铜在水稻愈伤组织培养中的作用的进一步研究

 以籼稻栽培品种秋桂矮11的愈伤组织为材料,对铜元素的作用作了进一步的研究。在含有2,4-D和脯氨酸的培养基中添加铜元素对愈伤组织的增殖量影响极小,但转移到再分化培养基后这些愈伤组织能再生出显著更多的植株。另一方面,在含有BA、NAA和脯氨酸的培养基中添加铜元素则会由于添加量的不同而产生显著的促进或抑制愈伤组织增殖的作用。然而,不论是增殖受过铜的促进的或者是抑制的愈伤组织,均能在再分化培养基上再生出数量更多和质量更好的植株。     

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以籼稻栽培品种秋桂矮11的愈伤组织为材料,对铜元素的作用作了进一步的研究。在含有2,4-D和脯氨酸的培养基中添加铜元素对愈伤组织的增殖量影响极小,但转移到再分化培养基后这些愈伤组织能再生出显著更多的植株。另一方面,在含有BA、NAA和脯氨酸的培养基中添加铜元素则会由于添加量的不同而产生显著的促进或抑制愈伤组织增殖的作用。然而,不论是增殖受过铜的促进的或者是抑制的愈伤组织,均能在再分化培养基上再生出数量更多和质量更好的植株。     

提高水稻愈伤组织植株再生能力几种方法的评价

选用提高水稻愈伤组织植株再生能力的几种方法,对3个光温敏核不育水稻品系的愈伤组织进行培养比较.结果表明:愈伤组织在继代培养过程中再生能力的衰退难以避免,但不同品种间的衰退速度存在差异;选用的几种方法中,除了添加亚精氨的处理没有效果外,其它处理均能提高水稻愈伤组织的再生能力,而两步分化培养法的效果远远优于其它方法,可优先考虑应用于诱导经过长期继代创造体细胞无性系变异的愈伤组织的植株再生.     

亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果,目的是提高愈伤组织的诱导和植株再生的效率.花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素).培养基中含有2mg/L2.4-D和1mg/LBAP比相同成分培养基中含有1mg/LNAA和2mg/L6-BA(CK),愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高.在五个处理的盐酸硫胺素的实验中,改良的MS培养基含有10mg/L盐酸硫胺素比含有2.4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高.在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6%或9%的麦芽糖,总的植株再生频率最高.蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率,总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率.本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中.     

亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果，目的是提高愈伤组织的诱导：和植株再生的效率。花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素)。培养基中含有2mg／L2．4-D和1mg／LBAP比相同成分培养基中含有1mg／LNAA和2mg/L6-BA(CK)，愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高。在五个处理的盐酸硫胺素的实验中，改良的MS培养基含有10mg／L盐酸硫胺素比含有2．4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高。在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6％或9％的麦芽糖，总的植株再生频率最高。蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率，总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率。本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中。     

从种子愈伤组织培养选育耐盐水稻突变体 1.愈伤组织诱导、植株再生及表观的植株性状变异

采用种子愈伤组织培养研究15个籼稻和硬稻品种的愈伤组织诱导及植株再生。还测定了选择性培养基不同氯化钠浓度对愈伤组织生长及植株再生的影响。不同品种愈伤组织诱导及植株再生的能力差异显著。在不加酵母及酪旦白提取物的培养基中,愈伤组织诱导频率从32％至85％。但当加入上述物质时,使诱导频率提高至将近100％。植株再生频率从IR8、IR26、IR30、IR36以及“Koshihikari”的0％至“台中65”的62％。植株再生频率随着愈伤组织培养时间的延长而下降。不过,“台中65”及“Nona Bokra”培养27周的愈伤组织还保持30％-40％的再生能力。“台中65“的愈伤组织即使生长了47周还能再生成植株。选择性培养基加进氯化钠对愈伤组织生长及随后的植株再生有显著影响。在氯化钠浓度为2％时,只有少数愈伤组织略有生长:氯化钠浓度低于1％时,愈伤组织生长良好。1.5％的氯化钠浓度抑制愈伤组织生长,但在第一筛选阶段仍然保持中等的生长速度。所有供试的品种,用培养11周的愈伤组织在氯化钠浓度较高的情况下植株再生频率仍较高。     

提高农杆菌转化水稻频率几个因素的研究

以6个重要的籼稻和粳稻品种为材料,研究了影响农杆菌转化水稻频率的几个重要因素。结果表明,对于籼稻品种而言,CC培养基是愈伤组织的最适诱导培养基;添加1.0~2.0 mg/L ABA能有效地改善愈伤组织的质量;在继代培养基中添加山梨醇能改善愈伤组织的生长状态,降低愈伤组织的褐化。而对于粳稻品种来说,适宜的诱导培养基是NB培养基,添加ABA对愈伤组织的改善效果不明显,对于多次继代的愈伤可以适当增加蔗糖浓度以提高抗性愈伤率。此外,在筛选时期适当加大筛选压力,分化时去掉筛选压力,壮苗时加适当的选择压力,可提高转化率。在分化时,采用适宜的激素配比有利于提高分化率。应用所优化的农杆菌转化系统,获得了一些有价值的转化植株。     

基因枪法转化籼稻有关因素的评价

 利用基因枪轰击水稻未成熟胚及未成熟胚诱导来源的愈伤组织,对国内外16个籼稻品种进行了转化。设置不同的基因枪转化参数,并在培养基中添加各种植物激素、甘露醇以及2-N-吗啉-乙基磺酸(简称MES)来改善继代过程中籼稻愈伤组织的生长状态。基因枪转化的操作参数（包括金粉浓度和DNA含量、基因枪氦气压力、轰击受体的不同状态）对转化频率有重要影响;在继代培养基中添加MES（500 mg/L）作为缓冲剂,可以减少籼稻愈伤组织褐化现象的发生;在诱导和继代培养基中补加NAA(0.5 mg/L）,KT(0.2 mg/L)可改进愈伤组织质量,进而提高再生频率;在继代培养基中补加低浓度的 ABA(1 mg/L)和甘露醇（20 g/L）,能普遍改善愈伤组织生长状况,减少褐化现象的产生,得到较多结构致密的颗粒状抗性愈伤。获得了再生的转化植株,经检测表现出对Basta的抗性。     

苯乙酸促进水稻花药愈伤组织的再分化和直接成苗

 研究了苯乙酸（phenylacetic acid，PAA）应用于水稻花药培养的效果。以 2,4-D 为对照，发现PAA不影响愈伤组织诱导率，但显著提高了愈伤组织分化率（p<0. 05），从而显著提高了植株再生率（p<0. 05）。其促进效果与品种、培养基无机盐成分有关，对籼稻品种效果较好。PAA还能有效地促进花药愈伤组织不经转移到分化培养基上而直接在诱导培养基上分化成苗。直接再生的绿苗大多具有旺盛的不定根，可直接移栽到土壤中去。当PAA浓度为10 mg/L 时，特青、02428和亚优2号的直接植株再生率分别达0. 56%, 1. 64%和2. 69%。提高PAA浓度可进一步提高直接植株再生率。利用基于PAA的一步成苗培养法已构建成了3个水稻杂种花培后代加倍单倍体（DH）群体。     

大豆耐盐离体筛选分化再生植株的初步研究

大豆(Glycine max)小真叶外植体直接接种到含不同浓度NaCl的选择培养基中,愈伤组织诱导率随NaCl浓度增高而降低,获得再生植株的最高NaCl浓度为0.25％。用连续逐级转移愈伤组织不断加强选择压的方法,可使筛选耐盐再生植株的最高NaCl浓度提高到0.3％。     

提高水稻成熟种胚体细胞培养力

实验结果认为,水稻成熟胚是一种“竞争性”外植体。高浓度的脱落酸（ABA）能有效地抑制胚芽和胚根的生长,而对水稻盾片愈伤组织的生长影响较小,从而促进盾片愈伤组织的同步健壮生长。这些愈伤组织致密,呈乳白色且分化频率高。调节分化培养基的浓度可减少愈伤组织变褐老化,有效地提高愈伤组织绿苗分化率。在诱导培养期间,较高的2,4－D浓度（大于1 mg/L）和6－BA会抑制种胚体细胞愈伤组织的诱导,其中籼稻比粳稻敏感。在诱导培养基中附加2,4－D 0.5 mg/L,BA 0.5 mg/L,ABA 5 mg/L,B_1 (5－10 mg/L)对成熟籼稻种胚培养是较合适的。     

内源激素对水稻成熟胚培养力的影响

 采用水稻的成熟胚为外植体,研究了内源激素对培养力的影响,并进一步探讨了外源激素对内源激素作用的影响。结果表明,愈伤组织诱导率和植株再生与水稻的成熟胚及其愈伤组织的内源激素含量有关。通过调节培养基的外源激素改变内源激素的平衡是提高培养效率的有效手段。     

小麦不同外植体的组织培养效果研究

良好的组织培养效果是提高植物基因转化效率的基础。以山东省近年来育成并大面积推广的10个优良品种（系）为材料，对这些品种的花药、幼穗、幼胚和成熟胚的组织培养效果进行研究，旨在筛选每一基因型最适合于组织培养的外植体类型，为应用基因工程技术进行小麦遗传改良提供基础材料。结果表明，禽伤诱导率和再生成苗率与基因型和外植体类型（花药、幼穗、幼胚和成熟胚）密切相关。8802在花药和成熟胚培养中表现突出，花药出愈率达119．5％，愈伤分化成苗率19．9％;烟农19的幼穗愈伤直接分化成苗率最高，这43．5％；8802、烟农19和潍麦8号三个基因型的幼胚培养效果差异不显著，其愈伤分化成苗率分别为26．3％、24．5％和24．8％。蔗糖浓度在3％～9％之间，对成熟胚的愈伤组织诱导率影响很小。高浓度蔗糖降低愈伤生长速度。在一定蔗糖浓度下，愈伤诱导率与2，4-D浓度密切相关，高浓度的2，4-D对愈伤组织再生不利。MS＋4mg／L2，4-D对于成熟胚的脱分化相对较好，MS和MS＋0．4mg／L NAA＋0．6mg／L KT作为成熟胚的愈伤组织再生培养基，对不同基因型具有一定的适用性。     

短光低温不育水稻宜D S成熟胚培养的研究

对短光低温不育水稻宜D S成熟胚在组织培养中的愈伤组织诱导和分化进行了研究,结果表明:愈伤组织诱导率与绿苗分化率之间无对应关系;诱导培养基的成分对转分化后的愈伤组织有后效作用,2,4-D与6-BA和NAA搭配使用比单独使用2,4-D诱导的愈伤组织更易于分化;同时还发现,不同诱导培养基诱导的愈伤组织在转分化后对分化培养基的要求不同.     

The effect of genotype and culture medium on somatic embryogenesis and plant regeneration from mature embryos of fourteen apomictic cultivars of buffel grass (Cenchrus ciliaris L.)

Buffel grass (Cenchrus ciliaris L.) is an important apomictic grass used as forage for ruminant livestock. Biotechnological methods provide opportunities for producing new germplasm. Mature embryos of fourteen buffel grass apomictic cultivars (2n = 4x = 36) were used to induce embryogenic callus formation using a basal medium supplemented with 3% sucrose and with the testing of five concentrations of 2,4‐dichlorophenoxyacetic acid (2,4‐D) and four concentrations of 6‐benzylaminopurine (BAP). The effects of cultivar and culture medium on callus induction and plant regeneration were evaluated. Significant differences were observed among the fourteen cultivars and the five concentrations of 2,4‐D (P < 0·01). Values for embryogenic callus production varied from 0 to 86·7. Most cultivars showed the highest level of embryogenic callus production on the medium with the concentration of 3 mg L^?1 2,4‐D. The addition of different BAP concentrations in combination with 2,4‐D in the medium inhibited embryogenic callus growth and did not permit plant regeneration. The data clearly demonstrated that the genotype and concentrations of 2,4‐D had significant effects both on the frequency of embryonic callus formation from mature embryos and on the subsequent efficiency of plant regeneration of apomictic cultivars of buffel grass. Cultivars Biloela and Nunbank showed the greatest efficiency in in vitro culture response.     

麦芽糖提高水稻花药培养效率的研究

 研究了浓度均为150 mmol/L的9种碳源(含组合)对3个籼稻品种花药的愈伤组织诱导率的影响，发现麦芽糖为碳源的培养基效果最佳。进一步以7个籼稻2个粳稻和4个杂交组合为材料，系统比较了150 mmol/L的麦芽糖与蔗糖作为诱导培养基的碳源对花药培养的影响，结果表明，以麦芽糖为碳源的培养基上，平均愈伤组织诱导率和随后的绿苗分化率分别为54.81%与9.70%，而在相应的蔗糖培养基上只有11.85%和3.30%，差异极显著。讨论了提高籼稻花培效率的簧略，井建议采用统一的方法计算愈伤组织诱导率．     

几个籼稻品种的成熟胚愈伤组织植株再生体系的建立

组织培养技术在作物改良上的成功应用需要合适的植株再生体系。本试验以7个籼稻成熟胚为材料，通过优化激素配比，建立适合于水稻遗传转化的高频植株再生体系。研究结果表明，NB 2mg／L2，4-D适合于供试品种的成熟胚愈伤组织的诱导，诱导率达90％以上；在分化培养基中添加3．0-3．5mg／L KT，0．5～1．0mg／L NAA和5．0mg／L ABA的激素配比，明恢81、N175、航1号的最高分化率分别达72．7％、80．0％和78．0％；移栽成活95％以上。     

水稻成熟胚组织培养研究

对珍汕 97B、明恢 6 3、H14 93、中花 11等 4个水稻品种的成熟胚在组织培养中愈伤组织诱导率和植株再生率的研究表明 ,在N6培养基中附加体积分数为 2× 10 -3 的 2 ,4 -D时诱导率最高。在相同的诱导培养基和分化培养基上 ,4个水稻品种的愈伤组织诱导率和植株再生率表现出极大的差异。粳稻H14 93表现最好 ,其诱导率和再生率分别达到 90 .6 %和 90 .0 % ;中花 11次之 ,分别为 85 .2 %和 6 6 .7% ;2个籼稻品种的愈伤组织诱导率较低 ,植株再生率几乎为 0。说明本试验中的诱导条件适合于粳稻品种 ,而对籼稻品种不利     

玉米愈伤组织的遗传转化和对草丁膦抗性及植株再生的研究

以玉米自交系7922、P2和H99的胚性愈伤组织为材料,通过愈伤组织对草丁膦的敏感性实验,确定愈伤组织适宜选择压,并探讨了不同激素对愈伤组织分化的影响,用带有质粒PGBIloxAp.Bt.35sp.bar的根癌农杆菌LBA4404转化玉米愈伤组织,PCR检测证明,目的基因已整合到玉米基因组中。