture (IMTA) model on the level of organic matter produced in the environment. The study was conducted in March–July 2012 using stable carbon and nitrogen isotope methods. Results showed that the quantity of rotten kelp increased considerably over these 5 months, with the length of the rotten blades reaching 150 cm in July. The contribution rates of biodeposits by the shellfish and kelp to the suspended particulate matter (SPM) were 3.93 ± 0.39 and 4.99 ± 1.09 %, respectively, but contribution rates to the sediments in the IMTA area were very low. In May and July, rotting kelp contributed 1.06 ± 0.46 and 1.64 ± 0.13 % in the kelp area, respectively. The organic carbon and nitrogen content of sediments from the IMTA area was significantly higher than from the kelp area (P < 0.05). C% and N% in SPM from the IMTA area were four times those from the kelp area (P < 0.05), but the C and N content in sediments were still at a low level.     

桑沟湾春季有色溶解有机物(CDOM)吸收光谱特性及空间分布特征

有色溶解有机物(CDOM)是水生态系统中碳的重要来源,其光学性质可示踪海水中溶解有机物组分的动态信息。利用紫外可见吸收光谱手段,分区域测定了桑沟湾春季水体及表层沉积物间隙水中CDOM的吸收光谱特征,探讨了CDOM的来源组成、空间分布特征、迁移转化过程及其与养殖活动的关系。结果表明,(1)波长为355_的吸收系数(a(355))范围为0.23~9.09 /m,不同水层空间分布差异显著,表层和底层均从近岸区向贝藻区逐渐降低,之后在海带区升高后向外海逐渐降低；海带区从表层向底层先降低后升高,高密度、规模化的海带养殖释放了大量的CDOM,各区域沉积物间隙水a(355)是其表中底之和的1.3~2.5倍,CDOM在沉积物间隙水中富集并逐渐累积。(2)光谱斜率(S_275-295)范围为0.013~0.036,外海区和海带区S_275-295均值显著高于其他各区,海带区和外海区CDOM中海源有机质占主要成分,而近岸区以陆源有机质为主；近岸区CDOM中的腐殖酸类物质含量从表层到底层逐渐降低,沉积物中积累的富里酸类物质含量较高,海带区和外海区呈相反趋势。(3)比紫外吸光度(SUVA₂₅₄)范围为4.60~14.10 L/(mg.m),贝类区、贝藻区和藻类区SUVA₂₅₄均呈现出从表层到底层逐渐增大的趋势,CDOM的芳香性逐渐增强并在沉积物间隙水中达到最大；海带区和外海区沉积物间隙水中的SUVA₂₅₄显著高于其他各区,表明海带区的规模化养殖活动向养殖海区及邻近海域贡献了较多的惰性溶解有机物,暗示着海带养殖活动有较强的碳汇效应并通过海流作用向外海输送。     

非淀粉多糖酶对蛋白酶体外酶解棉籽粕效果的影响研究

采用二步酶解法,先单独使用纤维素酶和果胶酶或二者合用,再用中性蛋白酶(中性蛋白酶500U/g酶解时间5h)酶解棉籽粕,以还原糖生成量、蛋白质水解度(degreeofhydrolysis,DH)和三氯乙酸氮溶指数(trichloroaceticacid-nitrogen solution index,TCA-NSI)为标识,研究NSP酶水平对还原糖生成量、DH和TCA-NSI的影响。结果为:在先用非淀粉多糖(non-starch polysaccharides,NSP)酶水解,然后用中性蛋白酶500U/g水解5h时,单独使用纤维素酶和果胶酶均可提高还原糖生成量、DH和TCA-NSI,适宜水平分别为:纤维素酶350U/g,果胶酶250U/g;同时使用纤维素酶和果胶酶,对提高还原糖生成量、DH具有协同效应,适宜水平为:纤维素酶350U/g和果胶酶250U/g。