香菇YJ-01原生质体制备与再生条件的优化

以香菇菌株YJ-01为试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响。通过单因素试验,选出了4个因素(酶解温度、酶解时间、菌龄和稳渗剂浓度)利用四因素二次通用旋转设计进行优化。结果表明:(1)YJ-01原生质体最佳制备条件:pH 5.0,0.5 mol/L MgSO_4溶液作稳渗剂,对5日龄菌丝体于28℃条件下酶解3 h。各因素对原生质体产量的影响作用依次为酶解温度酶解时间菌龄稳渗剂浓度。(2)YJ-01原生质体最佳再生条件为,当p H 5.5,以0.5 mol/L蔗糖溶液作稳渗剂,对6.5日龄菌丝体在27.8℃酶解2.9 h。各因素对原生质体再生率的影响作用依次:稳渗剂浓度酶解时间菌龄酶解温度。     

黑木耳原生质体制备、再生及单核体荧光鉴定

利用正交试验研究了黑木耳原生质体制备、再生的最佳条件,结果表明,原生质体制备最佳条件是酶解温度31℃、酶浓度1．0％、菌龄5d、酶解时间4h,原生质体再生的最佳条件是酶解温度27℃、酶解时间4h、酶浓度1．5％、菌龄11d。稳渗剂种类对黑木耳原生质体再生率的试验结果表明,采用0．5mol／L蔗糖为稳渗剂,各黑木耳菌株的原生质体再生率最高。HW2号菌株原生质体经核染色其单核化比率最高;在荧光显微镜下观察菌丝核相,单、双核清晰可辨。     

银耳菌丝原生质体分离和再生研究

以菌株Tr01为材料，研究了不同菌龄、溶壁酶浓度、酶解温度、稳渗剂对银耳工力丝在的原生质体产量及不同稳渗剂对原生质再生的影响。结果表明，原生质体分离的最佳条件为：菌丝菌龄9天，酶液浓度2％，稳渗剂0.4mol/L硫酸镁，在34℃下酶解4h，原生质体以0.4mol/L甘露醇作稳渗剂再生率较高，为1.13%。     

血耳原生质体制备及其再生条件研究

采用L16(45)正交设计方法探讨了酶解体系、酶解温度、酶解时间、菌龄、渗稳剂对血耳原生质体制备及其再生的影响。结果表明:静置培养5 d菌丝体以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,采用1%溶壁酶+1%蜗牛酶,32℃酶解3 h,制备率为2.950×107个/mL,其再生率可达4.508×10~(-3)。     

灵芝原生质体制备与再生条件的研究

本文研究了不同酶浓度、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂及菌龄等对灵芝菌丝原生质体制备与再生的影响，结果表明，菌龄为60h的菌丝，采用浓度为2％的溶壁酶以0．6M的甘露醇作渗透压稳定剂于pH6.5，30℃下酶解2h，当酶解液中湿菌体含量对0．1g/mL时，其原生质体数可达2^*10^7个/mL，且再生率达8．5％。     

云芝菌丝体原生质体制备与再生条件的研究

研究了不同酶种类、酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂、pH值及菌龄等因素对云芝原生质体制备以及不同再生培养基对云芝原生质体再生的影响。结果表明,菌龄3d的云芝菌丝体用3％溶壁酶,以pH5．5,0．4mol／L的KCl为稳定剂,30℃酶解5h获得的原生质体产量最高;用RMl再生培养基培养,原生质体再生率最高。     

糙皮侧耳原生质体制备与再生条件

原生质体制备是通过体杂交或基因转导进行种质改良的基础。探讨了糙皮侧耳原生质体制备及再生条件。用ＭＹＧ培养菌丝，以甘露醇为稳渗剂，用１．５％溶壁酶Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ进行酶解脱壁，在菌龄７天，酶液ｐＨＷＦＨＧ４．５，温度２８℃，酶解４ｈｒ的条件下原生质体产量最高（２０×１０＾６／ｍｌ，０．１ｇ湿菌丝），其再生率大于８％，菌丝培养前对接种物进行予切碎处理可进一步使产量提高约２倍，而再生率不并显著下降。     

新疆阿魏菇高效原生质体分离与再生体系的建立

以新疆阿魏菇为材料,研究了阿魏菇原生质体分离、再生体系建立的影响因素,建立了稳定的新疆阿魏菇原生质体分离、再生体系,并通过出菇验证了该体系的可利用性。结果显示,在35℃、0.6mol/LKCl稳渗剂条件下,菌龄为8d阿魏菇菌丝体(0.1g)在0.8mL酶解液中(1.5%离析酶+0.5%纤维素酶+2%溶菌酶)制备原生质体,酶解3h获得原生质体达5×106个/mL;在0.8mol/L蔗糖稳渗剂下,原生质体再生时间为16d,其再生率可达0.6%。出菇试验表明,获得的原生质体具有较强的恢复能力,能够与对照组在同样条件下正常出菇。从细胞水平上探索一条食用菌育种新途径,为发展和完善食用菌新菌株选育提供理论依据和技术借鉴。     

厚环乳牛肝的原生质体分离与再生

探讨了外生菌根菌耳环乳牛肝（Ｓｕｉｌｌｕｓｇｒｅｖｉｌｌｅｉ）的原生质体制备及再生条件。用ＭＹＧ培养基培养菌丝７天、宋用１．５％Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ，以０．６ｍｏｌ甘露醇为稳渗剂，在酶解液ｐＮ值５．５，温度３１℃，酶解４ｈｒ的条件下，每０．１ｇ湿菌丝的原生质体产量这６×１０￣６／ｍｌ。用ＳＯ培养基培养菌丝能提高原生质体产量，但再生率下降。综合产量和再生率考虑以ＭＹＧ培养菌丝效果较好。     

灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.