三角帆蚌基因组DNA提取方法的比较研究

采用4种DNA提取方法(即苯酚法、改进苯酚法、CTAB法和改进ROSE法)提取三角帆蚌基因组DNA,并对4种方法提取的DNA进行分析;通过限制性酶切和SSR-PCR扩增基因组DNA,并对扩增产物进行电泳分析.结果表明,4种方法均有较好的提取效果;所提取的DNA能用于进一步的分子生物学的研究;改进苯酚法提取的DNA纯度最高,SSR-PCR扩增效果最好;苯酚法的DNA得率最高.     

长臀AFLP分析体系的建立

以珠江长臀(Cranoglanis bouderius)为试验材料,建立了长臀扩增酶切片段长度多态性(AFLP)分析体系,对其分析过程中的DNA提取、双酶切、单酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染等步骤进行了检测,并对反应条件进行了优化。用PstI/TaqI、EcoRI/MseI等2组双酶切组合构建长臀的AFLP指纹图谱,条带清晰可辨,扩增信号强,得到清晰的长臀AFLP指纹图谱。     

扩增片断长度多态性（Amplified fragment length polymorphism，AFLP）在水产动物研究中应用前景

扩增片断长度多态性（Amplified fragment lengthpolymorphism，AFLP）标记技术是一种新的DNA指纹技术主要用于检测DNA多态性。AFLP技术是根据基因组DNA水平的差异进行检测，不受组织和器官、发育阶段、生理条件等诸多因素影响，因此在水产动物中应用AFLP技术具有广阔的前景，可作为水产动物种质鉴定、亲缘关系及种质分类研究的理想标记。     

中国金鱼遗传多样性研究中AFLP反应体系的优化

探讨了AFLP(Amplified fragment length polymolphism)标记技术在中国金鱼基因组DNA提取、模板浓度、酶切时间的一些优化改进,建立了一套稳定的实验体系,在49对引物组合中筛选出6对多态标记丰富、稳定性好的引物组合,并用这些引物对中国金鱼遗传多样性进行了研究.     

长臀鮠AFLP分析体系的建立

以珠江长臀(鮠)(Cranoglanis bouderius)为试验材料,建立了长臀(鮠)扩增酶切片段长度多态性(AFLP)分析体系,对其分析过程中的DNA提取、双酶切、单酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染等步骤进行了检测,并对反应条件进行了优化.用PstⅠ/TaqⅠ、EcoRⅠ/MseⅠ等2组双酶切组合构建长臀鲍的AFLP指纹图谱,条带清晰可辨,扩增信号强,得到清晰的长臀(鮠)AFLP指纹图谱.     

西施舌基因组DNA的提取及其RAPD反应条件的优化

通过实验比较获得了一种高效、简便的西施舌基因组DNA的提取方法,以该法提取的基因组DNA为模板,对西施舌RAPD分析中的DNA模板浓度、镁离子浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶浓度进行了研究,初步确定了适于西施舌RAPD分析的最佳反应体系:25μL反应体系中,含模板DNA 25 ng,10×PCR缓冲液2.5μL,dNTPs 0.3 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,引物15 ng,Taq DNA聚合酶1.5U。     

鳙鱼不同组织基因组DNA提取方法的探讨

分别采用试剂盒和常规苯酚/氯仿抽提法提取新鲜的鳙鱼肌肉、肝脏、尾鳍以及用乙醇保存的3种组织基因组DNA,并对其进行综合分析。结果表明,对3种组织的新鲜样品2种方法均能提取高质量的DNA,而用乙醇保存的3种组织,DNA样品质量最好的是尾鳍,其次是肌肉,肝脏最差;总的来看,试剂盒法提取的DNA纯度较好,但是浓度低,而苯酚法得到的DNA浓度高,质量好,且相对成本低。综合比较,苯酚/氯仿抽提法提取乙醇保存的尾鳍组织基因组DNA是一种行之有效的方法,可以在鱼类分子研究中推广应用。     

从陈旧血液提取基因组DNA的改进方法

目的:建立一种快速、有效、陈旧血样基因组DNA的提取方法。方法:采用SDS,EDTA,Tris,蛋白酶K作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用Tris饱和酚和氯仿:异戊醇(24:1)直接提取基因组DNA。结果该方法提取陈旧血样基因组DNA的纯度高。结论:本法简便、有效,适用于批量陈旧血样的处理。     

鲫鱼基因组DNA提取方法的探讨

以鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾为材料，采用苯酚一氯仿法、试剂盒法提取鲫鱼基因组DNA，对不同方法提取的结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明不同方法提取的鲫鱼基因组DNA浓度在385．8～3167．5ng/μL，A260／280比值处于1．66～1．87，所提取的DNA适合微卫星PCR扩增。因此，用苯酚-氯仿法对鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾，用试剂盒法对鲫鱼的血液均能提取鲫鱼基因组DNA。     

鳜传染性脾肾坏死病毒的纯化和酶切分析

鳜传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）是近年来危害广东地区鳜养殖业的主要病原，本文用回接感染健康鳜获得病毒原料，分离纯化了大量高纯度的ISKNV病毒粒子，电镜下可见病毒粒子为二十面体，直径平均为150mm，抽提病毒核酸，对其基因组DNA进行酶切分析，病毒基因组为双链DNA分子，表现脊椎动物虹彩病毒基因组的特点即其胞嘧啶5′端高度甲基化，以限制性内切酶EcoRI、BamHI、HindⅢ、KpnI和PstI酶切ISKNV基因组DNA，经电泳分离后，分别得到1、8、9、18、22条清晰的酶切片段，并根据酶切片段算得基因组的大小超过108.7kbp。     

鱼类遗传多样性研究的分子学方法及应用进展

遗传多样性是生物多样性的重要组成部分,它具有广义和狭义的双重含义,广义的遗传多样性是指地球上所有生物携带的遗传信息的总和,狭义的遗传多样性是指种内不同群体或同一群体内不同个体的遗传变异的总和[1].一般所指的遗传多样性是指狭义的遗传多样性.     

一种鱼类DNA的简便提取方法

比较了鱼类ＤＮＡ提取的２种方法。ＤＮｅａｓｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ抽提法所用材料少、ＤＮＡ得率高、简便，尤其适用于小型鱼类，抽提一般鱼类的组织用量只须２５ｍｇ。     

(鱼芒)鲶属(Pangasius)鱼类遗传多样性的研究进展

本文从四个方面(表型水平、染色体水平、酶或蛋白质水平、分子或DNA水平)综述了(鱼芒)鲶的遗传多样性,并提出了一些建议.     

DNA分子标记技术概述

综述了DNA分子标记技术的类型及代表性分子标记技术的基本原理和优缺点,对常用分子标记技术进行了对比,并对其发展趋势进行了展望。     

对精子作为动物转达基因载体的探讨

精子作为基因的载体制作转基因动物,以其简单、高速和广泛适用等特点而吸引众多的研究小组在不同水平上进行研究.本文就他们的研究成果作一系统综述.     

鱼类基因组DNA提取方法的优化及PCR扩增

以海水鱼军曹鱼为材料,分别采用4种不同处理方法———经典蛋白酶K法、CTAB法、改良SDS法及优化的一步法(ROSE)等提取基因组DNA,通过紫外分光光度计测定OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示这4种方法均可以获得较高质量的基因组DNA,该基因组DNA用于目的基因的PCR扩增,均能得到PCR扩增的特异条带。改良SDS法及优化的一步法更加方便、快捷,而且成本低廉。     

氟化物遗传毒性的研究进展

对氟化物的遗传毒性进行综述,为进一步研究氟中毒提供科学依据。     

动物亲权鉴定的几种方法

本文阐述了DNA指纹、STR、线粒体DNA技术在动物亲权鉴定中的应用原理。分析了这三种方法在动物亲权鉴定中的优点及不足。     

鲉形目鱼类DNA条形码分析及鲉科DNA条形码电子芯片建立

为建立鲉形目内各物种的快速鉴别方法,本研究扩增了我国47个鲉形目物种并下载了Gen Bank上收录的鲉形目共计23科85属233种873条细胞色素C氧化酶I基因(COI)序列,分析该基因结构特性。结果表明,鲉形目DNA条形码基因的碱基变异中,不变位点508个,占总位点数的82.1%;转换位点70个,颠换位点41个,分别占总位点数的11.3%和6.6%;种内遗传距离为0~0.019,平均遗传距离为0.003?0.0034;属内种间遗传距离为0.003~0.258,平均值为0.086?0.038;基于233个物种的COI序列构建的系统进化树显示,227个物种(97.4%)能聚为独立分支,且具有较高支持度。在此基础上以鲉科11属39种鱼类的DNA条形码为例,筛选出25个种的37个特异性探针,以此探针对鲉科鱼类进行物种快速鉴定成功率为64.1%,研究结果表明DNA条形码芯片用于鲉科的鉴定具有一定的可行性。     

pH胁迫对日本对虾非特异性免疫因子及RNA/DNA比值的影响

研究了PH胁迫对日本对虾血清非特异性免疫因子及对虾肌肉RNA/DNA比值的影响.结果表明,低pH胁迫组(pH 7.2)和高pH胁迫组(PH 9.2)总一氧化氮合成酶(TNOS)活力分别在3、12 h时达到最大;而诱导型一氧化氮合成酶(INOS)活力在3 h时达到最大值,随着胁迫时间的延长,酶活力逐渐降低,至72 h趋于稳定,并表现出高PH变化免疫适应能力较差的现象.两pH胁迫组酚氧化酶(PO)活力呈现峰值变化,在12 h时达到最大值,之后逐渐降低,至72 h后趋于稳定.溶茵酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力随着pH胁迫时间的增加而降低,同样表现出高PH变化免疫适应能力较差的现象.另外,PH胁迫条件下日本对虾的肌肉RNA/DNA比值显著低于正常对照组日本对虾肌肉的RNA/DNA比值,这可能是由于pH胁迫影响了对虾体内的物质代谢所致.