香菇YJ-01原生质体制备与再生条件的优化

以香菇菌株YJ-01为试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响。通过单因素试验,选出了4个因素(酶解温度、酶解时间、菌龄和稳渗剂浓度)利用四因素二次通用旋转设计进行优化。结果表明:(1)YJ-01原生质体最佳制备条件:pH 5.0,0.5 mol/L MgSO_4溶液作稳渗剂,对5日龄菌丝体于28℃条件下酶解3 h。各因素对原生质体产量的影响作用依次为酶解温度酶解时间菌龄稳渗剂浓度。(2)YJ-01原生质体最佳再生条件为,当p H 5.5,以0.5 mol/L蔗糖溶液作稳渗剂,对6.5日龄菌丝体在27.8℃酶解2.9 h。各因素对原生质体再生率的影响作用依次:稳渗剂浓度酶解时间菌龄酶解温度。     

银耳菌丝原生质体分离和再生研究

以菌株Tr01为材料，研究了不同菌龄、溶壁酶浓度、酶解温度、稳渗剂对银耳工力丝在的原生质体产量及不同稳渗剂对原生质再生的影响。结果表明，原生质体分离的最佳条件为：菌丝菌龄9天，酶液浓度2％，稳渗剂0.4mol/L硫酸镁，在34℃下酶解4h，原生质体以0.4mol/L甘露醇作稳渗剂再生率较高，为1.13%。     

白灵菇原生质体制备及再生的研究

研究了酶解时间、酶解温度、菌龄和渗透压稳定剂对白灵菇原生质体制备与再生的影响。结果表明，自灵菇用1％蜗牛酶与1％纤维素酶的混合酶液制备原生质体，酶解时间应控制在3h之内，以2h为最宜；酶解温度28℃左右；适宜菌龄为5目龄；以0．6mol／L蔗糖配制酶解液和作为制备与再生渗稳剂均最优，再生率最高，可达2．1％，比以甘露醇作为渗稳剂再生率提高近3倍。     

云芝菌丝体原生质体制备与再生条件的研究

研究了不同酶种类、酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂、pH值及菌龄等因素对云芝原生质体制备以及不同再生培养基对云芝原生质体再生的影响。结果表明,菌龄3d的云芝菌丝体用3％溶壁酶,以pH5．5,0．4mol／L的KCl为稳定剂,30℃酶解5h获得的原生质体产量最高;用RMl再生培养基培养,原生质体再生率最高。     

血耳原生质体制备及其再生条件研究

采用L16(45)正交设计方法探讨了酶解体系、酶解温度、酶解时间、菌龄、渗稳剂对血耳原生质体制备及其再生的影响。结果表明:静置培养5 d菌丝体以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,采用1%溶壁酶+1%蜗牛酶,32℃酶解3 h,制备率为2.950×107个/mL,其再生率可达4.508×10~(-3)。     

灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.     

秀珍菇原生质体高效制备与再生研究

为建立秀珍菇原生质体的高效制备体系,以夏秀作为供试菌株,采用正交试验法研究影响秀珍菇原生质体制备和再生的条件,对菌龄等7个单因素、 4个复合因素条件和接种方式进行系统研究。结果显示,秀珍菇菌丝在改良液体PD培养基中摇瓶培养5 d,以0.6 mol·L~(-1)甘露醇为稳渗剂, 2.5%溶壁酶在30℃条件下水浴4 h,得到的原生质体浓度最大,为4.23×107个·mL~(-1)。在TB3再生培养基中采用单层混菌法接种原生质体,其再生率最大,为2.35%。     

新疆阿魏菇高效原生质体分离与再生体系的建立

以新疆阿魏菇为材料,研究了阿魏菇原生质体分离、再生体系建立的影响因素,建立了稳定的新疆阿魏菇原生质体分离、再生体系,并通过出菇验证了该体系的可利用性。结果显示,在35℃、0.6mol/LKCl稳渗剂条件下,菌龄为8d阿魏菇菌丝体(0.1g)在0.8mL酶解液中(1.5%离析酶+0.5%纤维素酶+2%溶菌酶)制备原生质体,酶解3h获得原生质体达5×106个/mL;在0.8mol/L蔗糖稳渗剂下,原生质体再生时间为16d,其再生率可达0.6%。出菇试验表明,获得的原生质体具有较强的恢复能力,能够与对照组在同样条件下正常出菇。从细胞水平上探索一条食用菌育种新途径,为发展和完善食用菌新菌株选育提供理论依据和技术借鉴。     

猴头菌融合育种原生质体制备与再生条件优化

以猴头菌0605为试材,采用单因素试验和正交实验,研究了酶系统、酶解时间、酶解温度、菌龄、恒温摇床转速单因素对其原生质体制备与再生的影响。结果表明:原生质体制备和再生的最佳条件为菌龄10 d的菌丝体,在酶系统2.0%溶壁酶+0.5%崩溃酶作用下,32℃酶解2.5 h,恒温摇床转速为120 r·min-1。该试验在最佳条件下获得的猴头菌原生质体数量与再生率均较高,为进一步开展猴头菌原生质体融合育种奠定基础。     

姬松茸原生质体制备及再生条件优化

以姬松茸JS01为试材,通过单因素试验和正交实验,利用SPSS 22.0软件进行分析,对姬松茸原生质体的制备及再生条件进行优化,以提高姬松茸原生质体产量和再生率。首次通过在再生培养基中添加细胞壁前体物质及营养因子,进一步提高姬松茸原生质体的再生率。结果表明:原生质体最佳制备条件为菌龄7d,以0.6mol·L~(-1) KCl作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度1.5%,酶解温度30℃,酶解时间4.0h,pH 6.0,在该条件下原生质体产量高达1.97×10~7个·mL~(-1);菌龄6d,以0.6mol·L~(-1) MgSO_4作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度2.0%,酶解温度30℃,酶解时间3.0h,pH 6.5,再生培养基为GM时,原生质体的再生率最高,为1.12%。再生培养基中添加纤维二糖和维生素B_1后,再生率为1.17%,较优化结果提高了4.46%。该研究为姬松茸在菌种提纯复壮、原生质体诱变、原生质体融合育种、原生质体基因组重排等遗传学研究提供参考依据。     

单核和同核原生质体技术在食用菌遗传育种上的应用

单核和同核原生质体是食用菌原生质体技术中的一个重要研究内容,由于单核和同核原生质体是没有经过减数分裂形成的无性后代,为食用菌遗传和育种研究提供了一个重要的材料。本文阐述了食用菌单核和同核原生质体的发现和作用以及在食用菌遗传研究上的应用前景。     

预处理条件对石斛兰叶片原生质体分离的影响

试验研究了不同预处理条件对石斛兰叶片原生质体分离的影响,结果表明：预处理可以提高原生质体的产量,石斛兰叶片原生质体分离最佳预处理方法为：12 h黑暗条件萎蔫处理,0.4mmol/L CaCl2浸泡16 h,0.5 mol/L甘露醇浸泡16 h。     

花粉原生质体培养技术研究进展

 对不同发育时期的花粉原生质体分离效果和分离方法以及培养效果的研究进展进行了综述。     

食用菌巨原生质体的初步研究

糙皮侧耳菌丝体在含2.5％溶壁酶的0.6M KC1高渗稳定液中,25℃说解48～57小时,或在37℃酶解4小时后再在25℃酶解47小时,皆可产生直径36.84μm左右的巨原生质体,较一般正常原生质体增大7～10倍左右。观察巨原生质体超微结构,发现其中液泡体积相应增加、线粒体和内容物增多、细胞核数目没有变化,并观察到巨原生质体的再生。     

桃红平菇原生质体诱变营养缺陷型突变体

从桃红平菇单核菌丝分离出原生质体铺于含0.6mol/l蔗糖的CM表面,经紫外线处理一定时间后,培养7—10天后长出的菌落被转于MM之上,在其上生长十分缓慢或停止的菌落通过各种营养添加物测其营养需求,最后得到一个需要补充丙氨酸和天冬氨酸才能正常生长的双缺突变体。试验表明,该突变体能很好地分离出原生质体,且在含0.6mol/l蔗糖的MM上不能再生,因而具有较好的应用前景。     

‘富士’苹果花粉原生质体分离初探

以‘富士’苹果（Malus × domestica Borkh.‘Fuji’）成熟花粉为试材,采用“萌发—酶解二步法”,初步探讨了影响原生质体分离的关键因子,获得了花粉原生质体分离的最佳条件：用萌发后45 min的花粉,转入含1%纤维素酶和1%离析酶的混合酶液中,以18%甘露醇调节渗透压,静置酶解6 h,花粉原生质体分离效率可达6.83%,用0.1%荧光增白剂检测表明脱壁完全,用0.01% FDA检测表明其具有生活力,可以作为后续细胞融合等的材料。     

马铃薯花粉原生质体分离的研究

以马铃薯减数分裂二分体和四分体时期的小孢子为材料，对原生质体分离的主要影响因素进行了研究。结果表明，１％蜗牛酶和０．５％崩溃酶的混合酶液游离效果最好，原生质体的最高得率达６５．４％。渗透压调解剂以蔗糖最好，甘露醇次之，最适浓度分别为１６％和１８％。０．１％荧光增白剂检测表明脱壁完全，ＦＤＡ荧光检测表明花粉原生质体具有生活力。     

秋水仙素诱变对桑黄菌丝生长及活性成分的影响

以1.0%纤维素酶和0.5%蜗牛酶不同处理时间的桑黄菌丝为试材,采用0.1%秋水仙素诱变桑黄菌丝研究其诱变下桑黄菌丝再生菌株的生长速率以及多糖、黄酮和三萜等活性成分含量变化,以期获得生长快且活性成分含量高的菌种,以期为桑黄菌株选育、种质资源创新和应用奠定基础。结果表明:秋水仙素诱变后桑黄菌丝再生菌株的生长速率以及多糖、黄酮和三萜等活性成分含量基本呈增加趋势。其中,与对照相比,诱变酶解桑黄菌丝20 min获得的再生菌株20-1生长速率最快,增加了366.67%;三萜和多糖含量最高的再生菌株为10-5,分别增加了1069.73%和281.85%;多酚含量最高的再生菌株为5-1,增加了530.56%;黄酮含量最高的再生菌株为30-1,增加了3771.43%。     

松口蘑菌丝原生质体分离条件的研究

本文比较了不同酶浓度、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间、酶解系统pH值和菌丝生理状况等因素对松口蘑菌丝原生质体分离的影响。实验结果表明,1克菌丝采用2％单一溶壁酶LYWALLZYME以0.6M甘露酵作渗透压稳定剂,pH6.5,30℃下酶解4小时,可得到10~7/ml原生质体。     

柑桔原生质体融合再生出叶肉亲本类型植株

粗柠檬(Citrus jambhiri Lush)叶肉原生质体与哈姆林甜橙(C.sinensis Osbeck)悬浮细胞系原生质经聚乙二醇(PEG)诱导融合、再生的植株中,除体细胞杂种外,发现两棵为二倍体,与其亲本一样,2n=2x=18。这两棵植株叶片形态似粗柠檬。GOT、SOD及POX 3种同工酶分析结果显示,其酶带与粗柠檬基本相同,但个别带纹有差异。本文就这类植株的来源问题作了讨论。