灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.     

亚侧耳原生质体的制备与再生研究

主要探讨了亚侧耳原生质体制备和再生条件.结果表明,以0.6 mol·L-1.的NaCI配制成浓度为2%、pH值6.5的溶壁酶溶液,32℃恒温水浴酶解菌龄8 d的亚侧耳菌丝体3 h,获得原生质体的产量最高.0.6 mol·L-1的蔗糖作为再生培养基中的渗透压稳定剂时,再生率最高为6.0×10-2.     

秀珍菇原生质体再生条件优化

对秀珍菇菌丝原生质体再生条件进行了优化。结果表明,秀珍菇原生质体适宜的再生培养基为:马铃薯200 g,蔗糖20 g,KH_2PO_4 3.0 g,MgSO_4·7H_2O1.5 g,维生素B_1 0.1 g,0.6 mol/L甘露醇。采用上述培养基,原生质体再生率达到0.85%。     

猪苓原生质体制备与再生条件的研究

采用L16(4)正交设计,得出猪苓原生质体制备最佳条件是取菌龄7d的菌丝体,以2%溶壁酶,0.6mol·L-1甘露醇作为渗透压稳定荆,在33℃下酶解3h,原生质体数达到2.62×107个·mL-1.原生质体再生的最佳条件是取菌龄5d的菌丝体.以2%溶壁酶,0.6mol·L-1蔗糖作为渗透压稳定剂,在27℃的条件下,酶解3h.猪苓原生质体再生的最佳培养基为葡萄糖10g、麦芽糖5g、酵母粉4g、0.6mol·L-1甘露醇、琼脂5.5g,定容到1 000mL.再生率可达到0.65%.     

姬松茸原生质体制备及再生条件优化

以姬松茸JS01为试材,通过单因素试验和正交实验,利用SPSS 22.0软件进行分析,对姬松茸原生质体的制备及再生条件进行优化,以提高姬松茸原生质体产量和再生率。首次通过在再生培养基中添加细胞壁前体物质及营养因子,进一步提高姬松茸原生质体的再生率。结果表明:原生质体最佳制备条件为菌龄7d,以0.6mol·L~(-1) KCl作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度1.5%,酶解温度30℃,酶解时间4.0h,pH 6.0,在该条件下原生质体产量高达1.97×10~7个·mL~(-1);菌龄6d,以0.6mol·L~(-1) MgSO_4作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度2.0%,酶解温度30℃,酶解时间3.0h,pH 6.5,再生培养基为GM时,原生质体的再生率最高,为1.12%。再生培养基中添加纤维二糖和维生素B_1后,再生率为1.17%,较优化结果提高了4.46%。该研究为姬松茸在菌种提纯复壮、原生质体诱变、原生质体融合育种、原生质体基因组重排等遗传学研究提供参考依据。     

食用百合试管苗原生质体制备条件的优化

以龙牙百合试管再生苗小鳞茎为试材,利用正交试验优化原生质体制备参数,并探讨酶解振荡速度、酶解时间、原生质体收获时离心速度和原生质体纯化媒介蔗糖浓度等对原生质体产量的影响。结果表明:1.0%纤维素酶、1.0%果胶酶酶解继代培养40d的试管再生苗鳞茎3h,酶解时振荡速度50r·min-1,收获原生质体时离心条件为700r·min-1、6min,获取的原生质体最后用25%蔗糖纯化的组合条件最佳,1g鳞茎能获得6.60×106个·m L-1活原生质体。     

新疆阿魏菇高效原生质体分离与再生体系的建立

以新疆阿魏菇为材料,研究了阿魏菇原生质体分离、再生体系建立的影响因素,建立了稳定的新疆阿魏菇原生质体分离、再生体系,并通过出菇验证了该体系的可利用性。结果显示,在35℃、0.6mol/LKCl稳渗剂条件下,菌龄为8d阿魏菇菌丝体(0.1g)在0.8mL酶解液中(1.5%离析酶+0.5%纤维素酶+2%溶菌酶)制备原生质体,酶解3h获得原生质体达5×106个/mL;在0.8mol/L蔗糖稳渗剂下,原生质体再生时间为16d,其再生率可达0.6%。出菇试验表明,获得的原生质体具有较强的恢复能力,能够与对照组在同样条件下正常出菇。从细胞水平上探索一条食用菌育种新途径,为发展和完善食用菌新菌株选育提供理论依据和技术借鉴。     

黑木耳原生质体制备、再生及单核体荧光鉴定

利用正交试验研究了黑木耳原生质体制备、再生的最佳条件,结果表明,原生质体制备最佳条件是酶解温度31℃、酶浓度1．0％、菌龄5d、酶解时间4h,原生质体再生的最佳条件是酶解温度27℃、酶解时间4h、酶浓度1．5％、菌龄11d。稳渗剂种类对黑木耳原生质体再生率的试验结果表明,采用0．5mol／L蔗糖为稳渗剂,各黑木耳菌株的原生质体再生率最高。HW2号菌株原生质体经核染色其单核化比率最高;在荧光显微镜下观察菌丝核相,单、双核清晰可辨。     

凤尾菇菌丝原生质体的分离与再生

本文利用一种自制的真菌细胞壁溶解酶——溶壁酶(Lywallzyme),通过酶解试验比较了菌龄、渗透压稳定剂、酶解温度及酶解时间等对凤尾菇菌丝原生质体分离的影响。通过原生质体的再生试验,系统地比较了菌龄、渗透压稳定剂和酶解时间及再生培养基对凤尾菇菌丝原生质体再生频率的影响,从而找到凤尾菇茵丝原生质体分离和再生的较适条件。在适宜的酶解条件下可分离到大量有活力的原生质体,其产量最高可达3×10~7个/me以上。本试验中,原生质体的再生频率最高为4.98％。同时,本文还对凤尾菇菌丝原生质体再生过程的形态变化作了适当描述。     

影响灵芝原生质体再生的几个因素

本文比较系统地研究了培养基、酶解时间及单双层培养法等因素对灵芝原生质体再生的影响。结果表明,纤维二糖培养基及双层培养法比较适合灵芝原生质体再生。考虑到灵芝原生质体的得率以及不同酶解时间制备的灵芝原生质体的再生率,酶解2.5h的灵芝原生质体用于再生比较合适。     

双孢蘑菇同核原生质体育种技术研究：Ⅰ.同核原生质体的分离与鉴定

通过对溶壁酶组成及浓度,渗透压稳定剂、菌丝培养方法等研究,建立了有效的双孢蘑菇原生质体制备与再生系统。采用1.5％Lywallzyme、0.6M KCl为渗透压稳定剂,25℃酶解4小时,原生质体的产量可达到10~7个/ml;纯化后的原生质体在0.6M蔗糖为渗透压稳定剂的PDMA培养基中,25℃恒温培养5～7天,再生率达1%以上,根据原生质体再生菌落出现时间的先后顺序,并以菌落形态特征、菌丝生长速度。羧甲基纤维素酶(Cx酶)活性及子实体形成能力上的差异为鉴定同核体的主要标记,从两种形态类型,不同来源的12个双孢蘑菇菌株中均分离到同核原生质体,同核率为2％～15%,平均为11.75％。     

秀珍菇原生质体高效制备与再生研究

为建立秀珍菇原生质体的高效制备体系,以夏秀作为供试菌株,采用正交试验法研究影响秀珍菇原生质体制备和再生的条件,对菌龄等7个单因素、 4个复合因素条件和接种方式进行系统研究。结果显示,秀珍菇菌丝在改良液体PD培养基中摇瓶培养5 d,以0.6 mol·L~(-1)甘露醇为稳渗剂, 2.5%溶壁酶在30℃条件下水浴4 h,得到的原生质体浓度最大,为4.23×107个·mL~(-1)。在TB3再生培养基中采用单层混菌法接种原生质体,其再生率最大,为2.35%。     

云芝菌丝体原生质体制备与再生条件的研究

研究了不同酶种类、酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂、pH值及菌龄等因素对云芝原生质体制备以及不同再生培养基对云芝原生质体再生的影响。结果表明,菌龄3d的云芝菌丝体用3％溶壁酶,以pH5．5,0．4mol／L的KCl为稳定剂,30℃酶解5h获得的原生质体产量最高;用RMl再生培养基培养,原生质体再生率最高。     

毛木耳原生质体制备与再生条件的研究

通过对毛木耳原生质体制备与再生条件的系统研究,确定了原生质体制备的最佳出发菌龄、融壁酶浓度、酶解温度及酶解时间、渗透压稳定剂种类、浓度及最佳再生培养基配方。     

灵芝菌丝原生质体形成与再生的研究

本文探讨了灵芝 (Ganodermalucidum)菌丝原生质体的制备及再生的条件。实验结果表明 :采用MYG为灵芝菌丝培养基 ,2 %真菌溶壁酶 (Lywallzyme)作脱壁酶 ,0 6mol/L甘露醇作渗透压稳定剂 ;对培养 6d的灵芝菌丝在 30℃下进行酶解 ,酶解时间 4- 6h ,可产生约 3 0× 1 0 6个 /mL (0 1g菌丝 )原生质体 ,并在添加灵芝子实体浸出汁的双层培养基上实现了灵芝菌丝原生质体的再生。     

白灵菇原生质体制备与再生的研究

详细研究了酶系统、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间、pH值、菌龄等因素对白灵菇(Pleurotusnebrodensis)原生质体制备与再生的影响。通过单因素和正交实验确定最适条件为:采用7日龄菌丝,以0.6M甘露醇作为渗透压稳定剂,pH5.8时,在1.5%溶壁酶 0.2%蜗牛酶 0.3%纤维素酶的作用下,32℃水浴酶解2.5～3h,可得到1.7×107/mL原生质体,再用双层混合再生培养基培养,可达到1.3%再生率。     

松茸原生质体制备与再生的研究

本文针对酶种类及其浓度 ,酶解时间、渗透压稳定剂的种类及其浓度、菌龄及菌丝形态等对松茸菌丝原生质体制备与再生影响的研究。结果表明 ,采用三角摇瓶培养 3 d后、静置培养60 h的松茸菌丝体 ,在 3 0℃ ,p H6.5的条件下 ,以 0 .6M蔗糖为渗透压稳定剂 ,通过 2 .5 %溶壁酶、0 .5 %崩溃酶的复合酶进行2 .5 h酶解 ,松茸原生质体制备率与再生率最高     

灵芝原生质体形成与再生的研究

该文通过对原生质体形成与再生条件如酶类、渗透压稳定剂、ｐＨ、培养基、菌龄、酶解温度和时间等因素的研究表明,以Ｄ培养基、葡萄糖为渗透压稳定剂,酶液浓度为１５％Ｌｙｗ＋０２％Ｌｙｓ,ｐＨ４５～５５,培养菌龄为７２～９６ｈ,酶解温度为２０～２５℃条件下,酶解６０～９０ｍｉｎ,其破壁效果为最佳,原生质体形成和再生率都最高。     

平菇P16原生质体制备条件研究

以平菇P16菌丝体为底物,利用溶壁酶进行原生质体制备,考察菌丝培养条件及酶解因素对原生质体制备的影响,从而确定原生质体制备最佳条件。结果表明:原生质体制备的条件为菌丝培养采用MYP液体培养基培养3 d后更换新鲜的培养基继续培养2 d、国产1.5%溶壁酶30℃酶解4 h,在此条件下原生质体浓度达到10~8个/mL。     

滲透压稳定剂对桑黄菌原生质体分离与再生的影响

用6种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂，研究桑黄菌原生质体的分离与再生情况。结果表明，用不同的酶解渗透压稳定剂，桑黄菌原生质体的分离产量差异很大，体积形态也有差异。酶解和培养基渗透压稳定剂对桑黄菌原生质体的再生有显著影响，甘露醇为培养基渗透压稳定剂时再生率较高。