海南岛长蒴母草和金腰箭上存在粉虱传双生病毒的侵染

从海南儋州的长蒴母草（Lindernia anagallis）上采集了呈现叶脉黄化、叶背叶脉突起的3个病样,从金腰箭（Synedrella nodiflora）上采集到叶片不均匀褪绿、叶背叶脉突起的3个病样.利用根据粉虱传双生病毒基因组DNA基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的简并引物,对这6个样品进行了PCR检测,结果发现所有样品均能扩增到预期大小的DNA片段.PCR产物经克隆后进行序列测定,BLAST结果表明,该序列为双生病毒基因组DNA序列,该2种杂草上均存在双生病毒的侵染.     

混合感染番木瓜PRSV/PLDMV株系基因组全长cDNA的克隆和实时荧光定量PCR分析

番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)与番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)存在混合感染的现象,近年来混合感染发病率逐年递增,是一种新的威胁番木瓜种植业的病毒病害。运用RT-PCR和RACE方法从混合感染样品中克隆获得2种病毒基因组全长c DNA,分别命名为PRSV-LM和PLDMV-LM,Gen Bank登录号分别为KT633943和KT633944,基因组序列大小分别为10 325、10 153 nt(不包括3′端的poly A)。序列分析表明:PRSV-LM与单独感染样品中的PRSV海南分离物HN(Gen Bank登录号:EF183499)的核苷酸序列和氨基酸序列相似性最高,为94%;PLDMV-LM与单独感染样品中的PLDMV海南分离物Hainan-DF(Gen Bank登录号:JX974555)核苷酸和氨基酸序列相似性最高,分别高达99%和97%。进化树分析显示,PRSV-LM和PLDMV-LM分别与单独感染样品的PRSV和PLDMV海南分离物有共同的进化起源。进一步利用实时荧光定量PCR对混合感染样品的PRSV与PLDMV病毒积累量进行分析,结果表明,混合感染样品中PLDMV病毒积累量大约是PRSV含量的100倍。研究结果为进一步探究PRSV/PLDMV混合感染发病机制奠定基础。     

利用小RNA深度测序技术鉴定海南南瓜病毒种类

2016年在海南乐东、昌江、澄迈、海口、文昌、儋州等地采集疑似被病毒病感染的南瓜叶片样品6个,将样品合并,采用小RNA深度测序技术对上述混合样本的病毒种类进行鉴定,发现样本中含有黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番木瓜环斑病毒(Papara ringspot virus,PRSV)、黄瓜绿斑驳病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)和中国南瓜曲叶病毒(Squash leaf curl China virus,SLCCNV),通过PCR方法进一步验证了深度测序结果的准确性。SLCCNV在4个样品中存在,P-CJ分离物的DNA-A和DNA-B组分全长分别为2 735 bp(登录号为MF062251)和2 722 bp(登录号为MF062252)。DNA-A和DNA-B组分均与SLCCNV分离物的同源性最高,同源性分别为89.2%~99.3%和79.1%~98.8%;P-CJ分离物与从中国植物样品中分离到的SLCCNV聚在同一进化分支上。上述研究结果表明,P-CJ是SLCCNV的一个分离物。     

番茄斑驳花叶病毒海南分离物全基因组序列分析

本研究采用小RNA深度测序及RT-PCR检测技术鉴定海南省陵水县冬种番茄(圣女果)病株受到烟草花叶病毒属的番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,ToMMV)侵染。通过机械摩擦接种,将该病原病毒保存于本生烟植株上,命名为番茄斑驳花叶病毒海南分离物(ToMMV-HN)。采用RT-PCR分段扩增获得了该病毒分离物的全基因组序列。测序结果表明,该病毒分离物基因组全长6399 nt,含有4个开放阅读框,编码4种蛋白,与已报道的ToMMV9个分离物核苷酸和编码产物氨基酸序列相似性分别为98.0%～100%和99.2%～100%;与同属的番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、番茄棕色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,TBRFV)和烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)代表分离物核苷酸序列相似性分别为84.7%、80.7%和79.0%。系统进化分析结果表明,ToMMV-HN与该病毒中国西藏和云南辣椒分离物亲缘关系最近,与美国加州和南卡州番茄分离物次之,与西班牙和巴西番茄分离物亲缘关系相对较远。本研究为我国番茄病毒病诊断和防控,尤其是抗病品种选育提供了基础资料。     

番茄LE-ACC2合酶基因5''端前导序列分离方法的研究

通过PC/Gene软件对Rottmann等人发表的番茄LE-ACC2合酶的5'端2.0Kb的前导序列作分析,设计了4对特异引物,以番茄果实、叶片的总DNA为模板,采用特异PCR扩增技术获星了2.0,1.87,1.58,1.28Kb4个特异片段,用T-Vector技术构建了1个克隆(2.0Kb)、3个亚克隆（1.87,1.58,1.28Kb）,对4个克隆产物进行了DNA序列测定,借助PC/Gene软件对所获得的各克隆序列进行综合处理与分析,获得了番茄LE-ACC25'端前导序列的同源率为99.9%,但第-979位的C和第-1076位的T分别为T和C所替代。对利用PCR技术分离大片段DNA的各环节作了较详细的研究。     

南方番茄病毒在海南省的发生分布及全基因组序列分析

病毒病是海南番茄生产中危害最严重的病害之一,在利用小RNA深度测序技术鉴定海南番茄病毒病病原时发现,南方番茄病毒（Southern tomato virus, STV）在海南省多个市（县）的样品中存在,而且发现1株STV单独侵染的样品。为了解STV在海南省的发生分布情况,利用RT-PCR技术,对2015—2021年采自海南省的987份疑似病毒侵染的番茄叶片样品进行检测,结果表明：在9个市（县）的142份样品中检测到STV,早在2015年STV就已经在海南番茄上存在,检出率从2015年（8.82%）到2021年（22.45%）呈逐年上升趋势。同时结合RACE和RT-PCR技术扩增到4个STV海南分离物的全长基因组,长度均为3446 nt,包含2个部分重叠的ORFs,ORF1(147～1280 nt)和ORF2(1048～3336 nt)分别编码p42蛋白（377 aa）和RdRp蛋白（762 aa）,5′UTR和3′UTR的长度分别为146 nt和110 nt。序列一致性分析表明,4个STV海南分离物间基因组序列一致性为99.86%～100.00%,与目前GenBank公布的所有STV分...     

我国斯里兰卡木薯花叶病毒的分子特征及致病性分析

为进一步探究我国斯里兰卡木薯花叶病毒（Sri Lankan cassava mosaic virus, SLCMV）的分子特征及致病性。以感染SLCMV的木薯叶片基因组DNA为模板,PCR扩增获得DNA-A和DNA-B基因组全长,通过生物信息软件分析比较其核酸及氨基酸序列特征;构建了强、弱致病力分离物（SLCMV-Colombo和SLCMV-DG1922）的侵染性克隆,分别将2种致病力分离物的DNA-A和DNA-B组分进行重组,接种烟草（Nicotianatabacum）,比较2种分离物的致病性差异。结果显示：我国SLCMV为“旧世界”双组份菜豆花叶病毒,编码包括AV2基因在内的8个开放阅读框（ORFs）;具有双生病毒典型的共同序列（CR）、重复序列、TATABox和TAATATT↓AC茎环结构,Rep蛋白羧基末端有7个氨基酸缺失;我国SLCMV的基因组、编码和非编码区与柬埔寨、泰国和越南分离物的相似性在97.0%～100.0%之间,与印度和斯里兰卡早期的分离物相似性为86.5%～98.6%,DNA-B组份与印度木薯花叶病毒株系（ICMV）编码区序列相似性为95.0%～97.6%,与其...     

河北省藁城花生病毒病的RT-PCR检测及外壳蛋白基因序列分析

采用RT-PCR技术对采自河北省农林科学研究院粮油作物研究所藁城堤上试验基地的12份花生叶片样品进行花生病毒病的检测,结果表明:从表现花叶和矮化症状的10份样品中检测到花生条纹病毒(peanut stripe virus,PStV),检出率高达90%,未检测到花生矮化病毒和黄瓜花叶病毒;对其中2个PStV分离物cp基因序列分析的结果表明,该cp全长864 bp。这两个分离物与已报道的PStV其他株系的cp核苷酸序列相似性分别为94.4%~99.2%和94.7%~99.7%,氨基酸相似性分别为95.5%~99.7%和95.8%~100.0%。PStV cp核苷酸序列构建的系统进化树中,这两个分离物与中国大陆其它分离物及美国分离物亲缘关系较近,而与中国台湾、泰国和越南分离物亲缘关系较远。     

侵染湖南甘薯种质资源的曲叶病毒和杆状病毒的检测及其亲缘关系分析

采用PCR技术对2015—2016年从湖南省多个市县采集的180份甘薯种质资源进行两种DNA病毒（sweet potato leaf curl virus,SPLCV和sweet potato badnavirus,SPBV）检测,并以PCR扩增产物序列为基础,对这两种病毒的亲缘关系进行分析。结果表明：（1）180份甘薯种质资源中,22份检测出SPLCV,占总数的12.2%;32份检测出SPBV,占总数的17.8%;8份同时检出SPLCV和SPBV这两种病毒,占总数的3.9%。（2）检出SPLCV的市县有长沙、永州、怀化、邵阳、郴州、常德、娄底、益阳、岳阳和株洲;检出SPBV的市县有长沙、永州、怀化、衡阳和邵阳;检出两病毒复合侵染的市县有怀化、长沙、永州和邵阳。（3）基于病毒全基因组序列分析显示,全球已报道的36个SPLCV分离物可分为3组,本研究获得的12个湖南分离物可分别归于3个组中,其中6个归于组Ⅰ,1个归于组Ⅱ,5个归于组Ⅲ,表明湖南SPLCV具有高度多样性。（4）基于病毒运动蛋白和外壳蛋白编码基因部分序列分析显示,全球已报道的36个SPBV分离物可分为4组,绝大部分分离物属于组Ⅰ,我国1个安徽分离物单独成组（组Ⅱ）,我国2个山东分离物和1个海南分离物构成1个组（组Ⅲ）,本研究获得的2个湖南分离物其中1个归于组Ⅰ,而另1个与已报道各分离物的核苷酸序列均存在显著差异,相似性仅为74.92%,单独成组（组Ⅳ）,表明我国SPBV具有高度的变异性,存在多个变异类型。本研究结果可为湖南地区这两种病毒病防控提供依据。     

Reduced incidence of tomato yellow leaf curl virus and leafminer in a tomato cultivar in northern Thailand

Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV), a whitefly-vectored begomovirus, is a major limiting factor for tomato production worldwide, including Thailand. Field evaluation of commercial tomato cvs. for resistance to the virus endemic in northern Thailand has not been reported. Experiments conducted in northern Thailand in 2011–2013 compared the field performance of three tomato cvs. from the US with a commonly grown Thai cultivar. There were few significant differences observed among the cvs. in marketable yield, and the severity of root-knot and root rot. However there were significant differences noted in TYLCV incidence; virus incidence ranged from 38 to 100% and 8–41% in experiments one and two, respectively. In both experiments ‘Husky Cherry Red’ from the US had the lowest TYLCV incidence, leafminer damage (Liriomyza sp.), and progression of foliar necrosis primarily caused by thrips feeding and possibly exacerbated by air pollution. TYLCV infection was confirmed by a simplified method of nuclear inclusion visualization with light microscopy in experiment one, and by virus inclusion detection and PCR in experiment two.     

Relative prevalence of mild and severe strains of potato spindle tuber virus in eastern Canada

In 1969, 355 leaf or tuber samples from potatoes suspected of harboring the potato spindle tuber virus were collected from 23 tablestock fields in eastern Canada. By means of Fernow's tomato cross protection test, modified by the use of ribonucleic acid extract as inoculum, 317 samples were shown to be infected, 290 (92%) of these with a mild strain, and 27 (8%) with a severe strain of the virus. Preliminary tests in the greenhouse and field indicate that the mild strain, so named because of symptoms on tomato, is relatively mild in the potato as well.     

苎麻品种对镉污染土壤适应性的研究

本文通过种植在湖南省安化县烟溪镇的12份苎麻品种镉污染土壤适应性的研究，结果分析表明：不同根型的苎麻品种间及同根型的品种间镉含量及镉累积量的分布趋势都表现为根〉茎〉叶；苎麻各部分镉含量及镉累积量方差分析结果为相同根型的品种间根际土的镉含量差异极显著P=0．003，不同根型的苎麻品种间叶的镉累积量差异显著P=0．025，苎麻其余各部分都不存在显著的差异；并且镉毒对于苎麻的农艺性状和经济性状的影响较小。     

Evaluation of common bean lines for their reaction to tomato yellow leaf curl virus-Ir2

Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) can cause an economically relevant disease in the major tomato growing regions, and no resistance has been identified in commercial and wild tomato cultivars in Iran. In the present study, 34 common bean lines were screened for their reaction to TYLCV-Ir2 under greenhouse conditions. The experiment was conducted in a randomized complete block design with three replications. Bean plants were inoculated at the first trifoliate stage with viruliferous whiteflies (Bemisia tabaci biotype B) and were then sprayed with an insecticide and maintained in whitefly-proof greenhouse. The inoculated plants were monitored for the development of symptoms and the presence of viral DNA by polymerase chain reaction (PCR) four weeks after inoculation. Results revealed that out of the 34 lines, five were resistant. These lines exhibited either no symptoms or very mild symptoms and no viral DNA was detected in them by PCR. Two lines, which showed no typical disease symptoms but contained viral DNA, were identified as tolerant to TYLCV-Ir2. The vector feeding preference for common bean lines was assessed. Results indicated a significant difference in adult whitefly numbers among bean lines but there was no relationship between the number of whiteflies and disease symptom severity. The resistance to TYLCY-Ir2 expressed in common bean lines may be useful as source of resistance for the development of resistant commercial common bean cultivars.     

宜春苎麻试验站2013年苎麻高产高效种植示范与多用途效益分析

苎麻高产高效种植是以多用途为核心的技术创新,有别于传统的苎麻以收获韧皮纤维为主的种植模式.通过高产高效配套栽培技术实施,提高单位面积苎麻纤维产量、苎麻嫩茎叶产量和麻骨产量,开发苎麻嫩茎梢叶青贮喂肉牛、麻骨麻屑栽培食用菌的用途,大幅度提高苎麻生产的经济效益.     

基于CRISPR基因编辑系统抗番木瓜曲叶病毒的植物转化载体的构建

双生科病毒具有毁灭性强、寄主多样、分布地域广等特点,一直是困扰世界农作物生产的一大难题。用物理和化学方法防治该类病毒不仅花费成本高,见效低,而且还可能对环境造成负面影响,因此用分子手段培育抗病品种才是有效途径之一。本研究结合最新的CRISPR/Cas9基因编辑技术和Golden Gate克隆技术,设计并构建了抗番木瓜曲叶病毒基因编辑串联多切点表达载体。表达载体转入农杆菌AGL1后经注射本氏烟草叶片进行瞬时表达,48 h后通过激光共聚焦显微镜能观察到有绿色荧光的出现,定位的位置为细胞核与细胞质膜。本研究为番木瓜抗曲叶病毒研究提供理论基础。