苹果花脸症状相关基因差异表达的分析

【目的】苹果花脸病主要由苹果锈果类病毒（apple scar skin viroid,ASSVd）引起，是一种严重危害苹果产量和果实品质的病害，通过分析苹果花脸症状相关基因表达，探索花脸症状形成的潜在机制。【方法】削取无症状且无ASSVd侵染的果皮和表现花脸症状的弘前富士苹果果皮，提取果皮总RNA，通过高通量测序并进行转录组数据分析。【结果】利用RT-PCR方法从表现花脸症状的苹果果皮中得到两条ASSVd序列，其基因组长度分别为331 nt和330 nt，与已公布的ASSVd山东烟台苹果分离物SDYT-1(MW302328.1)和SDYT-3(MW315909.1)完全一致。转录组测序结果表明，与无症状果皮相比，表现花脸症状的果皮中共有差异表达基因6938个，其中有3331个基因显著上调，3607个基因显著下调。通过差异表达基因功能注释分析，表明这些差异基因参与到植物激素（茉莉酸、水杨酸和生长素）合成和信号转导、苯丙烷生物合成等代谢途径。此外，转录组数据分析发现与植物防御反应相关转录因子的编码基因，如MdWRKY18-like、MdWRKY71、MdNAC29、MdWRKY70等在表现...     

苹果锈果类病毒实时荧光PCR检测方法的建立

【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能检测至1×10-6的模板浓度,而常规RT-PCR只能检测至1×10-4,由此可知,实时荧光PCR体系灵敏度高于常规RT-PCR 100倍;引物特异性强,能特异检测ASSVd,对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)均不能检出;适用性广,可检测出植物不同部位的ASSVd。【结论】所建立的方法能够灵敏检测ASSVd,特异性强,适用性广。     

河北保定地区苹果锈果类病毒分离物的序列分析

以采自河北保定的苹果锈果类病毒(apple skin scar viroid,ASSVd)样本为试材,采用用RT-PCR方法对样本中的ASSVd全基因组序列进行扩增,然后利用生物学软件MEGA 6.0对该分离物与已发表的其它分离物序列构建系统发育树,对系统进化关系进行分析。结果表明:ASSVd保定分离物基因组全长332nt,将序列提交到GenBank,登录号为KR264032。该分离物与已发表的其它13个来自不同寄主、不同国家的ASSVd分离物间进化关系极近,核苷酸相似性为92%~99%。与加拿大苹果上的X71599株系亲缘关系最近,相似性为99%,仅在第221位有一个碱基差异,与新疆梨上的JX861259株系亲缘关系最远。系统发育分析表明,不同地区的ASSVd分离物聚类没有规律性,说明ASSVd不存在地区专化性。新疆梨、桃、杏、苹果不在同一分支,说明ASSVd可能存在一定的寄主特异性。二级结构预测表明,该分离物的中央保守区与末端保守区与ASSVd其它序列相同。     

苹果锈果类病毒山东文登峰山分离物的克隆

苹果锈果病又名花脸病或裂果病,是严重影响苹果生产的主要病毒病之一.广泛分布于东北、西北、华北各苹果产区,目前仍有扩大蔓延趋势.其病原物为苹果锈果类病毒（Apple scar skin viroid,ASSVd）,主要侵染苹果和梨,最新研究发现还可侵染桃、杏、樱桃核果类果树.感病苹果因品种和环境条件的变化果实表现为5种病状：锈果型、花脸型、锈果-花脸型、环斑型和绿点型,发病较重的果实发生畸形龟裂,大大降低果品的食用价值和经济价值.对文登峰山地区富士苹果进行ASSVd扩增和克隆,以期明确ASSVd在文登地区富士苹果上的变异情况.     

新疆杏树苹果锈果类病毒的检测与全序列分析

 在以往研究苹果锈果类病毒ASSVd的基础上,以通过斑点杂交检测ASSVd为阳性的杏树为试验材料,利用RT-PCR技术扩增出苹果锈果类病毒全长特异片段,通过回收克隆测序,发现杏树苹果锈果类病毒基因组长为330nt,将克隆测序结果在GenBank中登录,获得10条序列,登录号为：EU031487－EU031496。在此基础上,利用原位RT-PCR检测技术,进一步证明杏树叶片中有苹果锈果类病毒存在,主要分布在细胞核中。该研究证实苹果锈果类病毒也能侵染杏树,丰富了苹果锈果类病毒的寄主。     

‘凯特’杏成熟期果面遇雨积水是裂果的主要诱因

【目的】明确‘凯特’杏果实不同发育时期水分运输情况,阐明引发成熟期裂果的主要原因。【方法】跟踪杏发育进程,分别于果实第一次快速生长期、硬核期、第二次快速生长期、成熟期进行采样。品红示踪试验中,将带有杏果和叶片的枝条浸入品红溶液中,每隔30 min观察1次;每次选留3~5颗完好的果实,将果实果柄完整取下并在果实中部切取1 cm3小块,投入预冷的FAA固定液中,4℃冷藏1周后,对切块进行常规石蜡切片处理;采用TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术有限公司)对不同发育时期果皮细胞活性进行检测;每次采样后切取新鲜的果实表皮,对其进行曲利苯蓝染色,观察果皮细胞死亡程度。【结果】‘凯特’杏发育前期,品红溶液均能较顺畅地运输至果实,进入成熟期后品红溶液运输十分困难。杏果发育过程中,果柄导管均保持较畅通状态。杏果实发育后期,果皮细胞出现较多由表皮毛退化形成的"缺口",有的"缺口"直接与皮下层细胞相连。随果实发育进行,‘凯特’杏果皮发生明显的细胞凋亡和死亡现象,且果锈及其周边部位细胞死亡较为严重。【结论】‘凯特’杏发育后期,虽然果柄导管未发生明显的异化,且水分运输功能正常,但内果皮(果核)木质化加剧且与果柄"对接",使根系吸水难以大量进入果实。同时,果实表皮毛退化、表皮细胞出现"缺口",且果皮细胞凋亡、局部死亡,为果实表面水分大量进入果实打开了通道。     

山东鲜食葡萄主要类病毒的鉴定及序列分析

【目的】通过对山东省鲜食葡萄主产区采集的149份疑似感病葡萄叶片进行RT-PCR检测,明确本地区类病毒的发生情况及种类,并进行序列分析。【方法】提取叶片总RNA后,用目前国内报道的葡萄黄斑类病毒1(Grapevine yellow speckle viroid 1,GYSVd1)、葡萄黄斑类病毒2(Grapevine yellow speckle viroid 2,GYSVd2)、澳大利亚葡萄类病毒(Australian grapevine viroid,AGVd)、啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)和柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)的特异性引物对采集的具有黄化、斑驳、皱缩和畸形症状的葡萄叶片进行RT-PCR检测并测序,同时建立系统进化树。【结果】GYSVd1、GYSVd2、AGVd和HSVd均得到了预期大小的目的片段。测序表明,山东省鲜食葡萄主产区GYSVd1、GYSVd2、AGVd和HSVd的分离物序列与Gen Bank已报道分离物序列一致性均超过90%。【结论】山东省鲜食葡萄主产区受到上述4种类病毒的侵染,并且在自然条件下常发生复合侵染。其中GYSVd2为山东首次报道。     

内蒙古赤峰地区番茄斑萎病毒的鉴定

利用番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)通用引物及自行设计合成引物对采集自内蒙古自治区赤峰市部分地区的番茄病毒病样品进行了RT-PCR检测及序列测定;进一步利用特异性引物对包含N基因在内核苷酸序列进行扩增、克隆和测序,并对包含N基因的914 nt序列进行系统进化分析。结果表明,在采集的16个表现TSWV症状和2个未表现典型症状的果实样品中均检测到TSWV;TSWV内蒙古番茄分离物与中国云南、江苏等地的分离物亲缘关系最近。用表现TSWV症状的番茄果实汁液摩擦接种辣椒叶片,出现叶片褪绿、植株矮小等症状,并经RT-PCR分析检测到TSWV。本研究证实在内蒙古地区有TSWV在番茄上发生危害。     

苹果锈果病和苹果果锈病发病规律和防治方法

苹果锈果病和苹果果锈病是两种不同的果树病害,为正确区分两种果树病害,现将两种病害的症状、发病条件和防治方法介绍如下。1苹果锈果病1.1症状苹果锈果病又称"花脸病"、"裂果病"。症状主要表现在果实上。某些品种的幼树及成树的枝叶上,易显症。果实上的症状因品种、环境条     

苹果锈果病与苹果果锈病的区别─—答闫康平等八名同志

苹果锈果病与苹果果锈病的区别─—答闫康平等八名同志苹果锈果病与苹果果锈病是两种性质不同的病害。前者是由一种类病毒引起的，而后者是生理原因所致。因此二者不能混为一谈，在防治上应采取不同的对策。首先要准确地进行诊断，从症状上加以区别，才能对症治疗，有效的进行防治。苹果锈果病的症状主要表现在果实上；常表现为三种类型。①锈果型：西洋苹果中大部分品种的病果表现为这一类型。如国光品种，病果在落花后约一个月，顶部先发生深绿色的水渍状变色部分，逐渐沿果面纵向扩展，并发展成为与心室顶部相对的五条规整的斑纹。此五条斑纹逐渐木栓化变成铁锈色病斑。随着果实的生长，锈斑龟裂，果面粗糙，甚至果皮裂开。②花脸型：槟子、沙果、海棠等的病果常表现的一种症状。倭锦、元帅、祝光等也表现这种症状。病果在着色前无明显变化，着色后在果面上散生很多近圆形成熟时不变红的黄绿色斑块。至果实成熟后，变为红、绿相间的花脸状；③锈果花脸型：病果上表现有锈斑和花脸的复合症状。病果在着色前，多在果顶部发生明显的锈斑，或在果面散生零星斑块。着色后，在未发生锈斑的部分或锈斑周围发生不着色的斑块，呈花脸状。此三种症状类型，有时在不同品种和不同条件下单独表现某一症状，有时在