马铃薯真菌病害拮抗菌株鉴定及初步应用

针对马铃薯真菌病害发生严重、多种病害混合发生、缺乏安全有效防治方法的问题，对前期筛选出的高效拮抗 菌株BA-26 进行分类鉴定，研究其胞外代谢产物的稳定性，明确防病促生作用。通过形态特征、生理生化特性鉴定以及 16S rDNA 序列分析，BA-26 菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），该菌株对8 种马铃薯病原真菌均表现出 较强的拮抗作用，对茄链格孢菌（Alternaria solani）、茄病镰刀菌（Fusarium solani）、燕麦镰刀菌（Fusarium avenaceum） 的抑菌率大于80%；胞外代谢产物经100 ℃处理30 min、紫外照射8 h、pH 2～10 酸碱处理、蛋白酶处理1 h 后，相对抑菌 率均维持在80% 以上；室内抑菌活性测定结果表明BA-26 滤液对茄病镰刀菌的抑制率为91.3%；盆栽试验中，每盆施用 20 mL 浓度为4.0×10⁹ cfu · mL^-1 的BA-26 发酵液使马铃薯根长、须根数、株高、叶片中叶绿素含量分别显著增加32.07%、 111.94%、48.0%、19.6%。表明解淀粉芽孢杆菌BA-26 对马铃薯真菌病害抑菌谱宽，胞外代谢产物稳定性强，有较强的防病 促生作用，具有开发为马铃薯专用生防菌剂的潜力。     

红灯樱桃采后主要病原真菌的鉴定及Bacillus velezensis G-1天然产物的广谱抑菌效果

【目的】明确Bacillus velezensis G-1天然产物在樱桃采后抗真菌病害中的抑菌效果,为樱桃采后病害广谱生物防治药剂研发提供新型开发源。【方法】首先,以红灯樱桃采后病果为材料,通过组织块分离、纯化、形态特征、ITS序列鉴定、特异基因和科赫法则确定樱桃采后病原真菌种类;其次,以获得的病原菌为靶标,通过生长速率法和平板对扣法研究了B. velezensis G-1脂肽和2, 4-二叔丁基苯酚的广谱抑菌效果。【结果】米根霉YT-1(Rhizopus oryzae)、镰刀菌YT-2(Fusarium dlaminii)、藤仓镰刀菌YT-4(Fusarium fujikuroi)、链格孢属YT-5与YT-7(Alternaria sp.)、天竺葵葡萄孢YT-6(Botrytis pelargonii)、冻土毛霉YT-8(Mucor hiemalis f. hiemalis)和皮壳青霉YT-9(Penicillium crustosum)为红灯樱桃采后主要病原真菌;8株病原真菌中以菌株YT-1、YT-6和YT-8致病性较强;B. velezensis G-1脂肽物质(500μg·mL-1)除对M. hiemalis f. hiemalis和P. crustosum的抑菌率低于60%外,对其余各病原真菌抑菌率均高于70%;100μL挥发性物质2, 4-二叔丁基苯酚(10μg·μL-1)除对P. crustosum的抑菌率为0.41%外,对其余各病原真菌的抑菌率均高于90%。【结论】首次在红灯樱桃中发现了镰刀菌(F. dlaminii)和藤仓镰刀菌(F. fujikuroi),说明近年来红灯樱桃采后病害发生了变化,新增了镰刀菌属病原真菌;发现B. velezensis G-1脂肽物质和挥发性物质2, 4-二叔丁基苯酚可用于防治樱桃上述采后病害。     

马铃薯早疫病拮抗菌的筛选及其代谢产物的抑菌活性

以马铃薯早疫病病原菌茄链格孢菌(Alternaria solani)为指示菌,通过平板对峙法,筛选出菌株及其发酵滤液对马铃薯早疫病病原菌均具有较强拮抗作用的生防菌株BAF-6;通过形态特征、生理生化特性鉴定以及16S r DNA序列分析,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株发酵滤液经60~80℃热处理,抑菌活性均在95%以上;紫外线照射8 h或在p H值为2~10的酸碱环境下,发酵滤液的抑菌活性稳定;经蛋白酶处理后抑菌活性仍达50%以上。     

甘肃加工型番茄叶果真菌病原鉴定及主要病害

经田间采集、分离培养、致病性测定,鉴定出13种加工型番茄真菌病原及病害。其中早疫病(Alternaria solani)、灰霉病(Botrytis cinerea)、叶霉病(Fulvia fulva)、斑枯病(Septoria lycopersici)、白霉病(Ramularia lycopersici)为甘肃省加工型番茄主要流行性病害,是制约甘肃省加工型番茄发展的主要病害。内丝白粉病(Leveillula brassicae)、柱隔孢菌(Ramularia lycopersici)侵染加工型番茄在国内外未见报道,属新病害。黑斑病(Alternaria brassicae)、果腐病(Fusarium moniliforme)、枯萎病(Fusarium oxysporium)、斑枯病(Septoria lycopersici)、煤污病(Cercospora fuligena)侵染加工型番茄在甘肃省属首次报道。     

8种常见芽菜致病微生物的分离鉴定

对目前产业化程度较高的黄豆、黑豆、豇豆、萝卜、蕹菜、花生、黄秋葵、向日葵等8种芽菜患病植株上的致病微生物进行分离、纯化,共得到24株细菌菌株和8株真菌菌株;利用真菌ITS和细菌16Sr DNA通用引物,分别对分离得到的细菌和真菌基因组进行分子生物学鉴定。结果表明:24株细菌分属8个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、肠杆菌属(Enterobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、果胶杆菌属(Pectobacterium)、短稳杆菌属(Empedobacter)、戴尔福特菌属(Delftia)、从毛单孢菌属(Comamonas);24株细菌均为革兰氏阴性菌,除果胶杆菌属外,其余都不是典型的植物病原菌;其中不动杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和假单胞菌属的细菌出现在2种或2种以上芽菜上;另外4个属的细菌则只出现在1种芽菜上,呈现出寄主的专化性。8株真菌分属3个属,分别为镰刀菌属(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)和根霉属(Rhizopus);其中根霉属和链格孢属的真菌分别只出现在萝卜芽菜和蕹菜芽菜上,其他6种芽菜上分离得到的真菌菌株均属于镰刀菌属。分离菌株回接试验结果表明,所有菌株均能对芽菜造成不同程度的腐烂症状,生产过程中环境微生物污染同样能致芽菜腐烂病发生。     

28种药用植物提取液对6种植物病原真菌抑菌活性的测定

以瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）、辣椒疫霉（Phytophthora capsici）、尖镰孢菌（Fusarium oxysporium）、茄镰孢菌（Fusarium solani）、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）等6种植物病原真菌为供试菌株,采用菌丝生长法对28种药用植物提取液的抑菌活性进行了测定。结果表明：丁香（Eugenia caryophyllata）对6种植物病原真菌的抑制率均达100%,乌梅（Armeniaca mume）、百部（Stemona sessilifolia）和木香（Aucklandia lappa）对5种植物病原真菌的抑制率均在70%以上。采用孢子萌发法对抑菌效果较好的5种药用植物进行进一步研究,结果表明：这5种药用植物对灰葡萄孢孢子萌发抑制率均在90%以上。     

新型杀菌剂一氟咯菌腈(适乐时)

本品可用于种子处理,防治镰孢属,丝核菌属、长蠕孢属和壳针孢属真菌引起的病害。也可叶面防治葡萄、蔬菜等葡葱孢属、核盘菌属、丝核菌属、丛梗孢属和链格胞属真菌引起的病害。制剂有适乐时10%拌种剂。防治豇豆立枯病:每100千克种子用适乐时10%拌种剂10～20克(有效成分)拌种。新型杀菌剂——氟咯菌腈(适乐时)@赵立新     

免套袋栽培苹果采后真菌病害鉴定及精油抑菌研究

【目的】苹果免套袋栽培是我国苹果产业发展的必然趋势,而在此模式下,苹果的病虫害发生较为严重。探究免套袋苹果采后真菌的发病情况以及精油对其抑菌效果,为免套袋苹果病虫害的绿色防控奠定基础。【方法】分别调查山东苹果主产区的免套袋、套袋2种栽培模式下苹果的采后发病情况;采用传统形态鉴定结合ITS序列比对对免套袋苹果致病真菌进行了分类统计及种属鉴定;熏蒸处理评价了肉桂精油对致病菌的离体抑菌效果,并通过电子显微镜分析了其抑菌机制。【结果】免套袋苹果的采后发病率显著高于套袋苹果(p 0.05),免套袋苹果果实上共分离鉴定出6种病原真菌,分别为葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、链格孢属(Alternaria)、粉红单端孢菌(Trichothecium roseum)、韦司梅拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis vismiae)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)及产核枝顶孢菌(Acremonium sclerotigenum)。80μL·L~(-1)的肉桂精油对以上6种真菌的抑菌率均超过80%。精油对苹果的活体防治试验表明,80μL·L~(-1)肉桂精油可显著降低苹果果实的发病率(p 0.05)。经显微镜分析可知,精油抑制了孢子萌发,改变了病原菌的正常菌丝形态。【结论】肉桂精油作为免袋栽培苹果采后防腐抑菌剂有较好的应用前景。     

蓝莓果实潜伏侵染病原真菌的分离与鉴定

以辽宁省蓝莓鲜果为试材,采用组织分离法分离潜伏侵染果实的病原真菌,通过形态学和分子生物学方法,对病原菌进行分类鉴定,研究了真菌的潜伏侵染状况,为指导蓝莓果实病害防治提供参考依据。结果表明:辽宁省蓝莓果实普遍存在真菌潜伏侵染现象,不同品种带菌率存在差异,‘M7’带菌率较高,"布里吉塔""爱国者""奥尼尔"和"南好"带菌率较低。从8个蓝莓品种中共分离鉴定出9种潜伏病原真菌,分别为互隔交链孢霉(Alternaria alternata)、细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)、芽枝霉属(Cladosporiumsp.)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、黑曲霉(Aspergillus niger)、嗜松青霉(Penicillium pinophilum)、茎点霉属(Phomasp.)、毛壳属(Chatetomiumsp.)和镰刀菌属(Fusariumsp.)。其中,互隔交链孢霉(Alternaria alternata)可在多个品种中分离,为蓝莓果实主要潜伏侵染病原真菌。另外,从蓝莓果实中分离到一株葡萄有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum),该酵母对互隔交链孢霉具有良好的抑制作用。     

灰葡萄孢菌胞外大分子分泌物的植物毒性及漆酶性质鉴定

采用透析的方法提取灰葡萄孢菌分泌的大于14 kD的胞外大分子物质,将其接种到番茄和菊花叶片组织,检测灰葡萄孢菌胞外大分子分泌物的植物毒性,并以鞣酸和RB亮蓝为指示剂鉴定灰葡萄孢菌胞外大分子分泌物的漆酶性质。结果显示:灰葡萄孢菌胞外大分子分泌物可导致叶片组织坏死,具有植物毒性;接种灰葡萄孢菌后第3天,鞣酸和RB亮蓝平板出现不同程度的显色反应,第6天时平板几乎完全显色,胞外大分子物质具有漆酶性质。     

生物炭添加对马铃薯根际土壤真菌多样性和产量的影响

以马铃薯品种克新1 号为试材，在土壤中分别添加10、20、40 t·hm^-2 玉米秸秆生物炭，利用ITS 高通量测序技术， 研究不同生物炭添加量对马铃薯根际土壤真菌多样性和产量的影响。结果表明：各生物炭处理均降低了土壤真菌丰度，其中 以T3 处理（添加生物炭20 t·hm^-2）丰度最低。马铃薯根际土壤真菌主要包括5 个门、25 个纲、62 个目、120 个科、201 个 属和345 个种，在门分类水平上优势真菌群落为子囊菌门，相对丰度为86.86%～95.86%。添加生物炭处理有利于提高子囊 菌门的丰度，降低担子菌门和接合菌门的丰度；在科分类水平上，添加生物炭处理提高了粪壳菌目Incertae sedis 23、小子囊 菌科、毛壳菌科、丛赤壳科的丰度，降低了子囊菌科、粪壳菌科、粪壳菌目Incertae sedis 的丰度。添加生物炭处理提高了马 铃薯单株产量、单株结薯数和商品薯率，其中T3 处理效果最显著。综合产量指标和真菌多样性分析，T3 处理最有利于马铃 薯产量提高和土壤改良。     

人工接种法鉴定评价西瓜枯萎病抗性新品种

西瓜枯萎病是西瓜产业中最为重要的土传病害之一，利用抗病品种仍然是最理想的防治途径，然而新培育的抗病品种引入其他地区后抗性容易丧失，因此了解新品种抗性特点有助于品种推广应用。本试验通过菌土接种法鉴定了8 个西瓜品种对枯萎病生理小种1 的抗性，并利用分子标记进行验证。结果显示，6 个供试西瓜新品种表现为中抗，与分子标记检测结果一致。其中申选958、申蜜968 和申蜜6 号在3 次不同时间的重复试验中抗性表现差异较大，表明其抗性对环境因子尤其是温度和湿度较敏感。申抗988 与申选958 具有相同的抗病亲本，且分子标记检测基因型一致，但在相同环境条件下二者抗性表现差异也较大，表明由于亲本材料不同，品种间可能存在不同的微效基因或基因互作方式。     

我国辣椒病毒病发生情况及发展趋势——基于2018年和2019年辣椒主产区的调查

为明确我国辣椒病毒病的种类和发展趋势，2018 年和2019 年在我国16 个省（市、自治区）辣椒主产区采集具有病毒病疑似症状的样品105 份，利用双抗体夹心酶联免疫吸附反应（DAS-ELISA）对12 种辣椒主要病毒进行检测。结果表明，有70 份样品为病毒病感染样品，病毒检出率为66.67%。检出病毒种类共10 种，其中辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus，PMMoV）检出率最高，为24.76%，其次为黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、蚕豆萎蔫病毒（Broad bean wilt virus，BBWV）、烟草蚀纹病毒（Tobacco etch virus，TEV）和番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV），检出率分别为19.05%、12.38%、12.38% 和10.48%。我国辣椒主产区多种病毒复合侵染发生较为普遍，病毒复合侵染率为40%，其中以2 种病毒复合侵染比例最高，为28.57%。通过对两年辣椒病毒病检测结果进行比较，12 种病毒中有7 种检出率有上升趋势。总体而言，PMMoV 和CMV 为近两年危害我国辣椒生产较为严重的病毒病；此外，PMMoV、BBWV_-1，2、TEV、TSWV 具有流行风险，需要严加防范。     

生防菌基质促进黄瓜幼苗生长及防治枯萎病的研究

采用平板对峙法从15种生防菌中筛选出对黄瓜枯萎病菌抑制效果较明显的4种生防菌NSY4、NSY19、NSY50、DSN012。以津研4号黄瓜品种为试材,研究4种生防菌基质对黄瓜幼苗生长及枯萎病防治的作用。结果表明,生防菌NSY4基质可显著提高黄瓜幼苗的株高、地上部鲜质量、地下部鲜质量、地上部干质量、总根长及根体积,分别比不添加生防菌的对照增加42.86%、26.09%、47.06%、58.82%、57.58%和51.44%;黄瓜根际基质酶活性显著高于对照,蔗糖酶、脲酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性分别比对照提高了16.20%、37.60%、71.88%、5.22%。添加生防菌的基质处理显著增加了根际基质中细菌、放线菌数量,减少了真菌、尖孢镰孢菌数量;对黄瓜枯萎病的防治效果达到25.00%～62.50%。因此,基质中接种生防菌可促进黄瓜植株生长,降低黄瓜枯萎病的发病率,其中添加生防菌NSY4的基质处理可显著促进黄瓜植株生长,有效缓解尖孢镰孢菌的侵害,对黄瓜枯萎病的防治效果最佳。     

转光膜对草莓生长及品质的影响

转光膜是一种可以吸收太阳光中部分紫外光，并将其转化为可为植物光合作用利用的蓝紫光和红橙光的功能性农膜。以草莓品种红颜为试材，研究转光膜对草莓生长及品质等的影响。结果表明，与普通膜相比，转光膜可使棚内日平均温度提高0.39 ℃，生育期积温增加75.0 ℃ ；盛果期，转光膜处理的草莓叶片净光合速率和叶绿素含量显著高于普通膜处理，分别增加了14.3% 和14.0%；转光膜处理能够显著促进草莓的早熟和增产，与普通膜相比，转光膜处理的草莓可提前10 d 成熟，每667 m² 增产219.9 kg；转光膜对改善果实品质有明显的促进作用，草莓第1 茬和第2 茬果实的VC 含量比普通膜处理分别增加了16.1%、24.4%，可溶性糖含量差异不显著。     

菌糠木霉混配基质对黄瓜的促生作用及对根腐病的防治效果

以绿色木霉菌糠发酵物为试验材料,研究了其与草炭、蛭石以不同比例(V/V)混配后对黄瓜幼苗生长的影响及对黄瓜根腐病的防治效果。结果表明,菌糠木霉混配基质T7(菌糠木霉∶草炭∶蛭石=1∶1∶1)、T9(菌糠木霉∶草炭∶蛭石=2∶1∶1)和T11(菌糠木霉∶草炭∶蛭石=1∶2∶1)的理化性质与对照(菌糠木霉∶草炭∶蛭石=0∶2∶1)相近。在接种病原菌30 d后,混配基质T7、T9、T11对黄瓜根腐病的防效分别为88.56%、78.34%、82.31%,均显著高于对照药剂甲基硫菌灵。综合来看,在黄瓜育苗试验中,以混配基质T7表现最好,其株高、茎粗、叶面积、叶绿素含量、侧根数、地上部干质量、地下部干质量和根系活力等指标分别为对照的117%、127%、171%、99.4%、170%、189%、237%和125%。用菌糠木霉发酵物作为育苗基质成分,不仅可以促进黄瓜幼苗生长,而且对黄瓜根腐病的防效较好。     

抗番茄灰霉病菌的内生短短芽孢杆菌W4菌株发酵条件优化

为提高内生短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）W4 菌株发酵液对番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）的抑菌活性，采用单因素试验与正交试验设计相结合，优化发酵培养基及发酵条件。结果表明，最佳发酵培养基为蛋白胨 2.0%、果糖 1.0%、NaCl 0.25%；最佳发酵条件为初始pH 8.0、接种种龄20 h、接种量5%、装液量50 mL（250 mL 三角瓶）、发酵温度35 ℃、摇床转速150 r·min^-1、发酵时间24 h。产生的发酵液稀释25 倍对番茄灰霉病菌的抑制率达92.8%，比未经优化得到的发酵液提高26.9 个百分点。通过培养基和发酵条件优化，显著提高了短短芽孢杆菌W4 发酵液活性，为进一步提取分离抗番茄灰霉病菌的活性成分奠定了基础。     

碱性土壤改良剂对盆栽黄瓜生长及枯萎病的防治效果

设施土壤长期连作导致的真菌病害发生与土壤理化性状变化密切相关,施用碱性土壤改良剂可以减轻设施酸化土壤上土传病害的危害。以黄瓜连作25 a的设施土壤为供试土壤,通过盆栽试验比较施用2.5 g · kg~(-1)腐植酸钾(pH 8.5)和硅钙钾镁肥(pH 9.96)两种碱性土壤改良剂对盆栽黄瓜生长及枯萎病的防治效果。结果表明:施用腐植酸钾和硅钙钾镁肥后,土壤pH比不施用改良剂的对照显著提高0.10和0.24个单位,促进了黄瓜幼苗生长,对黄瓜枯萎病的防治效果分别达到45.8%和51.3%,显著提高了土壤交换性钾含量。与腐植酸钾相比,硅钙钾镁肥的促生和抑病效果较显著。